Анализ на резус крови ребенка при беременности

Метод определения
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.

Исследуемый материал
Плазма крови (ЭДТА)

Обнаружение гена RHD плода в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором применяют с целью прогнозирования риска развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода и новорожденного.

Резус (Rh) – одна из важнейших систем эритроцитарных антигенов (наряду с системой АВ0), клинически значимая при оценке возможности возникновения резус-конфликта и риска развития гемолитической болезни плода и новорожденного.

В системе резус различают пять антигенов. Наиболее иммуногенным является антиген D, аминокислотная последовательность которого кодируется геном RHD. Присутствие антигена D на поверхности эритроцитов определяет положительный резус-фактор (Rh+). Доля резус-положительных лиц, носителей антигена D, в популяции составляет около 86%, а резус-отрицательных лиц (Rh-), не имеющих антигена D – около 14%.

Течение беременности резус-положительным плодом у резус-отрицательных женщин* часто осложняется развитием гемолитической болезни плода, связанной с трансплацентарным переносом эритроцитов плода в кровоток матери. 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D-резус-антигеном. Попадая в кровь резус-отрицательной матери, он вызывает образование специфических антител, которые проникают через плаценту и разрушают эритроциты плода. Это влечет за собой развитие гемолитической болезни плода и новорожденного. При раннем проявлении резус-конфликт может послужить причиной самопроизвольного прерывания беременности или преждевременных родов. Сенсибилизация матери к D-антигену и риск развития резус-конфликта возрастают с каждой последующей беременностью резус-положительным плодом независимо от того, прервалась ли беременность или завершилась родоразрешением.

В настоящее время при выявлении резус-конфликта назначают следующий комплекс исследований:

измерение уровня специфичных антител матери к D-антигену плода;
получение плодного материала при хорион- и плацентобиопсии в ходе амнио- и кордоцентеза, что относится к инвазивным методам;
допплерометрическое исследование скорости кровотока в аорте и средней мозговой артерии плода.

Риск самопроизвольного прерывания беременности при применении инвазивных методов исследования составляет 2-3%, а отсутствие антител не гарантирует, что плод резус-отрицательный, т. к. даже при положительном резусе у плода антитела у матери могут не вырабатываться по причине целостности плаценты в момент обследования или слабого иммунного ответа. Ситуация осложняется тем, что резус-конфликт может возникнуть на любом сроке беременности. Кроме того, возможна сенсибилизация матери. Выявление ДНК плода (фетальной фракции, свободно циркулирующей ДНК, фетДНК) в крови матери обладает рядом преимуществ:

относится к неинвазивным для плода процедурам, не несет угрозы течению беременности, не вызывает осложнений;
исследование фетДНК возможно, начиная со срока 10 акушерских недель беременности;
точность результата 96 – 100%**
позволяет оценить целесообразность назначения терапии иммуноглобулином при отсутствии в крови беременной женщины анти-резусных антител на сроке 20 недель.

Аналитические показатели метода

Определяемые участки ДНК: 7-й и 10-й экзоны гена RHD. Диагностическая чувствительность: 92-100%. Диагностическая специфичность: 90-100%. Чувствительность метода составляет 150 копий геномной ДНК (суммарной ДНК матери и плода), что соответствует 400 копиям гена RHD плода в 1,0 мл исследуемого образца плазмы.

Ограничения метода

У 1% серологически резус-отрицательных женщин определяется наличие гена RHD. Это происходит в следующих случаях:

Ген RHD присутствует и генотипически резус-фактор будет положительным, но в результате мутаций D-антиген не синтезируется и серологическим методом определяется как отрицательный;
Ген RHD присутствует полностью или частично, и генотипически резус-фактор будет положительным; из-за мутаций синтезируется измененный D-антиген. Серологически это определяется или как слабый резус-фактор, или как нестабильно положительный.

По крови таких пациенток определить резус-фактор плода методом ПЦР невозможно. Чаще всего отрицательный резус-фактор обусловлен полным отсутствием гена RHD. В таких случаях применяют серологический метод вместе с ПЦР. Резус-фактор определяется как отрицательный при совпадении отрицательных результатов тестов.

* У беременных женщин, имеющих резус-положительную принадлежность, проблем совместимости по резус-фактору с плодом не возникает.

