Что такое анализ крови на рск что это
Что такое серологическое исследование крови?
Объект серологии — антигены и антитела
Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.
Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.
Антиген и антитело подходят друг другу как замочная скважина и ключ, при встрече они непременно связываются. Эта серологическая реакция позволяет выявлять различные виды антител либо антигенов.
Способность иммунитета вырабатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.
Показания к проведению анализа.
Серологические исследования широко применяется в акушерстве
Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:
- вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
- выявление активности, стадии развития болезни;
- гормональные патологии;
- бесплодие;
- аутоиммунные заболевания;
- нарушение обмена веществ;
- аллергии;
- онкологические заболевания;
- планирование беременности, период вынашивания, патологии беременных;
- выявление ревматоидного фактора;
- определение группы крови и резус-фактора;
- эффективность терапии при различных болезнях;
- эффективность вакцинации;
- предоперационный и постоперационный период при необходимости оценки уровня некоторых антител;
- изучение иммунного состояния организма.
Подготовка к исследованию.
Прием препаратов желательно отменить накануне теста
Так как серологические исследования охватывают широкий спектр анализов, в каждом конкретном случае может понадобиться определённая подготовка, но существуют общие правила сдачи серологического теста:
- За сутки до исследования следует ограничить в рационе жирное и жареное, исключить алкоголь.
- Последний приём пищи должен завершиться за 10 — 12 часов до анализа.
- В день сдачи крови не следует употреблять кофе, чай либо иные напитки. Можно в небольшом количестве пить чистую воду.
- Лекарственные средства перед анализом исключаются. Если приём отменить невозможно, необходимо предоставить врачу полный перечень препаратов, в том числе витаминов, пероральных контрацептивов.
- Все другие исследования либо медицинские манипуляции проводятся после СИ.
- Курение рекомендуется прекратить за 12 часов до взятия образца крови.
- В предыдущий день следует избегать физических и эмоциональных нагрузок, а перед исследованием желательно 15 минут посидеть в полном покое.
- СИ назначаются на утреннее время и сдаются натощак.
Методы проведения серологического исследования.
В серологии может применяться большое число методов
Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.
Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).
Непрямая гемагглютинация — один из методов диагностики
Методы серологических исследований:
- Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
- Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
- Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
- Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
- Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
- Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
- Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
- Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
- Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
- Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
- Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.
Иммунофлюорисцентный метод.
«Свечение» в темнопольном микроскопе
Данный метод основан на использовании Ат, меченных флуоресцентным веществом. Чаще всего в качестве метки используется флуоресцеинизотиоционат, обладающий зелёным свечением в лучах ультрафиолета. Результат анализа оценивается по степени яркости свечения. Может быть использован ручной метод определения при помощи люминесцентного микроскопа, оптического микроскопа с люминесцентной насадкой, а также автоматический способ с применением микрочипового цитомера, проточного цитомера либо роботизированного флуоресцентного микроскопа.
РИФ проводится прямым и непрямым методом. Прямой способ означает непосредственное связывание сорбированного Аг с меченым Ат. Непрямой метод подразумевает использование немаркированных Ат для связки с Аг, а затем добавление меченых Ат, что позволяет избежать неспецифических реакций.
Иммуноферментный анализ.
Иммуноферментный анализ как метод серологической диагностики
ИФА основан на выявлении комплексов Аг-Ат при помощи маркирования одного из компонентов. В качестве метки используются различные ферменты, которые в результате ферментативной реакции образуют окрашивание. Существуют разнообразные методы ИФА, их можно классифицировать как гомогенные и гетерогенные методы.
Гомогенные означают, что все этапы реакции происходят в растворе.
Гетерогенные методы включают разделение на фазы с использованием твёрдого носителя.
Гомогенно-гетерогенные способы основываются на том, что комплексы Аг-Ат формируются в растворе, а затем для разделения используется твёрдая фаза.
Принцип «сэндвич»-метода
Существует множество вариаций методов ИФА, некоторые из них представлены ниже.
