Анализы крови на хеликобактер в инвитро
Метод определения
Иммуноанализ
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Маркёр, подтверждающий инфицированность Хеликобактер пилори.
Эти антитела начинают вырабатываться через 3 — 4 недели после инфицирования. Высокие титры антител к H.pylori сохраняются до и некоторое время после ликвидации микроорганизма.
Особенности инфекции. Инфекция Helicobacter pylori. H. pylori на сегодняшний день — одна из широко распространённых инфекций на земле. К H.pylori-ассоциированным болезням относятся хронический гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки. Поражение слизистой оболочки желудка обусловлено прямым повреждением её микроорганизмом, а также вторичным повреждением слизистой оболочки желудка, двенадцатиперстной кишки и кардиальной части пищевода под действием факторов агрессии H.pylori. Хеликобактер представляет собой грамотрицательную бактерию спиралевидной формы со жгутиками. Бактериальная клетка окружена слоем геля — гликокаликса, который защищает её от воздействия соляной кислоты желудочного сока. Хеликобактер чувствителен к действию высоких температур, но длительно сохраняется во влажной среде.
Заражение происходит пищевым, фекально-оральным, бытовым путями. H.pylori обладает способностью к колонизации и персистированию в слизистой оболочке желудка. К патогенным факторам относятся ферменты (уреаза, фосфолипаза, протеаза и гамма-ГТ), жгутики, цитотоксин А (VacA), гемолизин (RibA), белки теплового шока и липополисахарид. Бактериальная фосфолипаза повреждает мембрану эпителиоцитов, микроорганизм прикрепляется к поверхности эпителия и проникает в клетки. Под действием уреазы и других факторов патогенности повреждается слизистая оболочка, усиливаются воспалительные реакции и образование цитокинов, радикалов кислорода, окиси азота. Липополисахаридный антиген обладает структурным сходством с антигенами групп крови (по системе Lewis) и клетками желудочного эпителия человека, в результате возможна продукция аутоантител к эпителию слизистой оболочки желудка и развитие атрофического аутоиммунного гастрита. Поверхностное расположение уреазы позволяет ускользать от действия антител: комплекс уреаза-антитело сразу же отделяется с поверхности. Усиление перекисного окисления липидов и повышение концентрации свободных радикалов увеличивает вероятность канцерогенеза.
Обсеменение слизистой оболочки желудка H.pylori сопровождается развитием поверхностного антрального гастрита и дуоденита, ведёт к повышению уровня гастрина и снижению выработки соматостатина с последующим усилением секреции соляной кислоты. Избыточное количество соляной кислоты, попадая в просвет двенадцатиперстной кишки, ведёт к прогрессированию дуоденита и развитию желудочной метаплазии, что создает условия для заселения H.pylori.
В дальнейшем, особенно при наличии дополнительных факторов риска (наследственная предрасположенность, I группа крови, курение, приём ульцерогенных лекарственных препаратов, частые стрессы, алиментарные погрешности), в участках мета-плазированной слизистой оболочки формируется язвенный дефект.
В 1995 г. Международной ассоциацией по изучению рака (IARC) H.pylori признан абсолютным канцерогеном и определён как важнейшая причина злокачественных новообразований желудка у человека (MALToma — Mucosa Associated Lymphoid Tissue lymphoma, аденокарцинома). При проведении эпидемиологических исследований выявлена более частая инфицированность H.pylori у пациентов с неязвенной диспепсией и гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (ГЭРБ), чем без них.
Факторами, ответственными за развитие неязвенной диспепсии или ГЭРБ у H.pylori-инфицированных пациентов, считают нарушение желудочной моторики, секреции, повышение висцеральной чувствительности и проницаемости клеточного барьера слизистой оболочки, а также высвобождение цитокинов в результате её воспалительных изменений.
Ликвидация H. pylori у пациентов с язвенной болезнью позволяет прекратить приём антисекреторных препаратов.
Особое значение лабораторная диагностика H. pylori имеет в следующих ситуациях:
| Ситуация | Причина |
| Случаи инфекции в семье или среди совместно проживающих лиц | Контактно-бытовая передача в семье. Инфекция H. pylori увеличивает риск развития рака желудка. |
| Язвенная болезнь | Ликвидация H. pylori позволяет прекратить приём антисекреторных препаратов; снизить риск развития рака желудка. |
Источник
Метод определения
Вестерн-блот (Western blot).
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Высокоспецифичный тест, выявляющий факт инфицирования H. pylori.
Метод Вестерн-блота для определения антител к H. Pylori, в отличие от обычного ИФА, даёт дифференцированные сведения о наличии антител к целому спектру антигенов возбудителя. Это достигается электрофоретическим разделением белков экстракта H. Pylori. В результате выявляется порядка 15 антигенов (полный антиген), что значительно повышает информативность исследования.
