Анализ на определение резус фактора плода по крови матери как сдавать

Анализ на определение резус фактора плода по крови матери как сдавать thumbnail

Метод определения
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.

Исследуемый материал
Плазма крови (ЭДТА)

Обнаружение гена RHD плода в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором применяют с целью прогнозирования риска развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода и новорожденного. 

Резус (Rh) – одна из важнейших систем эритроцитарных антигенов (наряду с системой АВ0), клинически значимая при оценке возможности возникновения резус-конфликта и риска развития гемолитической болезни плода и новорожденного.  

В системе резус различают пять антигенов. Наиболее иммуногенным является антиген D, аминокислотная последовательность которого кодируется геном RHD. Присутствие антигена D на поверхности эритроцитов определяет положительный резус-фактор (Rh+). Доля резус-положительных лиц, носителей антигена D, в популяции составляет около 86%, а резус-отрицательных лиц (Rh-), не имеющих антигена D – около 14%.  

Течение беременности резус-положительным плодом у резус-отрицательных женщин* часто осложняется развитием гемолитической болезни плода, связанной с трансплацентарным переносом эритроцитов плода в кровоток матери. 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D-резус-антигеном. Попадая в кровь резус-отрицательной матери, он вызывает образование специфических антител, которые проникают через плаценту и разрушают эритроциты плода. Это влечет за собой развитие гемолитической болезни плода и новорожденного. При раннем проявлении резус-конфликт может послужить причиной самопроизвольного прерывания беременности или преждевременных родов. Сенсибилизация матери к D-антигену и риск развития резус-конфликта возрастают с каждой последующей беременностью резус-положительным плодом независимо от того, прервалась ли беременность или завершилась родоразрешением.

В настоящее время при выявлении резус-конфликта назначают следующий комплекс исследований:

  • измерение уровня специфичных антител матери к D-антигену плода;  
  • получение плодного материала при хорион- и плацентобиопсии в ходе амнио- и кордоцентеза, что относится к инвазивным методам; 
  • допплерометрическое исследование скорости кровотока в аорте и средней мозговой артерии плода.

Риск самопроизвольного прерывания беременности при применении инвазивных методов исследования составляет 2-3%, а отсутствие антител не гарантирует, что плод резус-отрицательный, т. к. даже при положительном резусе у плода антитела у матери могут не вырабатываться по причине целостности плаценты в момент обследования или слабого иммунного ответа. Ситуация осложняется тем, что резус-конфликт может возникнуть на любом сроке беременности. Кроме того, возможна сенсибилизация матери. Выявление ДНК плода (фетальной фракции, свободно циркулирующей ДНК, фетДНК) в крови матери обладает рядом преимуществ:

  1. относится к неинвазивным для плода процедурам, не несет угрозы течению беременности, не вызывает осложнений; 
  2. исследование фетДНК возможно, начиная со срока 10 акушерских недель беременности; 
  3. точность результата 96 – 100%** 
  4. позволяет оценить целесообразность назначения терапии иммуноглобулином при отсутствии в крови беременной женщины анти-резусных антител на сроке 20 недель.

Аналитические показатели метода

Определяемые участки ДНК: 7-й и 10-й экзоны гена RHD. Диагностическая чувствительность: 92-100%. Диагностическая специфичность: 90-100%. Чувствительность метода составляет 150 копий геномной ДНК (суммарной ДНК матери и плода), что соответствует 400 копиям гена RHD плода в 1,0 мл исследуемого образца плазмы.

Ограничения метода

У 1% серологически резус-отрицательных женщин определяется наличие гена RHD. Это происходит в следующих случаях: 

  • Ген RHD присутствует и генотипически резус-фактор будет положительным, но в результате мутаций D-антиген не синтезируется и серологическим методом определяется как отрицательный; 
  • Ген RHD присутствует полностью или частично, и генотипически резус-фактор будет положительным; из-за мутаций синтезируется измененный D-антиген. Серологически это определяется или как слабый резус-фактор, или как нестабильно положительный. 

По крови таких пациенток определить резус-фактор плода методом ПЦР невозможно. Чаще всего отрицательный резус-фактор обусловлен полным отсутствием гена RHD. В таких случаях применяют серологический метод вместе с ПЦР. Резус-фактор определяется как отрицательный при совпадении отрицательных результатов тестов.