- Сэндвич-метод. К иммобилизованным Ат добавляется раствор с Аг, после образования комплексов носитель отмывают от лишних компонентов и добавляют маркированные Ат. В результате, Аг оказываются зажатыми иммобилизованными и мечеными Ат, откуда и произошло название метода.
- Неконкурентный непрямой ИФА. К иммобилизованным Аг присоединяют исследуемую сыворотку с Ат. Когда образуются комплексы, лишние Ат смывают и добавляют маркированные Ат, способные связаться с прикреплёнными к поверхностям лунок иммунными комплексами.
- Конкурентный прямой ИФА. К иммобилизованным Аг вносят исследуемую сыворотку и конъюгат, содержащий маркированные Ат. Формируются комплексы Аг-Ат нескольких видов: с мечеными Ат и с немаркированными Ат, которые вступают между собой в конкуренцию за связь с Аг.
Какие инфекции помогает выявить серологическое исследование.
Серологическая диагностика позволяет выявить возбудителя
СИ позволяют выявить определённое заболевание при наличии на него подозрения, то есть в основе анализа лежит знание того, какой именно элемент необходимо искать.
Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.
Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:
- вирус гепатита А, В, С, D, Е;
- сифилис;
- ВИЧ;
- герпес;
- цитомегаловирус;
- краснуха;
- корь;
- паротит;
- Эпштейн-Барр;
- хеликобактер;
- хламидии;
- микоплазмы;
- токсоплазмы;
- лямблии;
- гельминты;
- уреаплазмы;
- парвовирус;
- вирус ветряной оспы;
- вирус клещевого энцефалита;
- вирус Денге;
- коклюш;
- боррелии;
- легионеллы.
Серологические исследования способны выявить любые инфекции в лабораторных условиях, если в наличии есть Аг возбудителя инфекции.
Преимущества серологического метода исследования в диагностике инфекций.
Серологическая диагностика — быстро и доступно
- Высокая чувствительность и специфичность.
- Широкий спектр определяемых инфекций.
- Ранняя диагностика инфицирования.
- Возможность мониторинга развития заболевания.
- Быстрота и удобство в исполнении.
- Возможность использования минимального объёма исследуемого материала.
- Безопасность исследования.
Источник
Серологический анализ крови назначают в различных областях медицины. В гинекологии, венерологии – для обнаружения заболеваний, передающихся половым путем, в педиатрии – для выявления детских болезней (краснуха, корь и др.), в гастроэнтерологии – чаще для подтверждения вирусного гепатита. Инфекционисты, терапевты назначают серологическое исследование при подозрении на любые вирусные, инфекционные заболевания.
Что такое серология
Раздел иммунологии, который занимается изучением взаимодействия антигенов (Аг) с антителами (Ат) сыворотки крови, называется серологией. Исследования могут проводить в пробирке с использованием биологического материала пациента или в организме лабораторных животных после их заражения. При проникновении в организм человека вирусных, инфекционных, паразитарных возбудителей иммунная система синтезирует против них антитела (белковые соединения). Возбудители заболеваний продуцируют антигены (чужеродное вещество).
Серологические исследования направлены на выявление антигенов, антител, которые точно укажут на наличие или отсутствие заболевания. По уровню белковых соединений можно определить фазу болезни, ее течение, эффективность лечебных мероприятий. С помощью серологии выявляют гормональные нарушения, аутоиммунные болезни, при которых собственные клетки организма воспринимаются как чужеродные.
Для борьбы с болезнетворными агентами организм выделяет определенные белки – для каждого возбудителя определенный тип. Белковые соединения и чужеродный материал подходят друг другу как ключ к замку, при их соединении образуется комплекс, который выпадает в осадок в пробирке. В результате в однородной сыворотке появляется осадок, хлопья или она мутнеет.
Важно!
С помощью серологических исследований определяют группу крови, резус-фактор, подтверждают отцовство, выявляют источник инфекционных болезней при эпидемиях.
