Биохимический анализ крови при системной красной волчанке

Для диагностики СКВ недостаточно наличия одного симптома заболевания или одного выявленного лабораторного изменения — диагноз устанавливают на основании клинических проявлений заболевания, данных лабораторных и инструментальных методов исследования и классификационных критериев заболевания Американской ассоциации ревматологов. [8, с. 505]

Американской ассоциацией ревматологов рекомендовано считать диагноз СКВ достоверным при наличии 4-х из нижеперечисленных критериев:

· высыпания в скуловой области;

· дискоидные очаги — появление на коже небольшого розового или красного пятна с четкими границами, которое постепенно покрывается в центре плотными серовато-белыми сухими чешуйками;

· повышенная чувствительность к солнечному излучению;

· язвы в полости рта или носа;

· артриты (воспаление суставов);

· воспаление плевры или перикарда — наружной сердечной сумки;

· поражение почек;

· неврологические нарушения;

· гематологические нарушения;

· LE-клетки или ДНК-антитела, или Sm-антитела;

· антинуклеарные антитела.

В биохимическом анализе крови — гипергаммаглобулинемия, повышение уровня фибриногена, С-реактивного белка, гаптоглобина, серомукоида, сиаловых кислот, активности альдолазы и трансаминаз (АЛТ, АСТ), наличие антител к двухцепочечной ДНК. [7, с. 303]

От правильности подготовки к биохимическому анализу крови во многом зависит результат. В связи с вариабельностью многих показателей крови перед анализом следует строго придерживаться следующих правил:

· сдавать анализ нужно строго натощак, после 8-12 часов голодания, можно пить только негазированную воду;

· нельзя утром в день анализа жевать жевательную резинку, есть мятные леденцы (даже без сахара);

· запрещено пить кофе, чай, соки, газированную и сладкую воду;

· алкоголь желательно полностью исключить за 14 дней до посещения лаборатории;

· не изменять своему рациону питания за 3 дня до анализа, но постараться исключать в пище жирные, острые и жареные блюда;

· отменить физические нагрузки за 3 дня до исследования;

· сдавать биохимический анализ крови нужно утром, с 7 до 11 часов утра;

· нужно исключить прием медикаментов за 3 дня до исследования; если это невозможно, то нужно предупредить об этом лечащего врача;

1. Повышение уровня фибриногена. Фибриноген — белок, вырабатываемый в печени и превращающийся в нерастворимый фибрин — основу сгустка при свертывании крови. Фибрин впоследствии образует тромб, завершая процесс свертывания крови.

Плазменный фактор свертывания крови, является «положительным острофазовым белком», служит одним из показателей степени активности ревматического процесса. При острых формах он может повышаться в 2-3 раза по сравнению с нормой. Обычно нарастание в плазме крови количества фибриногена коррелирует с изменением СОЭ.

Материал для исследования: цитратная плазма.

Ход определения:

К 1,0 мл плазмы в пробирке последовательно добавляют 0,1 мл эмульсии тромбопластина (или раствор тромбина) и 0,1 мл 5% раствора хлорида кальция. Реагенты перемешивают стеклянной палочкой. Палочку оставляют в пробирке. Смесь инкубируют на водяной бане (37° С) 10 — 20 мин, после чего образовавшийся сгусток переносят на фильтровальную бумагу и высушивают путем сжатия и перемещения сгустка по бумаге. Такое высушивание продолжают до тех пор, пока на фильтре не перестанут определяться следы влаги в проходящем свете. Сгусток фибрина взвешивают на торсионных весах.

В норме масса сгустка фибрина составляет 9 — 18 мг.

Расчет: для определения концентрации фибриногена, выраженной в г/л, массу фибрина в мг умножают на коэффициент 0,222.

Норма в плазме: 2 — 4 г/л. [9, с. 266]

2. Антитела к двухцепочечной ДНК — аутоантитела, направленные против собственной двуспиральной ДНК, наблюдаемые при системной красной волчанке. Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA) относятся к группе антинуклеарных антител, то есть аутоантител, направленных организмом против компонентов собственных ядер. В то время как антинуклеарные антитела характерны для многих болезней из группы диффузных заболеваний соединительной ткани, анти-dsDNA считаются специфичными для СКВ. Обнаружение анти-dsDNA является одним из критериев постановки диагноза СКВ. Анти-dsDNA обнаруживаются у 50-70% пациентов на момент постановки диагноза «СКВ». Считается, что иммунные комплексы, состоящие из двухцепочечной ДНК и специфических к ней антител (иммуноглобулинов IgG и IgM), участвуют в развитии микроваскулитов и обуславливают характерную симптоматику СКВ в виде поражения кожи, почек, суставов и многих других органов. Анти-dsDNAнастолько типичны для СКВ, что позволяют диагностировать это заболевание даже при отрицательном результате скринингового теста на антинуклеарные антитела. [13, с. 166]

Материал для исследования: венозная кровь.