** Величина обусловлена состоянием плаценты, особенностью течения беременности и возрастает с увеличением срока беременности.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Противопоказания к проведению исследования:

Трансплантации органов и тканей в анамнезе у пациентки

Литература

Costa J.M., Giovangrandi Y., Ernault P., Lohmann L., Nataf V., El Halali N., Gautier E. Fetal RHD genotyping in maternal serum during the first trimester of pregnancy. British journal of haematology. 2002;119:255-260.
Finning K.M., Martin P.G., Soothill P.W., Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion. 2002;42:1079-1085.
Freeman K., Osipenko L., Clay D., Hyde J., Szczepura A. A Review of Evidence on Non-invasive Prenatal Diagnosis (NIPD): Tests for Fetal RHD Genotype. Workpackage 6, SAFE Network of Excellence Warwick Medical School, UK. 2006.
Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BioMed Central genetics. 2001;15:10.
Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. – СПб. 2004:188.
Инструкция по применению набора реагентов для выявления гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Резус-фактор плода ООО «ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № ФСР 2017/5310.

Источник

Метод исследования: Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Иммунологический конфликт по системе резус является актуальной проблемой. Гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН) входит в пятерку самых частых пренатальных патологий. ГБН развивается, как правило, при беременности женщины с резус-отрицательной принадлежностью резус-положительным плодом. Мембрана эритроцитов у людей с резус-положительным статусом пронизана комплексом специфических белков, которые на поверхности клетки образуют своеобразный комплекс системы антигенов. Наиболее иммуногенным и значимым среди них является D-антиген. Ген RHD кодирует синтез белка RhD (D-антигена). В случае делеции участка хромосомы, на которой расположен ген RHD, на поверхности эритроцита отсутствует белок системы резус. Таким образом, резус-отрицательный генотип определяет резус-отрицательную принадлежность крови (Rh-). Иммунная система беременной женщины с Rh- атакует эритроциты плода, на поверхности которых есть чужеродный для нее белок RhD. Эритроциты разрушаются, что ведет к соответствующей клинической картине — анемии плода, гемолитической желтухе, холестазу, энцефалопатии и водянке плода. Тяжесть клинических проявлений не всегда можно предугадать, и зависит она от защитных механизмов по сохранению беременности в каждом конкретном случае. Определить резус-принадлежность плода очень важно для предупреждения развития ГБН и для своевременного проведения необходимых мер ее профилактики. Так же данное исследование дает возможность избежать диагностических манипуляций, направленных на многократное определение уровня антител и отказаться от инвазивных процедур (кордоцентез), применение которых может стать причиной прерывания беременности и ее осложнений.

Во время беременности происходит обновление клеток плаценты и в кровоток матери в небольшом количестве попадает внеклеточная фетальная ДНК плода. Определение резус-фактора происходит путем исследования непосредственно фетальной ДНК плода в крови матери и является неинвазивным, высоко информативным, достоверным и выполняется всего один раз. Исследование позволяет дать ответ о резус-принадлежности плода уже на ранних сроках беременности (начиная с 8 недель). В процессе исследования из крови матери выделяют фракцию ДНК плода, и далее ДНК плода исследуют на наличие гена RHD. При выявлении гена RHD, можно сделать вывод о резус-положительной принадлежности, при отсутствии гена RHD соответственно о резус-отрицательной принадлежности. С целью предупреждения негативных последствий, важно как можно раньше выявить резус-статус плода.

Показания к назначению исследования:

ведение беременности у женщин с отрицательным резус-фактором для своевременного выявления риска развития резус-конфликта;
перед профилактическим введением иммуноглобулина. В случае если в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором отсутствуют антитела к D-антигену плода, но при этом резус-статус отца ребенка положительный;
при наличии в анамнезе у женщины с отрицательным резус-фактором хирургического прерывания беременности или выкидыша. При резус-конфликте в анамнезе женщина заведомо сенсибилизирована антирезусными антителами. Для прогнозирования развития резус-конфликта необходимо определить резус-фактор плода.

Пример результата исследования:

Параметр	Результат
Выявление гена RHD	Не выявлен
Заключение: Резус-фактор плода генотипически отрицательный. Развитие резус-конфликта маловероятно (<0.1%).

Результат лабораторного исследования не является диагнозом. Тактика обследования, назначение лечения пациентам, интерпретация результатов лабораторных исследований определяется лечащим врачом.

