Что такое dif в анализе крови

Общий анализ крови 5 diff — это исследование качественного и количественного состава элементов крови. 

Материалом для исследования является венозная кровь.

Общий анализ крови 5 diff включает:

• определение размеров, числа, формы эритроцитов и содержание в них гемоглобина;
• определение соотношения объема плазмы к форменным элементам крови;
• определение общего числа лейкоцитов;
• расчет процентного соотношения разных лейкоцитов: нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов и базофилов на автоматическом анализаторе;
• подсчет количества и оценка среднего размера тромбоцитов.

Клинический анализ крови выполняется как первое скрининговое исследование при обращении с жалобами на «недомогание». Анализ дает представление о возможных участках, где происходят патологические изменения и помогает определить врачу-клиницисту дальнейшую тактику обследования.

  Показания:

• скрининговые обследования в рамках профилактического, диспансерного наблюдения;
• базовые обследования при госпитализации в стационары терапевтического и хирургического профилей;
• диагностика анемий;
• диагностика воспалительных, инфекционных заболеваний;
• диагностика болезней системы крови;
• мониторинг проводимой терапии и течения различных заболеваний.

Подготовка 
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи (детям — перед очередным кормлением). По возможности, исключить высокие эмоциональные и физические нагрузки накануне.

Интерпретация результатов
При интерпретации анализа следует учитывать, что у 5% здоровых людей показатели анализа крови отклоняются от принятых референсных значений. Показатели крови зависят от расы и пола, возраста. 

Наиболее важные показатели в общем анализе крови это:

1. Hb (hemoglobin) — гемоглобин;
2. Ht — гематокрит;
3. общее количество эритроцитов;
4. MCV* — средний объем эритроцита;
5. RDW* — распределение эритроцитов по объему;
6. MCH* — cреднее содержание гемоглобина в 1 эритроците;
7. MCHC* — средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах;
8. общее количество тромбоцитов;
9. общее количество лейкоцитов;
10. лейкоцитарная формула.

*Следует учитывать, что величина не является специфической, показатель следует использовать для диагностики анемии только в комплексе с другими показателями общего анализа крови и биохимического исследования крови.

Определение показателей клинического анализа крови позволяет диагностировать такие состояния, как анемия/полицитемия, тромбоцитопения/тромбоцитоз и лейкопения/лейкоцитоз, которые могут как являться симптомами какого-либо заболевания, так и выступать в качестве самостоятельных патологий.

Гемоглобин (Hb, hemoglobin)
Белок эритроцитов, содержащий гем. Основная функция — перенос кислорода.
Единицы измерения: г/л.

Повышение уровня гемоглобина:

• обезвоживание: при выраженной диарее, рвоте, повышенном потоотделении, диабете, ожоговой болезни, перитоните;
• физиологические эритроцитозы: у жителей высокогорья, лётчиков, спортсменов;
• симптоматические эритроцитозы: при недостаточности дыхательной и сердечно-сосудистой системы, поликистозе почек; эритремия.

Понижение гемоглобина:

• анемии различной этиологии;
• гипергидратация.

Гематокрит (Ht, hematocrit) 
Показатель доли клеток, в большинстве эритроцитов к жидкой части крови.
Единицы измерения: %

Повышение гематокрита:

• обезвоживание: при выраженной диарее, рвоте, повышенном потоотделении, диабете, ожоговой болезни, перитоните;
• физиологические эритроцитозы: у жителей высокогорья, лётчиков, спортсменов; 
• симптоматические эритроцитозы: при недостаточности дыхательной и сердечно-сосудистой системы, поликистозе почек;
•  эритремия. 

Понижение гематокрита:

• анемии различной этиологии;
• гипергидратация. 

Эритроциты
Единицы измерения: млн/мкл (106/мкл).
Альтернативные единицы измерения: 1012клеток/л.
Коэффициенты пересчёта: 1012 клеток/л =106 клеток/мкл = млн /мкл. 

Повышение концентрации эритроцитов:

• обезвоживание: при выраженной диарее, рвоте, повышенном потоотделении, диабете, ожоговой болезни, перитоните;
• физиологические эритроцитозы: у жителей высокогорья, лётчиков, спортсменов;
• симптоматические эритроцитозы: при недостаточности дыхательной и сердечно-сосудистой системы, поликистозе почек;
• эритремия. 