Использующиеся в анализе антигены разделяют на три категории:
- 1 категория — перекрёстнореагирующие и неопределённые антигены;
- 2 категория — уреаза В (антиген с м.в. 66 кДа);
- 3 категория — видоспецифичные и высокоспецифичные антигены.
Данная диагностическая система прямо отличает специфические антигены от неспецифических. Поэтому вестерн-блот метод гарантирует высокую специфичность исследования.
Клинические изоляты H. Pylori можно разделить на 2 типа. Штаммы H. pylori I типа могут экспрессировать специфический вакуолизирующий цитотоксин (VacA) и цитотоксин-ассоциированный белок (CagA). Штаммы, не способные синтезировать этот белок, относят к типу II. Инфекции, вызванные агентом I типа, оказываются более патогенными, клинические симптомы включают гастрит и образование язв, возможны отдалённые последствия в виде злокачественной лимфомы и аденокарциномы желудка. Указанные белки входят в состав специфических антигенов, используемых для тестирования антител к H. Pylori методом иммуноблота, что также даёт дополнительную информацию для специалистов.
Состав используемых для выявления антител к H. Pylori специфических антигенов:
| АНТИГЕН | СПЕЦИФИЧНОСТЬ |
| CagA p120 | белок, ассоциированный с цитотоксином А, высокоспецифичен |
| VacA p95 | вакуолизирующий цитотоксин А, высокоспецифичен |
| p75 | неспецифичен |
| FSH p57 | белок жгутиковых, неспецифичен, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими уреазу |
| Ure B p66 | тяжёлая субъединица уреазы, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими уреазу |
| гомолог HSP p57 | гомолог белка теплового шока, неспецифичен |
| флагеллин p54 | неспецифичен, обуславливает перекрёстную реактивность с другими бактериями, содержащими флагеллин |
| p50 | неспецифичен |
| p41 | неспецифичен |
| p33 | предположительно специфичен |
| CMP p30 | Белок наружной мембраны, видоспецифичен |
| UreA p29 | лёгкая субъединица уреазы, высокоспецифичен |
| p26 | высокоспецифичен |
| CMP p19 | белок наружной мембраны, видоспецифичен |
| p17 | предположительно специфичен |
Антитела класса IgG появляются в крови вслед за IgM антителами (которые впоследствии исчезают через несколько недель после первого контакта с возбудителем инфекции). Инфекция H. Pylori обычно не проходит сама по себе, патологический агент может присутствовать в течение всей жизни человека. IgG выявляются в сыворотке крови многие годы, являясь индикатором инфицирования. Отсутствие специфических IgG позволяет с высокой степенью достоверности отвергнуть диагноз H. pylori-ассоциированного гастрита или язвы, хотя их присутствие не является абсолютным доказательством данного заболевания.
Литература
- Жебрун А.Б., Лазебник Л.В., Щербаков П.Л. и соавт. Диагностика и лечение заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с инфекцией Helicobacter pylori (практическое руководство для врачей). – Санкт-Петербург – Биоград, 2006.
- D. Vaira, J. Holton, M. Menegatti, et al. New immunological assays for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. Gut . 1999; 45 (Suppl 1): pp. I23 — I27
- Материалы фирмы – производителя реагентов.
Источник
Метод определения
полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.
Исследуемый материал
биоптат/биоптаты слизистой оболочки желудка и/или двенадцатиперстной кишки.
Определение ДНК Хеликобактер пилори в биоптате слизистой желудка и/или двенадцатиперстной кишки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.
Helicobacter pylori (H. pylori) – спиралевидная бактерия, которая обитает на слизистой оболочке желудка, прикрепляясь к ворсинкам эпителия. Инфицирование человека H. pylori широко распространено. По оценкам эпидемиологов, присутствие этой бактерии в желудке можно обнаружить примерно у половины населения планеты, а в некоторых регионах у 80-100% популяции. У инфицированных носителей Helicobacter pylori могут не обнаруживаться симптомы заболевания. При этом существует корреляция между наличием бактерии и подтвержденными функциональными состояниями, гастроинтестинальными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки, такими как диспепсия, хронический и атрофический гастрит, язвенная болезнь, рак желудка. Вероятность развития таких угрожающих состояний зависит от штамма H. pylori и факторов его вирулентности, индивидуальных особенностей организма и характера реакций на присутствие H. pylori, влияния условий жизни, в частности, диеты. Данную инфекцию успешно элиминируют (эрадикация H. pylori), но это не исключает вероятности повторного инфицирования в будущем. Вопрос о необходимости эрадикации H. pylori решается индивидуально. Тактика врача во многом зависит от клинических проявлений инфекции и, что особенно важно, наличия патологических изменений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.