Однако бывают случаи, когда фетальная ДНК плода в крови матери присутствует в недостаточном для анализа количестве. Такая ситуация может быть связана с физиологическими особенностями беременной женщины. При большой массе тела женщины снижено процентное соотношение фетальной ДНК плода к свободной циркулирующей ДНК матери. Ещё одно состояние, при котором может снижаться фракция фетальной ДНК — это анеуплоидии плода. В этих случаях рекомендуется повторная сдача анализа через 1-2 недели, когда уровень фетальной ДНК плода в крови матери возрастет.

Следует отметить, что существует небольшой процент женщин, у которых есть мутация в гене RHD. Мутации могут приводить к сокращению выработки белка или изменению его функциональных свойств (например, невозможности полноценного встраивания в мембрану эритроцита). В таких случаях генотип называют Weak D (D – ослабленный), что означает снижение иммунного потенциала. При серологическом исследовании статус таких женщин определяется как резус-отрицательный, хотя генотипически это резус-положительные женщины. При таких особенностях генотипа матери определить резус-принадлежность плода невозможно.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.

Источник

Определение резус-фактора (Rh) плода по крови матери является важной процедурой, которая укажет на течение беременности и возможные риски для плода. В случае несовпадения данного параметра у будущего малыша и родителя может возникнуть реакция отторжения со стороны материнского организма, что вызовет самопроизвольный аборт или замирание беременности.

Зачем определять

Резус-конфликт ставит под угрозу развитие и вынашивание плода, причем особенно резко негативные признаки проявляются в тех случаях, когда мать имеет отрицательный резус-фактор, а ребенок — положительный. В 80% случаев без приема средств, подавляющих работу иммунной системы, беременность прервется естественным путем. На оставшиеся 20% приходятся ситуации, когда ребенок рождался с патологиями, часто несовместимыми с дальнейшей жизнедеятельностью.

Анализ на определение резус-фактора плода является основным, поэтому его назначают сразу после постановки женщины на клинический учет.

Как проходит исследование

По современным методикам анализ резус-фактора плода производится неинвазивным путем на 12 неделе беременности. Исследование основано на ПЦР — полимеразной цепной реакции, которая позволяет сделать выводы об интересующем параметре плода с помощью взятия биоматериала из тела матери. В качестве последнего выступает венозная кровь, содержащая частицы ДНК ребенка, что никоим образом не вредит протеканию беременности.

Такой вариант исследования позволяет определить резус плода и вероятную группу крови, а также выявить эффективность назначения иммуноглобулинов при отсутствии выработки ответных антител, призванных уничтожить инородный объект в организме.

Результаты предоставляются через 3-5 дней после сдачи материала, и на их основе врач составляет дальнейший прогноз.

В редких случаях никаких препаратов не назначается и контроль осуществляется только посредством УЗИ.

Резус-конфликта

Статус резус-фактора определяется наличием белка, покрывающего поверхность эритроцита. Его отсутствие означает отрицательный Rh и наоборот. Несовместимость данных параметров приводит к развитию гемолитической болезни у плода, связанной с транспортом эритроцитов ребенка в кровь матери через плаценту. Это вызывает образование антител со стороны иммунной системы, которые способствуют распаду эритроцитов плода, попадая в его кровеносную систему, т. к. определяют эмбрион инородным объектом.

Диагностика состояния будущего ребенка проводится посредством УЗИ. Внешняя симптоматика развития отклонений заключается в следующем:

скопление жидкости в мягких тканях плода и, как следствие, видимый на ультразвуковом исследовании отек;
изменение стандартной позы зародыша.

Из-за отечности живота ноги плода оказываются разведены в стороны, а толщина пуповины незначительно превышает норму, из-за чего также происходит небольшое изменение положения. При обнаружении подобных признаков следует пройти анализ на определение резус-фактора ребенка.

Если иммунологическая несовместимость подтверждается, беременная женщина должна проходить периодические обследования на протяжении всего срока.

Для снижения вероятности развития осложнений пациентке назначают внутривенное введение иммуноглобулина с целью ликвидации антител, провоцирующих гемолитическую болезнь у зародыша.

Данное отклонение развивается только в том случае, когда материнская кровь является резус-положительной, т. к. при отрицательном значении ситуации конфликта возникнуть не может. Однако, если родители обладают различными резус-факторами, женщине следует пройти обследование на 12 неделе беременности, чтобы исключить вероятность патологии.