Виды иммуноглобулинов в исследовании
При внедрении любого возбудителя болезни в организм, включая паразитов, аллергены в ответ вырабатываются защитные белки – иммуноглобулины. Их виды различны по специфическим функциям, способности связываться с определенными антигенами, скорости реакции на проникновение патогенной флоры, прочности связи с болезнетворным агентом. Виды иммуноглобулинов:
- G – имеют противовирусную, антибактериальную активность. Появляются в крови, при длительном нахождении возбудителя в организме или его повторном проникновении. Присутствуют в сосудистом русле и за его пределами.
- М – первые синтезируются, если возбудитель попал в кровь. Запускает каскад защитных реакций, чтобы привлечь другие иммуноглобулины, лимфоцитарные клетки.
- А – имеют 2 вида: сывороточные, секреторные. Первые содержатся в крови, вторые в слюне, слезе, грудном молоке, пищеварительном, дыхательном тракте. Препятствуют проникновению болезнетворной флоры в организм, ликвидируя их в полости рта, носа, пищеварительном тракте, бронхах.
- Е – участники иммунного ответа при проникновении в организм паразитов (гельминтов). Главные иммуноглобулины, которые отражают аллергические реакции немедленного типа.
- D – малоизученная группа иммуноглобулинов, появляются в крови при хронических воспалениях.
Во время серодиагностики инфекционных заболеваний наибольшее значение имеет уровень иммуноглобулинов М, А, G.
Показания к выполнению
Исследования проводят беременным для определения резус-конфликта между матерью и плодом, выявления ТОRСН инфекций – группа заболеваний, которые представляют особую опасность для плода:
- Т – токсоплазмоз.
- О – другие болезни: эпидемический паротит, сифилис, гепатит А, B, корь, энтеровирусные, папилломавирусные болезни, хламидиоз и др.
- R – краснуха.
- С – цитомегаловирусная инфекция.
- Н – герпесвирусная инфекция.
Всем новорожденным в обязательном порядке исследование проводят для определения врожденных болезней. Общие показания для анализа у взрослых и детей:
- гормональные нарушения;
- аллергические реакции;
- аутоиммунные заболевания;
- подозрение на вирусные, паразитарные, бактериальные болезни;
- онкология;
- определение стадии болезни;
- нарушение обменного процесса;
- бесплодие;
- определение групповой принадлежности, резус-фактора;
- эффективность вакцинации, медикаментозной терапии;
- изучение состояния защитных факторов организма – иммунный статус;
- патологии при беременности;
- выявление реактивного фактора;
- определение степени родства.
Серологическую диагностику могут назначить до и после хирургического лечения с целью оценки количества определенных видов антител.
Читайте также
Плюсы, минусы серологических исследований
С помощью серодиагности проводят географический скрининг, массовую диагностику с профилактической целью для предупреждения эпидемий. Другие плюсы:
- высокая достоверность;
- быстрая расшифровка результатов – в течение 1 суток;
- большой список выявляемых заболеваний;
- безопасность анализа;
- возможность контролировать эффективность лечения по титру Аг, Ат.
Минус метода в том, что при проведении нужно учитывать инкубационный период болезни. У некоторых инфекционных заболеваний есть период «серологического окна» – вирус в организме есть, но антитела еще в кровь не поступили. Обнаружить вирус герпеса можно через 2 недели, ВИЧ – через 1, 3, 6 месяцев после заражения.
Важно!
Если верить статистике, ошибочные результаты составляют 4% от общего числа проведенных анализов. Чаще это связано с несоблюдением правил подготовки к анализу, нарушением правил проведения диагностики.
Подготовка к исследованию
Чаще биологическим материалом служит кровь, реже слюна, кал, моча, срезы тканей, альвеолярные смывы, спинномозговая, амниотическая жидкости. Серологические исследования включают в себя множество методов выявления возбудителей, от этого зависят определенные правила подготовки. Общие рекомендации перед серологическими тестами:
- последний прием пищи за 9-12 часов;
- за 24 часа ограничить употребление жирной, жареной, соленой, острой пищи, алкогольных напитков;
- в день сдачи крови нельзя есть, разрешено пить обычную негазированную воду;
- по возможности не курить за 10 часов до сдачи;
- прекратить прием любых лекарственных препаратов, в том числе витаминов. Если медикаменты назначены на постоянной основе и прекратить прием нельзя, предупредить врача;
- за 24 часа избегать стресса, исключить физические нагрузки.