Понижение концентрации эритроцитов:

• анемии различной этиологии;
• гипергидратация.

MCV (средний объём эритроцитов)
Расчетный показатель, который вычисляется на основании гистограммы распределения по размеру эритроцитов. В соответствии с MCV выделяют микроцитарные, нормоцитарные и макроцитарные анемии. Увеличение показателя указывает на присутствие в крови крупных эритроцитов, уменьшение — мелких.

Единицы измерения: фл (фемтолитр).

Повышение значений MCV:

• B12-дефицитная и фолиеводефицитная анемия;
• апластическая анемия;
• заболевания печени;
• гипотиреоз;
• аутоиммунные анемии;
• курение и употребление алкоголя.

Пониженные значения MCV:

• железодефицитная анемия;
• анемия хронических заболеваний;
• талассемия;
• некоторые виды гемоглобинопатий.

RDW (Red cell Distribution Width, распределение эритроцитов по величине)
Расчётная величина, которая вычисляется на основании гистограммы распределения эритроцитов по объему. Отражает гетерогенность размеров эритроцитов. Увеличение показателя говорит, что в образце крови присутствуют мелкие и крупные эритроциты. Уменьшение значения говорит об однородности эритроцитов в образце.

Единицы измерения: % 

Повышение значений RDW:

• анемии с гетерогенностью размера эритроцитов, включая связанные с питанием; миелодиспластического, мегалобластного и сидеробластного типов; анемию, сопровождающую миелофтиз; гомозиготные талассемии и некоторые гомозиготные гемоглобинопатии;
• значительное повышение количества ретикулоцитов;
• состояние после переливания эритроцитарной массы;
• интерференции — холодовые агглютинины, лейкозы, гипергликемия.

MCH (Среднее содержание гемоглобина в эритроците)
Расчетный показатель, который характеризует среднюю массу гемоглобина в эритроците. Увеличение показателя связано с перенасыщением эритроцитов гемоглобином, уменьшение говорит о дефиците гемоглобина.

Единицы измерения: пг (пикограмм).

Повышение значений МСН:

• В12-дефицитная и фолиеводефицитная анемия;
• апластическая анемия;
• заболевания печени;
• гипотиреоз;
• аутоиммунные анемии;
• курение и употребление алкоголя.

Понижение MCH:

• железодефицитная анемия;
• анемия хронических заболеваний;
• некоторые виды гемоглобинопатий.

MCHC (средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах)
Расчетный показатель, который характеризует среднюю массу гемоглобина, содержащуюся в единице объема эритроцита.

Единицы измерения: г/дл.
Альтернативные единицы измерения: г/л.
Коэффициент пересчёта: г/л х 0,1 ==> г/дл.

Повышение значений МСНС:

• наследственная микросфероцитарная анемия.

Понижение значений МСНС:

• железодефицитная анемия;
• анемия хронических заболеваний;
• некоторые виды гемоглобинопатий.

Следует учитывать, что величина MCHC не является специфическим, показатель следует использовать для диагностики анемий только в комплексе с другими показателями общего анализа крови и биохимического исследования крови.

Тромбоциты
Единицы измерения: тыс/мкл (103 клеток/мкл).
Альтернативные единицы измерения: 109 клеток/л.
Коэффициенты пересчёта: 109 клеток/л = 103 клеток/ мкл = тыс/мкл.

Повышение концентрации тромбоцитов:

• физическое перенапряжение;
• воспалительные заболевания, острые и хронические;
• гемолитические анемии;
• анемии вследствие острой или хронической кровопотери;
• состояния после перенесённых хирургических вмешательств;
• состояние после спленэктомии;
• онкологические заболевания и гемобластозы.

Понижение концентрации тромбоцитов:

• беременность;
• В12-дефицитная и фолиеводефицитная анемия;
• апластическая анемия;
• вирусные и бактериальные инфекции;
• приём лекарственных препаратов, угнетающих продукцию тромбоцитов;
• врождённые тромбоцитопении;
• спленомегалия;
• аутоиммунные заболевания;
• состояния после перенесённых массивных гемотрансфузий.