Кроме того, принято считать, что при первом зачатии антитела, провоцирующие гемолитическую болезнь, не вырабатываются, поэтому проблем с вынашиванием возникать не должно, но при каждой последующей беременности риск будет увеличиваться.

Источник

Татьяна Румянцева

резус-фактор

Что такое резус-фактор?

Резус-фактор — это специфический белок, который располагается на поверхности эритроцитов. Если белок на ваших клетках есть, то у вас положительный резус-фактор. Если белок на ваших клетках отсутствует, то у вас отрицательный резус-фактор.

Резус- фактор наследуется генетически, таким образом, изменить собственный резус-фактор невозможно. Важно учитывать, что отрицательный резус-фактор – это рецессивный признак (положительный – доминантный). Не углубляясь в детали, скажу, что это означает: у двух резус-положительных родителей может быть резус-отрицательный ребенок (это важно для женщины, планирующей беременность – даже если оба ваших родителя резус-положительные, это не означает, что вы на 100% резус-положительная).

Проблемы при беременности могут возникать, если у мамы отрицательный резус-фактор, а у плода положительный. Во всех остальных случаях переживать за ребёнка не следует.

У ребенка положительный резус-фактор может наследоваться только от папы (если у мамы резус-отрицательная кровь)! То есть, если у вас резус-отрицательная кровь, попросите мужа/партнера сдать анализ на резус-фактор. Если и у будущего отца ребенка резус-отрицательная кровь, переживать не стоит (у двух «отрицательных» родителей не может быть «положительного» ребенка)! Если же у мамы резус-отрицательная, а у папы резус-положительная, это повод для более пристального внимания и активных действий во время беременности.

Почему важно знать о возможности резус-несовместимости мамы и плода?

Если кровь резус-положительного плода попадает в кровоток резус-отрицательной мамы, её тело воспринимает этот белок как чужеродный и старается бороться с ним, вырабатывая антитела, которые, в свою очередь, могут проникать через плаценту к плоду и атаковать эритроциты плода. Все это может приводить к серьёзным проблемам для здоровья будущего ребенка (анемия и гемолитическая болезнь) вплоть до гибели плода или новорождённого.

Гемолитическая болезнь плода диагностируется у 0,6% новорождённых. Смертность от гемолитической болезни плода остаётся достаточно высокой. При этом достаточно простые меры профилактики развития гемолитической болезни плода позволяют снизить ее частоту, а также смертность новорождённых в десятки раз, как показывает опыт стран, внедривших эффективную систему профилактики (профилактические обследования, введение антирезусного иммуноглобулина).

Надо ли бояться проблем с резус-фактором?

Обычно проблем с первой беременностью не возникает, так как кровь мамы и плода ранее не встречались, соответственно, организм мамы не знаком с резус-белком и не производит антител против него. Если же резус-отрицательная женщина забеременеет положительным плодом второй раз без профилактики во время первой беременности, ее организм может вырабатывать антитела, что представляет серьезную угрозу для здоровья будущих детей и будущих беременностей.

Если у меня уже раньше были беременности, но не было родов, я в опасности?

Женщина может начинать вырабатывать антитела, если ранее был любой контакт с резус-положительной кровью. Это может происходить после выкидыша, внематочной беременности. Если пациентка после предыдущих потерь/прерываний беременности на ранних сроках не получала профилактику, то при последующих беременностях она находится в группе риска по развитию проблем, связанных с резус-фактором.

Что мне делать, чтобы предотвратить проблемы?

Необходимо сдать анализ на группу крови и резус-фактор при планировании беременности. Также важно знать резус-фактор отца ребенка. Если мама и папа резус-отрицательные, то проблем с несовместимостью не возникнет (беременность ведется как неосложненная). Если мама резус-отрицательная, а папа резус-положительный, есть вероятность, что ребенок также будет резус-положительным, а значит, необходим контроль за антителами и прочие профилактические мероприятия во время беременности.

При наступлении беременности рекомендуется сдавать антирезусные антитела раз в месяц до 28 недель беременности, чтобы отследить тот момент, когда и если у мамы начнут вырабатываться антитела, которые могут представлять угрозу для плода.

Ещё одним важнейшим фактором профилактики является введение антирезусного иммуноглобулина во время беременности (в 28-32 недели беременности или далее на любом сроке, если не был введен ранее).

Введение иммуноглобулина препятствует выработке собственных антител организмом мамы при контакте с кровью ребёнка.