Метод исследования: иммуноферментный анализ.

Норма: до 20 МЕ/мл.

3. С-реактивный белок — белок острой фазы воспаления. СРБ у больных СКВ может выполнять противовоспалительную функцию, препятствуя образованию антител к фрагментам апоптотических клеток. С-реактивный белок, синтезируется в печени и присутствует в крови в норме практически у всех здоровых лиц (около 1 мкг/мл) при отсутствии воспалительного процесса. Обычно его концентрация повышается в крови через 6 часов после начала воспалительной реакции или повреждения тканей. При воспалении, практически любого генеза, некротическом процессе, опухолевом росте содержание СРБ в сыворотке крови значительно увеличивается. Поэтому СРБ относят к неспецифическим показателям острой фазы. Существует корреляция между повышением СОЭ и СРБ, однако СРБ появляется и исчезает раньше, чем изменяется СОЭ.

Материал для исследования: сыворотка.

Методы исследования: радиальная иммунодиффузия, иммунотурбидиметрия и иммунонефелометрия.Норма: 0-0,5 мг/л. [14, с. 180]

4. Гипергаммаглобулинемия — это повышенный уровень содержания в крови человека иммуноглобулинов. Такое состояние крови можно наблюдать при воспалительных заболеваниях различного характера (при СКВ). Причиной повышения уровня иммуноглобулинов в крови может служить стимуляция большого количества клонов В-клеток, небольшого количества клонов или моноклональная пролиферация.

Материал для исследования: венозная кровь.

Метод исследования: турбидиметрия.

Для определения концентрации гамма-глобулина сначала осаждают посторонние белки. Осаждение производят при рН 9,9 и температуре 20-25 С. Продолжительность осаждения 10 — 20 мин. Надосадочную жидкость после центрифугирования смешивают с карбонатом натрия для получения рН 10,6, оставляют на 2 часа и затем турбидиметрируют. [17]

Норма: 13-19% (8,0 — 13,5 г/л).

5. Антитела к ядерным антигенам (ANA) — это гетерогенная группа аутоантител, направленных против компонентов собственных ядер. Они выявляются в крови пациентов с разнообразными аутоиммунными заболеваниями. ANA наиболее характерны для пациентов с системной красной волчанкой (СКВ). Они обнаруживаются у 98% больных ею, что позволяет считать это исследование основным тестом для диагностики СКВ. [10, с. 267]

Материал для исследования: венозная кровь.

Метод исследования: иммуноферментный анализ (ИФА).

Норма: не обнаружено.

6. Гаптоглобин — белок, связывающий свободный гемоглобин, предотвращающий выведение его из организма. Это белок острой фазы воспаления, обладающий способностью связывать свободный гемоглобин, освобождающийся из эритроцитов, предотвращая выведение гемоглобина из организма и поражение почек. Свободный гаптоглобин и его комплексы с гемоглобином играют важную роль в контроле местных воспалительных процессов. Длительно сохраняющиеся высокие значения гаптоглобина являются признаком неблагоприятного течения болезни.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Метод исследования:

Риваноловый метод Коринек. Принцип его заключается в том, что к сыворотке крови добавляют строго определенное количество гемоглобина. Образующийся комплекс гемоглобин-гаптоглобин осаждают риванолом. Избыток гемоглобина определяют фотометрически.

Норма: 150-2000 мг/л. [4, с. 44]

7. Содержание сиаловой кислоты в сыворотке крови здорового человека составляет 620-730 мг/л (2,0-2033 ммоль/л). Определение количества сиаловой кислоты в крови используют как диагностический и прогностический биохимический тест. Оно заметно повышается при ряде заболеваний, сопровождающихся воспалительными процессами (например, СКВ).

Материал для исследования: сыворотка крови.

Метод исследования:

Наиболее распространенными методами определения сиаловых кислот в сыворотке крови являются резорциновый метод Свеннерхольма и метод с тиобарбитуровой кислотой Уоррена.

Норма: 620 — 730 мг/л (2,0-2,033 ммоль/л). [10, с. 146]

8. Серомукоид — фракция углеводно-белкового комплекса, является показателем обмена белков. Изменение концентрации серомукоидов в сыворотке крови регистрируется при многих патологических состояниях. Нормальные пределы уровня серомукоида: 1,2-1,6 ммоль/л. Повышение количества серомукоида свидетельствуют об активном воспалительном процессе.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Метод исследования:

Метод определения серомукоида основан на осаждении белков сыворотки крови раствором перхлорной кислоты и выделении серомукоида из фильтрата с помощью фосфорно-вольфрамовой кислоты и последующем количественном определении его по одному из компонентов.