Лейкоциты
Клетки с ядрами, выполняющие функции защиты. Образуются в красном костном мозге и органах лимфатической системы. Существует 5 популяций: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы или базофилы. Функции и время жизни зависят от того, к какой популяции относится лейкоцит.

Единицы измерения: тыс/мкл (103 клеток/мкл).
Альтернативные единицы измерения: 109 клеток /л.
Коэффициенты пересчета: 109 клеток/л = 103 клеток/мкл = тыс/мкл.

Повышение концентрации лейкоцитов:

• физиологический лейкоцитоз: эмоциональные и физические нагрузки, воздействие солнечного света, холода, приём пищи, беременность, менструация;
• воспалительные процессы;
• вирусные и бактериальные инфекции;
• состояния после перенесённых операционных вмешательств;
• интоксикации;
• ожоги и травмы;
• инфаркты внутренних органов;
• злокачественные новообразования;
• гемобластозы.

Понижение концентрации лейкоцитов:

• вирусные и некоторые хронические инфекции;
• приём лекарственных препаратов: антибиотики, цитостатики, нестероидные противовоспалительные средства, тиреостатики и др.;
• аутоиммунные заболевания;
• воздействие ионизирующего излучения;
• истощение и кахексия;
• анемии;
• спленомегалия;
• гемобластозы.

Лейкоцитарная формула
Лейкоцитарная формула — процентное соотношение различных видов лейкоцитов в периферической крови и подсчет их числа в единице объема. При наличии атипичных форм клеток проводится исследование крови под микроскопом. Популяция лейкоцитов делится на 5 типов: нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, эозинофилы, базофилы. Клетки отличаются по внешнему виду и выполняемым функциям.

Лейкоцитарная формула считается автоматическим гематологическим анализатором Sysmex XS1000i. 

Анализа́тор гематологи́ческий — прибор (комплекс оборудования), предназначенный для проведения количественных исследований клеток крови в клинико-диагностических лабораториях. Может быть автоматическим или полуавтоматическим.

Полуавтоматический гематологический анализатор от автоматического отличается тем, что процесс разведения пробы крови осуществляется отдельным прибором — дилютером. После приготовления разведения цельной крови оператор должен перенести разведенную пробу в модуль измерения.

В настоящее время полуавтоматические анализаторы практически не выпускаются.

Автоматический гематологический анализатор представляет собой полностью автоматизированный прибор, в котором весь аналитический процесс выполняется автоматически.

Современные автоматические анализаторы способны обрабатывать десятки образцов (от 60 до 120) в час, с соответствующей спецификации точностью и воспроизводимостью, а также хранить результаты тестов во встроенной памяти и, при необходимости, распечатывать их на встроенном термопринтере или внешнем принтере.

Современные гематологические анализаторы классифицируются по номенклатуре определяемых показателей клеток крови.

Восьми-параметровые гематологические анализаторы определяют следующие параметры: концентрации эритроцитов (RBC), лейкоцитов (WBC), тромбоцитов (Plt), гемоглобина (Hb), а также следующие параметры эритроцитов: средний объем эритроцитов (MCV), среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (MCH), среднюю концентрацию гемоглобина в эритроцитах (MCHC), гематокрит (Hct).

Восьми параметровые гематологические анализаторы в настоящее время практически не производятся.

Гематологические анализаторы класса 3-диф. Гематологические анализаторы класса 3-диф, в зависимости от выпускаемой модели, позволяют определять от 16 до 22 показателей клеток крови.

Анализаторы этого класса, помимо тех параметров, которые определяют восьми-параметровые анализаторы определяют три субпопуляции лейкоцитов: концентрации лимфоцитов (Lm), гранулоцитов (Gr) и, так называемых средних лейкоцитов (Mid), а также их процентное содержание Lm%, Gr% и Mid%. Отсюда и название класса 3-диф. Кроме этого гематологические анализаторы этого класса определяют коэффициент вариации объема эритроцитов (RDW) и ряд показателей, характеризующих тромбоциты: средний объем тромбоцитов (MPV), долю объема тромбоцитов(Tct) (аналог гематокрита), коэффициент вариации объема тромбоцитов (PDW).