* У беременных женщин, имеющих резус-положительную принадлежность, проблем совместимости по резус-фактору с плодом не возникает. 

** Величина обусловлена состоянием плаценты, особенностью течения беременности и возрастает с увеличением срока беременности.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Противопоказания к проведению исследования: 

  • Трансплантации органов и тканей в анамнезе у пациентки

Литература

  1. Costa J.M., Giovangrandi Y., Ernault P., Lohmann L., Nataf V., El Halali N., Gautier E. Fetal RHD genotyping in maternal serum during the first trimester of pregnancy. British journal of haematology. 2002;119:255-260. 
  2. Finning K.M., Martin P.G., Soothill P.W., Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion. 2002;42:1079-1085. 
  3. Freeman K., Osipenko L., Clay D., Hyde J., Szczepura A. A Review of Evidence on Non-invasive Prenatal Diagnosis (NIPD): Tests for Fetal RHD Genotype. Workpackage 6, SAFE Network of Excellence Warwick Medical School, UK. 2006. 
  4. Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BioMed Central genetics. 2001;15:10. 
  5. Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. – СПб. 2004:188.  
  6. Инструкция по применению набора реагентов для выявления гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Резус-фактор плода ООО «ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № ФСР 2017/5310.
Читайте также:  Общий анализ крови для подростка

Источник

Метод исследования: Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Иммунологический конфликт по системе резус является актуальной проблемой. Гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН) входит в пятерку самых частых пренатальных патологий. ГБН развивается, как правило, при беременности женщины с резус-отрицательной принадлежностью резус-положительным плодом. Мембрана эритроцитов у людей с резус-положительным статусом пронизана комплексом специфических белков, которые на поверхности клетки образуют своеобразный комплекс системы антигенов. Наиболее иммуногенным и значимым среди них является D-антиген. Ген RHD кодирует синтез белка RhD (D-антигена). В случае делеции участка хромосомы, на которой расположен ген RHD, на поверхности эритроцита отсутствует белок системы резус. Таким образом, резус-отрицательный генотип определяет резус-отрицательную принадлежность крови (Rh-). Иммунная система беременной женщины с Rh- атакует эритроциты плода, на поверхности которых есть чужеродный для нее белок RhD. Эритроциты разрушаются, что ведет к соответствующей клинической картине — анемии плода, гемолитической желтухе, холестазу, энцефалопатии и водянке плода. Тяжесть клинических проявлений не всегда можно предугадать, и зависит она от защитных механизмов по сохранению беременности в каждом конкретном случае. Определить резус-принадлежность плода очень важно для предупреждения развития ГБН и для своевременного проведения необходимых мер ее профилактики. Так же данное исследование дает возможность избежать диагностических манипуляций, направленных на многократное определение уровня антител и отказаться от инвазивных процедур (кордоцентез), применение которых может стать причиной прерывания беременности и ее осложнений.

Во время беременности происходит обновление клеток плаценты и в кровоток матери в небольшом количестве попадает внеклеточная фетальная ДНК плода. Определение резус-фактора происходит путем исследования непосредственно фетальной ДНК плода в крови матери и является неинвазивным, высоко информативным, достоверным и выполняется всего один раз. Исследование позволяет дать ответ о резус-принадлежности плода уже на ранних сроках беременности (начиная с 8 недель). В процессе исследования из крови матери выделяют фракцию ДНК плода, и далее ДНК плода исследуют на наличие гена RHD. При выявлении гена RHD, можно сделать вывод о резус-положительной принадлежности, при отсутствии гена RHD соответственно о резус-отрицательной принадлежности. С целью предупреждения негативных последствий, важно как можно раньше выявить резус-статус плода.

Показания к назначению исследования:

  • ведение беременности у женщин с отрицательным резус-фактором для своевременного выявления риска развития резус-конфликта;
  • перед профилактическим введением иммуноглобулина. В случае если в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором отсутствуют антитела к D-антигену плода, но при этом резус-статус отца ребенка положительный;
  • при наличии в анамнезе у женщины с отрицательным резус-фактором хирургического прерывания беременности или выкидыша. При резус-конфликте в анамнезе женщина заведомо сенсибилизирована антирезусными антителами. Для прогнозирования развития резус-конфликта необходимо определить резус-фактор плода.

