Анализ резус фактора плода из крови матери

Генетическое исследование, которое позволяет определить резус-фактор плода по крови резус-отрицательной беременной женщины методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

OMIM: MIMID *111680

Локализация: 1p36.11

Синонимы русские

Ген RHD плода по анализу материнской крови, неинвазивное типирование гена RHD плода.

Синонимы английские

RhD (Rh blood group, D antigen); Rhesus blood group, D antigen, Fetal RHD typing, Noninvasive RHD typing, Cell-free fetal DNA testing.

Метод исследования

ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозная кровь (пробы ДНК, выделенные из плазмы крови матери).

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Подробнее об исследовании

Метод позволяет идентифицировать резус-фактор плода по крови матери уже с 10-й недели беременности.

С RhD-антигеном связана проблема сенсибилизации резус-отрицательных женщин резус-положительными эритроцитами плода, что может привести в дальнейшем к тяжелой патологии – гемолитической болезни новорожденных.

Принцип метода основан на выявлении гена RhD, который отвечает за синтез антигена D и есть только у резус-положительных людей. Резус-отрицательная женщина антигена D не имеет. Если ребенок оказался резус-отрицательным и в крови матери антиген D отсутствует, то тест будет отрицательным. Если же плод окажется резус-положительным, то в крови резус-отрицательной матери будет присутствовать ген RhD – тест будет положительным.

Среди более 100 Rh-антигенов наиболее иммуногенным и потому наиболее клинически значимым является RhD-антиген, с которым связано большинство осложнений, обусловленных резус-несовместимостью или резус-конфликтом.

Резус-фактор представляет собой белок, находящийся на поверхности эритроцитов (красных кровяных телец). Около 85% людей имеют резус-фактор и, таким образом, являются резус-положительными. У остальных 15% резус-фактор отсутствует, то есть они являются резус-отрицательными.

Резус-положительный тип определяется наличием гена RhD в гомозиготном (DD) или гетерозиготном (Dd) состоянии. Резус-отрицательный тип может быть обусловлен различными изменениями в структуре генов системы Rh. В большинстве случаев это делеция гена RhD на обеих хромосомах. При этом эритроцитарный антиген D не синтезируется и проявляется резус-отрицательный фенотип.

Резус-фактор наследуется как доминантный признак, поэтому у резус-отрицательной матери (dd) при генотипе DD резус-положительного отца ребенок всегда будет ресус-положительным, а это значит, что риск резус-конфликта высок. В случае геотипа Dd резус-положительного отца возможности рождения ребенка как с положительным, так и с отрицательным резусом одинаковы. К счастью, не у каждой резус-отрицательной беременной женщины плод является резус-положительным.

Схема наследования резус-фактора представлена в таблице:

Во время беременности, уже на первом месяце, в крови женщины начинает появляться фетальная (плодная, от англ. fetal – «плод») ДНК. В целом внеклеточные ДНК плода составляют 3-5% от всех циркулирующих в крови беременной внеклеточных ДНК при выделении их из плазмы.

Циркулирующие внеклеточные плодные ДНК – это короткие участки плодных нуклеиновых кислот, циркулирующих в материнской плазме и сыворотке, которые наблюдаются иногда в несвязанной форме, свободными от обычных клеточных компонентов.

Если во время беременности резус-отрицательной женщины от резус-положительного мужчины ребенок унаследует резус-фактор от отца, тогда иммунная система матери начнет воспринимать плод как чужеродный и станет вырабатывать антитела. В организме резус-отрицательной беременной женщины в ответ на положительный резус-фактор плода начинают вырабатываться антитела и возникает опасность резус-конфликта. Резус-антитела матери проникают в плаценту и разрушают эритроциты малыша. Печень и селезенка ребенка начинают производить эритроциты в усиленном режиме, из-за чего увеличиваются в размере; постепенно развивается гемолитическая болезнь. Резус-конфликт может быть причиной поражения головного мозга, нарушения функции слуха и речи, а в самых тяжелых случаях – проявляться водянкой (отеком) плода, которая смертельно опасна.

Общими проявлениями резус-конфликта у плода являются анемия, ретикулоцитоз, эритробластоз, гепато- и спленомегалия, гипоксическое поражение важных органов. Тяжесть проявлений резус-конфликта может определяться количеством антирезусных антител в крови матери и степенью зрелости ребенка.

Для чего используется исследование?

• Для определения резус-статуса (Rh или Rh-) плода.

Когда назначается исследование?

• При отрицательном резус-факторе беременной, супруг которой является резус-положительным.

Что означают результаты?

Положительный результат:

• резус-положительный плод.

Отрицательный результат:

• резус-отрицательный плод.

Что может влиять на результат?

В каких случаях тест может быть недостоверным:

• положительный резус-фактор матери;
• срок беременности менее 10 недель;
• предыдущая беременность была менее 3 месяцев назад до настоящей.

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, врач общей практики.