Важной диагностической информацией, которую позволяет получить гематологические анализаторы этого класса, являются функции распределения по объему эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов — гистограммы.

Гематологические анализаторы класса 5-диф. Основным отличием гематологических анализаторов 5-диф от анализаторов 3-диф является их способность определять все 5 субпопуляций лейкоцитов: лимфоциты (Lym), моноциты (Mon), нейтрофилы (Neu), базофилы (Bas) и эозинофилы (Eos), а также их процентное содержание Lym%, Mon%, Neu%, Bas% и Eos%. Импедансный метод подсчета, известный также как счетчик Коултера, применяемый в анализаторах 3-диф, не в состоянии различить нейтрофилы, базофилы и эозинофилы, по этому в анализаторах 5-диф применяется иной метод дифференцировки клеток. Он основан на принципе дифракции лазерного излучения на клетках лейкоцитов и дальнейшем анализе рассеянного излучения. «Средние» лейкоциты не отличаются по размеру настолько что бы различать их импедансным методом, но имеют различную внутреннюю структуру и по-разному взаимодействуют с красителями. А метод детектирования дифракционной картины оказывается чувствительным ко внутренней структуре клеток. Таким образом эритроциты и тромбоциты подсчитываются счетчиком Коултера, а лейкоциты отдельным лазерным блоком.

Принципы работы гематологических анализаторов[править | править код]

Любой современный гематологический анализатор, это комплекс механических, гидравлических, пневматических и измерительных систем. Гидравлическая и пневматическая системы отвечают за забор реагентов из емкостей, доставку образца и реагентов внутри анализатора а также вывод отходов за пределы анализатора. Механическая система отвечает за перемещение пробозаборника или автоподатчика в зависимости от модели, а также за управление сдвижным клапаном и различного рода мешалками.

Метод определения гемоглобина[править | править код]

Метод определения гемоглобина общий для всех типов анализаторов. Заключается он в анализе оптической плотности на необходимой длине волны лизированной крови. Последовательность работы анализатора для измерения гемоглобина такова:

1. Разведение образца дилюентом.
2. Добавление в разбавленный образец лизирующего реагента. В результате его действия разрушается клеточная стенка эритроцитов и гемоглобин свободно растворяется в пробе.
3. Перемешивание образца для получение однородной смеси.
4. Фотометрическое измерение оптической плотности образца в специальной кювете.

Оптическая плотность лизированной пробы будет пропорциональна содержанию гемоглобина в исследуемой крови.

Метод подсчета клеток крови[править | править код]

Метод разделения лейкоцитов на популяции[править | править код]

Реагенты для гематологических анализаторов[править | править код]

Каждый гематологический анализатор, как правило, рассчитан на свою собственную реагентную систему, однако между ними есть много общего.

Основными составляющими комплектов реагентов для гематологических анализаторов являются: изотонический разбавитель (дилюент), лизирующий раствор (гемолитик), промывающий раствор и очищающий раствор.

В зависимости от конкретной конструкции анализатора в базовый комплект может входить лишь часть указанных реагентов.

Изотонический разбавитель[править | править код]

Изотонический разбавитель — это буферный раствор с фиксированными параметрами рН, электропроводности и осмолярности. Слово изотонический указывает только на одно и не самое важное свойство реагента — поддержание требуемого осмотического давления с целью обеспечения постоянства объёма клеток крови. Дело в том, что эритроциты принимают тот объём, который им диктует осмолярность раствора. При увеличении осмолярности, в течение 3:5 сек эритроциты сжимаются до некоторого равновесного объема. Если осмолярность раствора уменьшается, объём эритроцитов, соответственно, увеличивается. Таким образом, средний объём эритроцитов (MCV) увязывается с осмолярностью изотонического разбавителя. Стабилизирующие добавки в изотоническом разбавителе должны обеспечивать сохранность форменных элементов крови в течение достаточно длительного времени в первом разведении крови. Присутствие в растворе антикоагулянта должно эффективно предотвращать образование фибриновых сгустков и агрегацию тромбоцитов. В случае гематологических анализаторов, проводящих дифференциацию лейкоцитов на три популяции, изотонический разбавитель содержит специальные добавки, модифицирующие мембраны лейкоцитов. В этом случае изотонический разбавитель должен применяться в согласованной паре с соответствующим лизирующим раствором. Следует иметь в виду, что для всех гематологических анализаторов с дифференциацией лейкоцитов на три популяции штатным режимом является работа с цельной кровью. В варианте работы с предилюцией время стояния пробы крови в первом разведении по инструкциям фирм изготовителей не должна превышать 30…60 мин., что трудно осуществимо в практике российских лабораторий, преимущественно использующих именно режим предилюции. Исходя из требований практики отечественных лабораторий, специально разработан уникальный изотонический разбавитель, в котором дифференциация лейкоцитов сохраняется вплоть до 3 ч стояния проб крови в первом разведении.