Пример результата исследования:

Параметр Результат
Выявление гена RHD Не выявлен
Заключение: Резус-фактор плода генотипически отрицательный. Развитие резус-конфликта маловероятно (<0.1%).

Результат лабораторного исследования не является диагнозом. Тактика обследования, назначение лечения пациентам, интерпретация результатов лабораторных исследований определяется лечащим врачом.

Однако бывают случаи, когда фетальная ДНК плода в крови матери присутствует в недостаточном для анализа количестве. Такая ситуация может быть связана с физиологическими особенностями беременной женщины. При большой массе тела женщины снижено процентное соотношение фетальной ДНК плода к свободной циркулирующей ДНК матери. Ещё одно состояние, при котором может снижаться фракция фетальной ДНК — это анеуплоидии плода. В этих случаях рекомендуется повторная сдача анализа через 1-2 недели, когда уровень фетальной ДНК плода в крови матери возрастет.

Следует отметить, что существует небольшой процент женщин, у которых есть мутация в гене RHD. Мутации могут приводить к сокращению выработки белка или изменению его функциональных свойств (например, невозможности полноценного встраивания в мембрану эритроцита). В таких случаях генотип называют Weak D (D – ослабленный), что означает снижение иммунного потенциала. При серологическом исследовании статус таких женщин определяется как резус-отрицательный, хотя генотипически это резус-положительные женщины. При таких особенностях генотипа матери определить резус-принадлежность плода невозможно.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.

Источник

Определение резус-фактора (Rh) плода по крови матери является важной процедурой, которая укажет на течение беременности и возможные риски для плода. В случае несовпадения данного параметра у будущего малыша и родителя может возникнуть реакция отторжения со стороны материнского организма, что вызовет самопроизвольный аборт или замирание беременности.

Зачем определять

Резус-конфликт ставит под угрозу развитие и вынашивание плода, причем особенно резко негативные признаки проявляются в тех случаях, когда мать имеет отрицательный резус-фактор, а ребенок — положительный. В 80% случаев без приема средств, подавляющих работу иммунной системы, беременность прервется естественным путем. На оставшиеся 20% приходятся ситуации, когда ребенок рождался с патологиями, часто несовместимыми с дальнейшей жизнедеятельностью.

Читайте также:  Влияние жирной пищи на анализ крови

Анализ на определение резус-фактора плода является основным, поэтому его назначают сразу после постановки женщины на клинический учет.

Как проходит исследование

По современным методикам анализ резус-фактора плода производится неинвазивным путем на 12 неделе беременности. Исследование основано на ПЦР — полимеразной цепной реакции, которая позволяет сделать выводы об интересующем параметре плода с помощью взятия биоматериала из тела матери. В качестве последнего выступает венозная кровь, содержащая частицы ДНК ребенка, что никоим образом не вредит протеканию беременности.

Такой вариант исследования позволяет определить резус плода и вероятную группу крови, а также выявить эффективность назначения иммуноглобулинов при отсутствии выработки ответных антител, призванных уничтожить инородный объект в организме.

Результаты предоставляются через 3-5 дней после сдачи материала, и на их основе врач составляет дальнейший прогноз.

В редких случаях никаких препаратов не назначается и контроль осуществляется только посредством УЗИ.

Резус-конфликта

Статус резус-фактора определяется наличием белка, покрывающего поверхность эритроцита. Его отсутствие означает отрицательный Rh и наоборот. Несовместимость данных параметров приводит к развитию гемолитической болезни у плода, связанной с транспортом эритроцитов ребенка в кровь матери через плаценту. Это вызывает образование антител со стороны иммунной системы, которые способствуют распаду эритроцитов плода, попадая в его кровеносную систему, т. к. определяют эмбрион инородным объектом.

Диагностика состояния будущего ребенка проводится посредством УЗИ. Внешняя симптоматика развития отклонений заключается в следующем:

  • скопление жидкости в мягких тканях плода и, как следствие, видимый на ультразвуковом исследовании отек;
  • изменение стандартной позы зародыша.