Желательно, чтобы перед сдачей человек находился в спокойном состоянии, так как при любых эмоциональных проявлениях в кровь выделяются гормональные вещества, белки (кортизол, адреналин, норадреналин и др.). Если назначены инструментальные методы диагностики, то в первую очередь сдают кровь, чтобы последующие обследования не повлияли на результат анализа.
Методы серологических исследований
Способов проведения диагностики множество, как и заболеваний, которые они выявляют. Наиболее значимые:
- Агглютинация.
- Преципитация
- Гемагглютинация.
- Торможение гемагглютинации.
- Непрямая реакция Кумбса.
- Коагглютинация.
- Преципитация.
- Двойная радиальная иммунодиффузия.
- Реакция связывания комплемента (РСК).
- Иммунофлюоресценция (РИФ).
- Иммуноферментный метод (ИФА).
- Нейтрализация.
Чаще всего в лабораториях применяют ИФА, РИФ, РСК, реакции агглютинации.
Читайте также
Иммунофлюоресцентный метод (РИФ)
Для проведения исследования необходим биологический материал пациента, люминесцирующая жидкость. Второй компонент содержит антитела к предполагаемому возбудителю заболевания, которые помечены флуоресцеинизотиоционатом.
Виды РИФ:
- Прямой – материал пациента смешивают с мечеными антителами, если это срез ткани, обрабатывают его поверхность. Если возбудитель присутствует, образуется светящийся комплекс.
- Непрямой – проводят в 2 этапа. На первом в сыворотку или другой материал добавляют немеченые (первые) антитела. На втором вводят меченые (вторые) антитела против первых.
Полученные комплексы исследуют под люминесцентным, оптическим микроскопом ручным способом или автоматическим с помощью микрочипового цитометра. Из-за флуоресцентного вещества комплексы при затемнении излучают зеленое свечение, яркость которого отмечают плюсами от 1 до 4. Чем меньше плюсов, тем меньше комплексов с возбудителем заболевания.
Иммуноферментный метод
Как и РИФ, основан на маркировке чужеродного материала или белковых иммунных компонентов. В качестве маркировочного вещества выступают различные ферменты, которые имеют высокую специфичность, умеренную каталитическую активность, стабильность при образовании комплексов. Методы ИФА: гомогенные, гетерогенные. При первых все реакции происходят в жидком растворе. При вторых реакции проводят при участии твердого носителя.
Суть ИФА заключается в образовании комплексов иммунных белков человека с чужеродными антигенами сначала в жидком растворе, затем на твердой фазе. Под ней подразумевают прикрепление антигенов, антител к стенкам лунок полистиролового микропланшета. То есть после смешивания материала пациента с антителами против возбудителя смесь переносят на поверхность с лунками, куда прикрепляются антитела, антигены. Дальше изучают состав материала.
Реакция связывания комплимента
Для исследования необходимы: кровь или другой материал пациента, сыворотка с антителами, комплимент. Сначала смешивают кровь с сывороткой – образуется комплекс. После добавляют комплимент, который связывается с комплексом. Если связи между антиген-антитело не образуется, то комплемент остается в свободном, несвязанном состоянии. Чтобы определить его состояние в исследуемой жидкости, добавляют гемолитическую смесь (эритроциты барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент свободен, он соединяется с гемолитической смесью – реакция отрицательная, возбудитель не обнаружен.
Реакции, связанные с агглютинацией
Самые простые серологические реакции – с применением антибактериальной сыворотки. Исследуемую кровь пациента смешивают при комнатной температуре с различными сыворотками определенной концентрации. Результат оценивают по концентрации сыворотки, при которой произошла агглютинация. С помощью агглютинации определяют группу крови, резус-факторы.