Лизирующий раствор[править | править код]

Другим важнейшим реагентом является лизирующий раствор (гемолитик), который при добавлении в разведение крови приводит к лизису эритроцитов и в то же время сохраняет лейкоциты. Необходимо, чтобы гемолиз эритроцитов был качественный, поскольку в гемолизате подсчитываются лейкоциты, которых первоначально примерно в 1000 раз меньше, чем эритроцитов. Для обеспечения этих свойств лизирующий раствор, как правило, содержит сложную композицию ионных поверхностно-активных соединений.

В анализаторах с дифференциацией лейкоцитов на три популяции лейкоциты под действием лизирующего раствора изменяют свои размеры так, что выделяются фракции лимфоцитов (первый пик лейкоцитарной гистограммы, 35…90 куб. мкм), гранулоциты (крайний правый пик лейкоцитарной гистограммы, 120…400 куб. мкм). В средней части гистограммы (90…120 куб. мкм) в области так называемых «средних» клеток расположены моноциты, базофилы и эозинофилы. Таким образом гематологический анализатор по анализу размера клеток может определять процентную и абсолютную концентрацию лимфоцитов, гранулоцитов и «средних» клеток (суммарно моноциты, базофилы и эозинофилы). Наряду с факторами пробоподготовки свойства реагентной системы оказывают существенное влияние на качество дифференциации лейкоцитов.

Промывающие растворы[править | править код]

Промывающие растворы непосредственно не участвуют в процессе измерения, однако их свойства существенно влияют на стабильность аналитических характеристик анализаторов. Характерной особенностью гематологических анализаторов, использующих принцип Культера, является наличие счётных апертур малого диаметра. А, как известно, кровь содержит в себе ряд веществ, которые имеют тенденцию осаждаться на апертуре и внутренней поверхности гидравлической системы. Это постепенно приводит к засорам и ошибочным результатам. В некоторых случаях прибор просто останавливается и требует капитальной чистки. То есть качество промывающих растворов влияет на долговременную стабильность работы прибора.

Промывающие растворы бывают, в основном, трех типов. Первый тип — растворы для мягкой промывки магистралей анализатора между пробами, и они не несут в себе особых моющих свойств. Такие растворы имеют в своем составе поверхностно — активные вещества (детергенты). К сожалению, детергентные промывающие растворы практически не отмывают белки. Поэтому для очистки от белковых осадков применяют растворы на основе гипохлорита натрия — второй тип промывающих растворов. Эти растворы являются очень сильными депротеинезаторами. Однако, раствор гипохлорита натрия — это очень едкое вещество, и долгого контакта с ним не выдерживают детали из пластика (они трескаются), металла (они подвергаются коррозии). Поэтому злоупотреблять такими растворами нельзя. Данные растворы в основном применяются в экстренных случаях, когда необходимо быстро очистить счетную апертуру, а также для сервисных работ.

Современное решение проблемы качественной промывки прибора — применение ферментативных промывающих растворов. Благодаря наличию ферментов, такие растворы эффективно удаляют адсорбированные на стенках гидравлической системы белки и другие вещества. При этом они совершенно нейтральны и не оказывают вредного действия на детали прибора. Трудность создания таких промывающих растворов заключается в известном свойстве ферментов быстро терять активность. Вследствие этого, в мире имеется сравнительно немного фирм производителей ферментативных промывающих растворов.

См. также[править | править код]

• Клинический анализ крови

Литература[править | править код]

• Справочник заведующего КДЛ / № 2 февраль 2007
• Справочник заведующего КДЛ / № 4 апрель 2007