Аналитические показатели: чувствительность определения ДНК H. pylori – 100 копий в образце. Специфичность – 100%.
Литература
- Баранская Е.К., Ивашкин В.Т., Шептулин А.А. Париет в лечении язвенной болезни, симптоматических гастродуоденальных язв и функциональной диспепсии. Гл. 4., с. 75. В кн. Профилактика и лечение хронических заболеваний верхних отделов желудочно-кишечного тракта. Под. ред. акад. РАМН В.Т. Ивашкина. 2-е издание. — М.: Изд. «МЕДпресс-информ». 2013:152. ISBN 978-5-98322-905-1
- Исаков В.А. Диагностика и лечение инфекции, вызванной Helicobacter pylori: IV Маастрихтское соглашение. Новые рекомендации по диагностике и лечению инфекции H. pylori – Маастрихт IV (Флоренция). Best Clinical Practice. Русское издание. 2012;2:4-23.
- Chung W.C., Jeon E.J., Oh J.H., Park J.M., Kim T.H., Cheung D.Y., Kim B.W., Kim S.S., Kim J.I. Dual-priming oligonucleotide-based multiplex PCR using tissue samples from the rapid urease test kit for the detection of Helicobacter pylori in bleeding peptic ulcers. Digestive and Liver Disease. 2016;4. pii: S1590-8658(16)30394-2. doi: 10.1016/j.dld.2016.04.012.
- Du L.J., Chen B.R., Kim J.J., Kim S., Shen J.H., Dai N. Helicobacter pylori eradication therapy for functional dyspepsia: Systematic review and meta-analysis. World Journal of Gastroenterology. 2016;22(12):3486-3495. doi: 10.3748/wjg.v22.i12.3486.
- Helicobacter pylori and gastric or duodenal ulcer. Prescrire International. 2016;25(167):18-23.
- Schulz C., Schütte K., Malfertheiner P. Helicobacter pylori and Other Gastric Microbiota in Gastroduodenal Pathologies. Digestive Diseases. 2016;34(3):210-216. doi: 10.1159/000443353.
- Seo J.H., Hong S.J., Kim J.H., Kim B.W., Jee S.R., Chung W.C., Shim K.N., Baik G.H., Kim S.S., Kim S.G., Kim J.I. Long-Term Recurrence Rates of Peptic Ulcers without Helicobacter pylori. Gut Liver. 2016;4. doi: 10.5009/gnl15262.
взятие материала проводится врачом при гастродуоденоскопии. Условия подготовки определяются лечащим врачом. Подготовка к исследованию и приготовление материала для исследования: см. общую подготовку к проведению эндоскопического исследования.
- гастрит;
- дуоденит;
- гастродуоденит;
- язвенная болезнь желудка;
- язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки;
- гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ);
- неязвенная диспепсия;
- подозрение на MALT-лимфому желудка, подозрение на новообразование (рак желудка).
Интерпретация результатов
Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Форма представления результатов:
тест качественный. Результат выдается в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».
Интерпретация результатов
- «Обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала найден фрагмент ДНК, специфичный для Helicobacter pylori; инфицирование Helicobacter pylori.
- «Не обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала не обнаружен фрагмент ДНК, специфичный для Helicobacter pylori, или концентрация ДНК возбудителя в образце ниже границы чувствительности метода.
Артикул:
3158ХЕЛ
Срок исполнения:
до 4 рабочих дней ?
Указанный срок не включает день взятия биоматериала
Цена:
570 руб
В этом разделе вы можете узнать, сколько стоит выполнение данного исследования в вашем городе, ознакомиться с описанием теста и таблицей интерпретации результатов. Выбирая, где сдать анализ «Хеликобактер пилори, определение ДНК в биоптате слизистой желудка и/или двенадцатиперстной кишки (Helicobacter pylori, DNA, Bioptates of Gastric Mucosa and/or Duodenum, PCR) » в Москве и других городах России, не забывайте, что цена анализа, стоимость процедуры взятия биоматериала, методы и сроки выполнения исследований в региональных медицинских офисах могут отличаться.
Источник
Метод определения
13С-уреазный дыхательный тест, инфракрасный (ИК) анализ.
Исследуемый материал
пробы выдыхаемого воздуха до и после приема препарата.
Неинвазивный высокочувствительный и высокоспецифичный тест, рекомендуемый для использования в целях диагностики и подтверждения эрадикации инфекции Helicobacter pylori.