Из-за отечности живота ноги плода оказываются разведены в стороны, а толщина пуповины незначительно превышает норму, из-за чего также происходит небольшое изменение положения. При обнаружении подобных признаков следует пройти анализ на определение резус-фактора ребенка.

Если иммунологическая несовместимость подтверждается, беременная женщина должна проходить периодические обследования на протяжении всего срока.

Для снижения вероятности развития осложнений пациентке назначают внутривенное введение иммуноглобулина с целью ликвидации антител, провоцирующих гемолитическую болезнь у зародыша.

Данное отклонение развивается только в том случае, когда материнская кровь является резус-положительной, т. к. при отрицательном значении ситуации конфликта возникнуть не может. Однако, если родители обладают различными резус-факторами, женщине следует пройти обследование на 12 неделе беременности, чтобы исключить вероятность патологии.

Кроме того, принято считать, что при первом зачатии антитела, провоцирующие гемолитическую болезнь, не вырабатываются, поэтому проблем с вынашиванием возникать не должно, но при каждой последующей беременности риск будет увеличиваться.

Источник

Рекомендованные сообщения

Девочки, помню, уже обсуждали, что есть какой анализ на определение резус-фактора плода.  Когда (срок Б) он делается, и как точно называется?

Беременность вторая, до этого была одна Б, родилась девочка с моими группой и резусом (2-), т.е. конфликта не было, ИГ не кололи.

Хочу один раз сдать анализ и определиться, надо ли заморачиваться с контролем титров. Насколько он точен? Берется только кровь матери, я правильно понимаю?

Вам  в женской на определенном сроке и так назначат . 

  • Нравится

    1

2 минуты назад, MariTim сказал(а):

Вам  в женской на определенном сроке и так назначат . 

В ту Б один раз назначили бесплатно, остальные разы платно. Сказали, что по ОМС только один бесплатный анализ. Потом сдавала за свой счёт. В эту ещё не знаю, на учёт не вставала.

5 минут назад, Salviae folia сказал(а):

анализ на определение резус-фактора плода

генетический анализ по крови матери? через жк бесплатно? точно?
если что, анализ на антитела — это не определение резуса плода, и делается много раз до родов

@Salviae folia в первую сдавала антитела, родился +, но не помню, чтоб кололи что-то. Конфликта не было. Второй раз сдавала платно, в Кулакова. Родился -, тоже не было конфликта, титры были в норме. В третий дали направление ,но бесплатно нет. Платно делала в Кулакова.  3500 вроде. 

1 минуту назад, Madame Cherry сказал(а):

генетический анализ по крови матери? через жк бесплатно? точно?
если что, анализ на антитела — это не определение резуса плода, и делается много раз до родов

Я хочу платно сдать. 

А анализ на антитела все равно сдавать за свой счет. (Только 1 раз бесплатно)

Девочки, я не про титры. Про него я знаю. А именно на резус-фактор плода. Хочу поподробнее узнать.

@Salviae folia не поняла, почему на антитела-платно? Я сдавала каждые 2 недели, начиная с 10 недель, бесплатно. 

Сдавала на титры на резус и на группу крови (у меня 1-, у мужа 2+) все анализы бесплатно всю беременность

2 минуты назад, Алёнка 73 сказал(а):

@Salviae folia не поняла, почему на антитела-платно? Я сдавала каждые 2 недели, начиная с 10 недель, бесплатно. 

В каком году? В 16-м мне сказали, что финансирование урезали, теперь только 1 раз за всю Б (бред, конечно). А раньше каждые 2 недели сдавали бесплатно.

Читайте также:  У ребенка температура 37 и 2 анализы крови хорошие

Может за 3,5 года что-то поменялось…

Сдавала в эту Б, так и называется на резус-фактор плода по крови матери, но у меня не получился, хотя срок был подходящий. Пересдала потом второй раз и тоже нет результата. Не находили фетальные клетки плода.

Только что, Галина сказал(а):

Сдавала в эту Б, так и называется на резус-фактор плода по крови матери, но у меня не получился, хотя срок был подходящий. Пересдала потом второй раз и тоже нет результата. Не находили фетальные клетки плода.