Также рекомендуется

• Беременность — Пренатальный скрининг трисомий I триместра беременности (синдром Дауна)
• Беременность — Пренатальный скрининг трисомий II триместра беременности
• Беременность — I триместр
• Беременность — II триместр
• Беременность — III триместр

Литература

• Современные методы диагностики, лечения гемолитической болезни плода и новорождённого при резус-сенсибилизации: пособие для врачей / Г. М. Савельева, М. А. Курцер, О. Б. Панина, Л. Г. Сичинава, Р. И. Шалина, П. А. Клименко, А. Г. Коноплянников и др. – М.: Изд-во МЗ РФ, 2004.
• Daniels G., Hadley A., Soothill P. Blood group antibodies in haemolytic disease of the fetus and newborn // Alloimmune disorders of pregnancy. University Press. – 2002.
• Lo Y.M., Hjelm N.M., Fidler C. et al. Prenatal diagnosis of fetal RhD status by molecular analysis of maternal plasma // N Engl J Med. – 1998.
• Bennett, P. R., Le Van Kim, C., Colin, Y., Warwick, R. M., Cherif-Zahar, B., Fisk, N. M., Cartron, J.-P. Prenatal determination of fetal RhD type by DNA amplification. 1993.
• Wagner, F. F., Gassner, C., Muller, T. H., Schonitzer, D., Schunter, F., Flegel, W. A. Molecular basis of weak D phenotypes. 1999.

Метод исследования: Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Иммунологический конфликт по системе резус является актуальной проблемой. Гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН) входит в пятерку самых частых пренатальных патологий. ГБН развивается, как правило, при беременности женщины с резус-отрицательной принадлежностью резус-положительным плодом. Мембрана эритроцитов у людей с резус-положительным статусом пронизана комплексом специфических белков, которые на поверхности клетки образуют своеобразный комплекс системы антигенов. Наиболее иммуногенным и значимым среди них является D-антиген. Ген RHD кодирует синтез белка RhD (D-антигена). В случае делеции участка хромосомы, на которой расположен ген RHD, на поверхности эритроцита отсутствует белок системы резус. Таким образом, резус-отрицательный генотип определяет резус-отрицательную принадлежность крови (Rh-). Иммунная система беременной женщины с Rh- атакует эритроциты плода, на поверхности которых есть чужеродный для нее белок RhD. Эритроциты разрушаются, что ведет к соответствующей клинической картине — анемии плода, гемолитической желтухе, холестазу, энцефалопатии и водянке плода. Тяжесть клинических проявлений не всегда можно предугадать, и зависит она от защитных механизмов по сохранению беременности в каждом конкретном случае. Определить резус-принадлежность плода очень важно для предупреждения развития ГБН и для своевременного проведения необходимых мер ее профилактики. Так же данное исследование дает возможность избежать диагностических манипуляций, направленных на многократное определение уровня антител и отказаться от инвазивных процедур (кордоцентез), применение которых может стать причиной прерывания беременности и ее осложнений.

Во время беременности происходит обновление клеток плаценты и в кровоток матери в небольшом количестве попадает внеклеточная фетальная ДНК плода. Определение резус-фактора происходит путем исследования непосредственно фетальной ДНК плода в крови матери и является неинвазивным, высоко информативным, достоверным и выполняется всего один раз. Исследование позволяет дать ответ о резус-принадлежности плода уже на ранних сроках беременности (начиная с 8 недель). В процессе исследования из крови матери выделяют фракцию ДНК плода, и далее ДНК плода исследуют на наличие гена RHD. При выявлении гена RHD, можно сделать вывод о резус-положительной принадлежности, при отсутствии гена RHD соответственно о резус-отрицательной принадлежности. С целью предупреждения негативных последствий, важно как можно раньше выявить резус-статус плода.

Показания к назначению исследования:

• ведение беременности у женщин с отрицательным резус-фактором для своевременного выявления риска развития резус-конфликта;
• перед профилактическим введением иммуноглобулина. В случае если в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором отсутствуют антитела к D-антигену плода, но при этом резус-статус отца ребенка положительный;
• при наличии в анамнезе у женщины с отрицательным резус-фактором хирургического прерывания беременности или выкидыша. При резус-конфликте в анамнезе женщина заведомо сенсибилизирована антирезусными антителами. Для прогнозирования развития резус-конфликта необходимо определить резус-фактор плода.

Пример результата исследования:

Результат лабораторного исследования не является диагнозом. Тактика обследования, назначение лечения пациентам, интерпретация результатов лабораторных исследований определяется лечащим врачом.

Однако бывают случаи, когда фетальная ДНК плода в крови матери присутствует в недостаточном для анализа количестве. Такая ситуация может быть связана с физиологическими особенностями беременной женщины. При большой массе тела женщины снижено процентное соотношение фетальной ДНК плода к свободной циркулирующей ДНК матери. Ещё одно состояние, при котором может снижаться фракция фетальной ДНК — это анеуплоидии плода. В этих случаях рекомендуется повторная сдача анализа через 1-2 недели, когда уровень фетальной ДНК плода в крови матери возрастет.

Следует отметить, что существует небольшой процент женщин, у которых есть мутация в гене RHD. Мутации могут приводить к сокращению выработки белка или изменению его функциональных свойств (например, невозможности полноценного встраивания в мембрану эритроцита). В таких случаях генотип называют Weak D (D – ослабленный), что означает снижение иммунного потенциала. При серологическом исследовании статус таких женщин определяется как резус-отрицательный, хотя генотипически это резус-положительные женщины. При таких особенностях генотипа матери определить резус-принадлежность плода невозможно.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.