Норма: 0,13 — 0,20 ед. [10, с. 135]

9. Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в крови — показатель развития различных воспалительных процессов в организме и показатель активности течения аутоиммунных заболеваний. ЦИК образуются и циркулируют в кровяном русле в ответ на введение чужеродного агента (антигена). Они представляют собой комплексы, состоящие из антител, антигена и компонентов комплемента. Образование ЦИК — физиологический механизм защиты организма, приводящий к быстрому удалению эндогенных и экзогенных антигенов через ретикуло-эндотелиальную систему. Определение ЦИК в крови позволяет оценить активность заболевания, но не отражает количество иммунных комплексов, отложившихся в тканях. Повышение ЦИК характерно не только для какой-то одной болезни, поэтому интерпретировать результаты анализа необходимо в комплексе с клиническими данными и результатами других исследований. [12, с. 147]

Материал для исследования: сыворотка крови.

Метод исследования:

Из исследуемой пробы биологической жидкости ЦИК осаждают 2%-ным раствором полиэтиленгликоля — 6000. В качестве биологической жидкости исследуют сыворотку крови, а 2%-ный раствор полиэтиленгликоля-6000 берут в объемном соотношении к исследуемой пробе сыворотки крови 17:1 соответственно.

Норма: < 75 ед/мл. [8, с. 515]

10. LE-клетки, или клетки красной волчанки — это специфические клетки, обнаруживаемые в крови человека при наличии системной красной волчанки (70-80%) и некоторых других аутоиммунных заболеваниях. По сути, LE-клетки — это лейкоциты, разрушенные особым видом иммуноглобулина человека (LE-фактором), который появляется в крови при СКВ. Взаимодействуя со здоровыми лейкоцитами (нейтрофилами и монофагами), LE-фактор разрушает их ядра и поглощает содержащийся в них ядерный материал. У больных системной красной волчанкой (СКВ) LE-клетки обнаруживаются в крови, синовиальной и спинномозговой жидкостях, плевральном выпоте. LE-клетки появляются в крови в ранний период болезни или в период обострения. При улучшении состояния больного количество LE-клеток может уменьшаться или они исчезают совсем. [8, с. 517]

Материал для исследования: сыворотка крови.

Метод исследования:

Существует множество методов для выявления LE-клеток в крови: иммунофлюоресценция, иммуноцитохимия, двойная диффузия, встречный иммуноэлектрофорез, иммунопреципитация, ферментный метод. LE-клетки получают, добавив к исследуемой сыворотке (предположительно, больного) лейкоциты здорового человека и ядра разрушенных клеток.

Норма: не обнаружено. [7, с. 303]

11. Ревматоидный фактор — аутоантитела IgG, IgM или IgA изотипов, реагирующие с Fc-фрагментом IgG.

Материал для исследования: венозная кровь.

Метод исследования:

Производят забор венозной крови пациента, выделяют лимфоциты и гранулоциты с последующим построением цитолейкограммы и диагностируют СКВ — при выявлении пятерных розеток, содержащих 1 лимфоцит и 5 гранулоцитов. [5, с. 61]

12. Антитела к фосфолипидам (АФЛ) — это аутоиммунные, или аутоантитела класса IgG и IgM, действие которых направлено против основных компонентов клеточных мембран — фосфолипидов и, соответственно, против собственных клеток и тканей организма. При СКВ антифосфолипидные антитела связываются эндотелием сосудов и стимулируют синтез фактора Виллебранда, индуцируют активность тканевого фактора эндотелиальными клетками, стимулируют процесс гемокоагуляции. Антитела к фосфолипидам клеток эндотелия сосудов нарушают равновесие между свёртывающей и противосвёртывающей системами в сторону образования тромбов. АФЛ выявляются примерно у трети больных системной красной волчанкой.

Материал для исследования: венозная кровь.

Метод исследования: иммуноферментный анализ (ИФА).

Норма: 0 — 10 Ед/мл. [11, с. 71]

13. Антитела к кардиолипину (АКЛ) представляют собой антитела к кардиолипину, входящего в состав клеточных мембран. Данные антитела вступают во взаимодействие с фосфолипидами мембран тромбоцитов, с клетками эндотелия сосудов, приводя к их разрушению с последующим возникновением тромбозов, тромбоцитопении. Повышение концентрации АКЛ в сыворотке крови обнаруживается у 100% больных системной красной волчанкой, у 20,8% пациентов АКЛ выявляется в высоком титре. Определение антител к кардиолипину в сыворотке крови у больных системной красной волчанкой необходимо в качестве маркера антифосфолипидного синдрома.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Методы исследования: иммуноферментный анализ.

Норма: 0 — 12 Ед/мл. [1, с. 34]

14. Волчаночный антикоагулянт — антитела IgG против ферментов крови и фосфолипидов. Волчаночный антикоагулянт (ВА) в организме подавляет действие белка протромбина — самого важно элемента, отвечающего за сворачиваемость крови. Наличие в крови волчаночного антикоагулянта вовсе не значит, что человек болен красной волчанкой.

Материал для исследования: сыворотка крови.

Методы исследования: иммуноферментный анализ.

Норма: 0,8 — 1,2 Ед/мл. [11, с. 75]