Ну дела, а деньги взяли? Сейчас посмотрела — 6,5 тысяч в Инвитро стоит. Тогда дешевле платно на титры сдавать

1 минуту назад, Salviae folia сказал(а):

Ну дела, а деньги взяли? Сейчас посмотрела — 6,5 тысяч в Инвитро стоит. Тогда дешевле платно на титры сдавать

да, взяли, но переделывали бесплатно, без дополнительной оплаты. Я делала за 3500, особо разбираться не было времени, т.к. улетали в отпуск.

2 минуты назад, Salviae folia сказал(а):

В каком году? В 16-м мне сказали,

в 16-м сдавала бесплатно каждые 2 недели.
позвоните в свою страховую, что-то они там мутят…
 

2 минуты назад, Salviae folia сказал(а):

6,5 тысяч в Инвитро стоит

нет 100% гарантии, что получится, как и любой генетический анализ плода по крови матери

  • Нравится

    1

1 минуту назад, Алёнка 73 сказал(а):

Спасибо. Буду тогда настаивать на бесплатных анализах на титры, если что — через страховую.

  • Нравится

    1

Позвоните в страховую компанию, которая дала вам полис омс, и узнайте. Но у нас точно бесплатно, и в этом году тоже. Просто родственница сейчас беременная тоже с отриц резусом

  • Нравится

    1

@Галина а на каком сроке вы сдавали? Чем больше срок, тем больше шансов, что соберут нужное количество клеточек?

3 минуты назад, Salviae folia сказал(а):

@Галина а на каком сроке вы сдавали? Чем больше срок, тем больше шансов, что соберут нужное количество клеточек?

в 14 недель, пересдала в 16. У них написано, что с 8-10 недель определяет

  • Спасибо

    1

Определение резуса плода по крови матери не назначают в ЖК, делают платно. Желательно делать не ранее 8-9 недель, чем позже, тем больше шансов, что анализ получится.

В ЖК в 2016-2017 гг каждые 2 недели сдавала на резусные антитела с 15 недель, и дважды на групповые антитела (к концу года закончились бесплатные талончики, я плюнула и не стала бодаться, сдавала платно).

Я хотела сдать платно в 2016 году, меня развернули сказали жди срока более подходящего, я хотела сдать в 16 недель, сказали приходить после 20 недель. Но там у меня зашитие шейки и иммуноглобулин коллоли и я уже не стала сдавать. 

А я когда первый скрининг делала, там в результатах, помимо прочего, был резус-фактор плода… Я думала , всем делают с «-»

В Москве определение резус — фактора по крови матери делают бесплатно по направлению из жк. Вроде с этого года это ввели. Я сдавала кровь во время первого скрининга. Анализ на титры тоже делают без проблем. 

Я в 17 сдавала каждые две недели, бесплатно, и в 28 недель иммуноглобулин бесплатно делала, сын родился 1-, как и я. 

Про такой анализ, даже не слышала. Учту на будущее, тоже лучше бы один раз сдала, чем каждые две недели в жк кататься. Причем у нас время сдачи обычных анализов и на титры не совпадает, с 13 до 14 титры, а обычные до 9 утра, иногда два раза в день ездить приходилось, вот классно было с работы уходить (

@Salviae folia вроде, про ошибки инфу на просторах интернета  не встречала

7 минут назад, still* сказал(а):

@Salviae folia вроде, про ошибки инфу на просторах интернета  не встречала

Я один случай нашла. По анализу показало, что у ребенка отрицательный резус, а к концу Б оказалось, что конфликт. Сдали титры — они в 10 раз повышены… Так что вот хз теперь… 

А у вас какой город? Девочки правильно говорят, звоните в страховую. У меня тоже «-» , сдаю кровь на антитела в ЖК раз в месяц, пока ничего, через пару недель буду ИГ колоть, Москва. По поводу определения резус-фактора плода, назначали бесплатно через ЖК в РД, но я не успела, этот анализ отменили, вообще????  платно не хочу, мне проще на антитела сдать и ИГ уколоть, хотя в 1ю Б он мне к сожалению не помог(

Присоединяйтесь к нашим обсуждениям!

Вы должны быть пользователем, чтобы оставить комментарий

Источник