Helicobacter pylori (H. pylori) – мелкие спиралевидные бактерии, которые инфицируют желудок человека, обитая в слизистом слое, покрывающем эпителий. Инфекция H. pylori имеет широкую распространенность, которая зависит от условий жизни и группы населения. В России этот показатель достигает до 60-70% всей популяции. Приобретается инфекция обычно в детстве. Точные пути передачи H. pylori от человека человеку окончательно не ясны, возможен перенос путем прямого контакта со слюной, остатками фекалий инфицированного, а также через загрязненную воду или продукты. У многих носителей Helicobacter pylori могут отсутствовать симптомы какого-либо заболевания. Однако H. pylori является частой и потенциально излечимой причиной функциональной диспепсии, хронического гастрита и язвенной болезни. Есть связь между присутствием H. pylori и повышением риска возникновения рака желудка. Вероятность развития угрожающих состояний зависит от штамма H. pylori, его вирулентности и патогенности, индивидуальных особенностей организма, характера реакций на присутствие этих бактерий, влияния условий жизни. Инфекцию успешно излечивают (процесс эрадикации H. pylori), но это не исключает вероятности повторного инфицирования в будущем. Вопрос о необходимости эрадикации H. pylori решается индивидуально. Тактика врача во многом зависит от клинических проявлений инфекции и, в особенности, наличия патологических изменений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.
Методы диагностики активной хеликобактерной инфекции можно разделить на инвазивные и неинвазивные. Инвазивные методы включают оценку биопсийного материала желудка, полученного при эндоскопическом исследовании. К неинвазивным методам относят 13С-уреазный дыхательный тест и определение антигена H. pylori в кале (см. тест № 484 Антиген H. рylori в кале). Применимы также серологические методы исследования, к которым относится определение в крови антител классов IgG, IgM, IgA к H. pylori (см. тесты № 133, 176, 177). Данные тесты полезны в ситуациях, ограничивающих применение других методов (например, когда нет возможности прекратить антимикробную терапию или терапию ингибиторами протонной помпы). Однако эти исследования не всегда обеспечивают высокую точность, поскольку уровень антител может оставаться повышенным в течение разного времени и после прекращения активной инфекции. Среди указанных подходов 13С-уреазный дыхательный тест относится к неинвазивным безопасным методам исследования, обеспечивающим высокую чувствительность, специфичность и точность. При отсутствии дополнительных клинических показаний к проведению эндоскопического исследования он рекомендован к использованию в качестве предпочтительного теста первой линии в диагностике хеликобактерной инфекции, а также для подтверждения эрадикации H. pylori.
13С-уреазный дыхательный тест основан на способности H. pylori продуцировать фермент уреазу, который активирует реакцию гидролиза мочевины с образованием углекислого газа и аммиака. В ходе теста (процедуру см. выше) пациент принимает мочевину, содержащую углерод 13С. 13С является стабильным (нерадиоактивным) изотопом углерода, который природно в организме человека составляет 1,11% от общего количества, сравнительно с 98,89% углерода в форме 12С. Если в желудке присутствуют бактерии H. pylori, мочевина под действием вырабатываемой этими бактериями уреазы гидролизуется, углекислый газ, содержащий метку 13С, всасывается в кровь и выделяется в составе выдыхаемого воздуха. Проводят отбор и анализ проб выдыхаемого пациентом воздуха до и после приема мочевины с меткой 13С. С применением инфракрасного анализа в них исследуют относительное содержание 13С/12С, на основании чего можно сделать вывод о наличии или отсутствии инфицирования H. рylori.
Характеристики 13С-уреазного дыхательного теста по оценкам разных авторов: специфичность – до 93 – 100 %; чувствительность – до 97 — 100%; общая точность — 94,8 % — 100 %.
Литература
- Ивашкин В.Т., Маев И.В., Лапина Т.Л., Шептулин А.А. Рекомендации Российской Гастроэнтерологической Ассоциации по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori у взрослых. Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. — М.: Изд. «М-Вести». 2012;22(1):87-89.
- Плавник Р.Г. 13C-уреазный дыхательный тест в диагностике хеликобактериоза: Пособие для врачей. Мин-во здравоохранения Российской Федерации. — М.: Изд. «Медпрактика-М». 2015:32.
- Приказ МЗ РФ «О мерах по совершенствованию организации гастроэнтерологической помощи населению Российской Федерации» № 539 от 25 августа 2005.
- Malfertheiner P. с соавт. Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori – отчет согласительной конференции Маастрихт IV/Флоренция (Европейская группа по изучению Helicobacter pylori, EHSG). Пер. с англ. публикации в журнале Gut. 2012;61:646-664; Вестник практического врача. 2012;1:3-18.
- Malfertheiner P. et al. Management of Helicobacter pylori infection – the Maastricht V/Florence Consensus Report. Gut. 2017;66:6-30.
Источник