Важно!
Распространенным методом серологической диагностики являются реакции, основанные на феномене преципитации: иммуноэлектрофорез, иммунодиффузия и др.
Какие заболевания выявляет анализ
Чтобы выявить заболевание при помощи серологических методов, необходимы предположения о возбудителе на основании клинической картины, жалоб. Так как для каждого возбудителя есть свои антитела, невозможно провести анализ, выявляющий сразу всех болезнетворных агентов, которые могут быть в организме, если нет предварительного диагноза. Например, если человеку ставят предварительный диагноз вирусный гепатит, то при исследовании применяют сыворотку с антителами против гепатита. Выявляемые болезни, возбудители:
- вирусные гепатиты;
- краснуха;
- сифилис;
- паротит;
- ВИЧ;
- коклюш;
- корь;
- аутоиммунные заболевания;
- герпес;
- вирус Эпштейн-Барр, клещевого энцефалита, ветряной оспы;
- хламидии;
- лямблии;
- цитомегаловирус;
- парвовирус;
- токсоплазмы;
- хеликобактер;
- легионеллы;
- микоплазмы;
- уреаплазмы;
- лямблии;
- гельминты;
- боррелии и др.
С помощью исследования выявляют любую болезнь, при которой в кровь выделяется чужеродные антигены.
Читайте также
Расшифровка результатов
Результаты анализов расшифровывают от 2 до 24 часов. При обнаружении в материале пациента антигенов возбудителя – результат положительный, если при добавлении в кровь антител против определенного возбудителя не образуется комплекс антитело-антиген – результат отрицательный. После выявления чужеродного белка определяют количество антител, которые связались с антигенами, чтобы определить течение, тяжесть заболевания, в бланках анализа это отмечают плюсами от 1 до 4.
При диагностике возможны ложные результаты, если исследование проведено в период «серологического окна» заболевания или нарушены правила подготовки к сдаче, выполнения исследования. При положительном результате назначают повторный анализ. При подозрении на сифилис, ВИЧ, гепатит положительный результат можно получить не меньше чем через 2 недели после контакта с инфицированным.
После постановки диагноза, назначении лечения через 2-3 недели снова берут анализ, чтобы определить титр (количество) антител. Если он нарастает – заболевание прогрессирует, количество возбудителей в организме повышается, терапия требует коррекции. Серологическая диагностика при аллергических реакциях направлена на определение иммуноглобулинов Е, которые будут прикреплены к форменных элементам в анализе крови.
Важно!
Параллельно с серологической диагностикой туберкулеза, бруцеллеза, туляремии проводят кожно-аллергические пробы.
Оценка иммунного статуса
Для определения иммунного статуса учитывают специфический, неспецифический иммунитет в целом. При помощи серологических методов определяют уровень всех иммуноглобулинов, активность, уровень Т, В-лимфоцитов, включая их подкасты. Оценку статуса проводят в 2 этапа. На первом (клиническом) в бланке отмечают: как часто человек болеет инфекционными заболеваниями, сопровождаются ли они осложнениями, как долго поддаются медикаментозному лечению, есть ли хронические заболевания.
Второй этап включает в себя 2 вида тестов. В первый входит определение количества всех иммуноглобулинов, Т, В-лимфоцитов. При выявлении отклонений иммунитета от нормы переходят ко второму (глубокому) тесту, чтобы определить причину нарушения защитных сил организма. Определяют все субпопуляции Т, В-лимфоцитов. Второй тест – процесс трудоемкий, выполнение может занять до 10 дней.
При помощи серологических исследований выявляют огромное количество заболеваний, при которых в кровь выделяются чужеродные компоненты. Способов серодиагностики множество, все они имеют высокую эффективность. Изучение уровня иммуноглобулинов помогает оценить восприимчивость организма к определенным инфекциям для проведения прививочных мероприятий и других профилактических мер.
Источник