Иммуноглобулин водится в следующих ситуациях:

третий триместр беременности (если мама резус-отрицательная, а папа резус-положительный),
в течение 72 часов после рождения резус-положительного ребёнка (резус ребенка определяется сразу после рождения),
выкидыш или аборт в первом триместре беременности,
после проведения инвазивных процедур (амниоцентез, биопсия ворсин хориона),
кровотечение во время беременности,
травмы во время беременности,
попытка наружного акушерского поворота при тазовом предлежании плода.

Введение иммуноглобулина в данных ситуациях является профилактикой резус-несовместимости для следующей беременности, поэтому так важно не забывать об этом. Ранее считалось, что резус-отрицательной женщине крайне сложно выносить более, чем одного ребенка. На сегодняшний день (благодаря успехам профилактики) ограничений по количеству беременностей и детей нет, если все меры приняты своевременно и правильно.

Есть еще одна опция, которая позволяет на самых ранних сроках беременности определиться с дальнейшей тактикой ведения. Современные технологии позволяют определить резус-принадлежность плода на самых ранних сроках беременности (в первом триместре). Точность анализа составляет 98-100%, анализ проводится по крови мамы. При отрицательном резус-факторе плода можно «выдохнуть», проблем с резус-несовместимостью в данную беременность не предвидится!

Что же делать, если гемолитическая болезнь плода развилась?

Самым эффективным методом лечения является переливание крови плоду (который еще находится внутри мамы!). Если есть возможность, производят несколько переливаний, стараясь дать возможность женщине доносить беременность до 37 недель. При ухудшении состояния плода в индивидуальном порядке может приниматься решение и о более раннем родоразрешении.

Краткая шпаргалка: что делать, если у меня резус-отрицательная кровь?

Попросите у мужа/планируемого отца ребенка сдать кровь. Если он «отрицательный», проблем нет! Если «положительный», надо быть начеку!
Помним о важности введения антирезусного иммуноглобулина после КАЖДОЙ беременности (внематочной/аборта/выкидыша/родов (если ребенок «положительный» или мы не знаем резус-фактор плода).
При планировании первой беременности ничего, кроме определения резус-фактора отца ребенка, сдавать не надо.
Если отец ребенка «положительный», варианта ведения беременности 2:

а) делаем неинвазивное определение резус-принадлежности плода в первом триместре. Если плод «отрицательный», выдыхаем. Если «положительный», сдаем антирезусные антитела ежемесячно до 28 недель, в 28 недель вводим антирезусный иммуноглобулин.

б) если не делали неинвазивную диагностику, то сдаем антирезусные антитела ежемесячно до 28 недель, в 28 недель вводим антирезусный иммуноглобулин.

Если во время беременности возникает кровотечение/необходимость инвазивных манипуляций (амниоцентез и прочие), травмы живота, это повод для введения дополнительной дозы иммуноглобулина (если резус-принадлежность плода положительная или неизвестна).
После родов в роддоме определяется резус-принадлежность плода. Если ребенок «отрицательный», выдыхаем. Если «положительный», необходимо введение еще одной дозы иммуноглобулина.
И так каждый раз при каждой последующей беременности!

Личный опыт!

Вы часто спрашиваете о моем опыте в разных ситуациях! Делюсь! Я резус-отрицательная, муж резус-положительный, беременности у меня было 4:

Беременность 1: Неразвивающаяся беременность, прерывание в сроке 12 недель, введение антирезусного иммуноглобулина.

Беременность 2: Определение антител раз в месяц, введение иммуноглобулина в 30 недель, роды, ребенок «положительный», введение иммуноглобулина после родов.

Беременность 3: Самопроизвольное прерывание беременности в сроке 9 недель, введение антирезусного иммуноглобулина.

Беременность 4: Определение антител раз в месяц, введение иммуноглобулина в 28 недель, роды, ребенок «положительный», введение иммуноглобулина после родов.

Никаких сомнений относительно необходимости введения иммуноглобулина у меня не было и у вас быть не должно.

Это одно из важнейших достижений перинатальной медицины, пожалуйста, пользуйтесь им, чтобы избежать тяжелых осложнений, которых вполне реально избежать!

Источники:

ACOG Practice Bulletin No. 192 Summary: Management of Alloimmunization During Pregnancy
Клинические рекомендации (протоколы лечения) «Резус-сенсибилизация. Гемолитическая болезнь плода»

Источник