Анализ на определение группы крови ребенка по крови матери

Метод определения
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.

Исследуемый материал
Плазма крови (ЭДТА)

Обнаружение гена RHD плода в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором применяют с целью прогнозирования риска развития резус-конфликта и гемолитической болезни плода и новорожденного.

Резус (Rh) – одна из важнейших систем эритроцитарных антигенов (наряду с системой АВ0), клинически значимая при оценке возможности возникновения резус-конфликта и риска развития гемолитической болезни плода и новорожденного.

В системе резус различают пять антигенов. Наиболее иммуногенным является антиген D, аминокислотная последовательность которого кодируется геном RHD. Присутствие антигена D на поверхности эритроцитов определяет положительный резус-фактор (Rh+). Доля резус-положительных лиц, носителей антигена D, в популяции составляет около 86%, а резус-отрицательных лиц (Rh-), не имеющих антигена D – около 14%.

Течение беременности резус-положительным плодом у резус-отрицательных женщин* часто осложняется развитием гемолитической болезни плода, связанной с трансплацентарным переносом эритроцитов плода в кровоток матери. 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D-резус-антигеном. Попадая в кровь резус-отрицательной матери, он вызывает образование специфических антител, которые проникают через плаценту и разрушают эритроциты плода. Это влечет за собой развитие гемолитической болезни плода и новорожденного. При раннем проявлении резус-конфликт может послужить причиной самопроизвольного прерывания беременности или преждевременных родов. Сенсибилизация матери к D-антигену и риск развития резус-конфликта возрастают с каждой последующей беременностью резус-положительным плодом независимо от того, прервалась ли беременность или завершилась родоразрешением.

В настоящее время при выявлении резус-конфликта назначают следующий комплекс исследований:

измерение уровня специфичных антител матери к D-антигену плода;
получение плодного материала при хорион- и плацентобиопсии в ходе амнио- и кордоцентеза, что относится к инвазивным методам;
допплерометрическое исследование скорости кровотока в аорте и средней мозговой артерии плода.

Риск самопроизвольного прерывания беременности при применении инвазивных методов исследования составляет 2-3%, а отсутствие антител не гарантирует, что плод резус-отрицательный, т. к. даже при положительном резусе у плода антитела у матери могут не вырабатываться по причине целостности плаценты в момент обследования или слабого иммунного ответа. Ситуация осложняется тем, что резус-конфликт может возникнуть на любом сроке беременности. Кроме того, возможна сенсибилизация матери. Выявление ДНК плода (фетальной фракции, свободно циркулирующей ДНК, фетДНК) в крови матери обладает рядом преимуществ:

относится к неинвазивным для плода процедурам, не несет угрозы течению беременности, не вызывает осложнений;
исследование фетДНК возможно, начиная со срока 10 акушерских недель беременности;
точность результата 96 – 100%**
позволяет оценить целесообразность назначения терапии иммуноглобулином при отсутствии в крови беременной женщины анти-резусных антител на сроке 20 недель.

Аналитические показатели метода

Определяемые участки ДНК: 7-й и 10-й экзоны гена RHD. Диагностическая чувствительность: 92-100%. Диагностическая специфичность: 90-100%. Чувствительность метода составляет 150 копий геномной ДНК (суммарной ДНК матери и плода), что соответствует 400 копиям гена RHD плода в 1,0 мл исследуемого образца плазмы.

Ограничения метода

У 1% серологически резус-отрицательных женщин определяется наличие гена RHD. Это происходит в следующих случаях:

Ген RHD присутствует и генотипически резус-фактор будет положительным, но в результате мутаций D-антиген не синтезируется и серологическим методом определяется как отрицательный;
Ген RHD присутствует полностью или частично, и генотипически резус-фактор будет положительным; из-за мутаций синтезируется измененный D-антиген. Серологически это определяется или как слабый резус-фактор, или как нестабильно положительный.

По крови таких пациенток определить резус-фактор плода методом ПЦР невозможно. Чаще всего отрицательный резус-фактор обусловлен полным отсутствием гена RHD. В таких случаях применяют серологический метод вместе с ПЦР. Резус-фактор определяется как отрицательный при совпадении отрицательных результатов тестов.

* У беременных женщин, имеющих резус-положительную принадлежность, проблем совместимости по резус-фактору с плодом не возникает.

** Величина обусловлена состоянием плаценты, особенностью течения беременности и возрастает с увеличением срока беременности.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Противопоказания к проведению исследования:

Трансплантации органов и тканей в анамнезе у пациентки

Литература

Costa J.M., Giovangrandi Y., Ernault P., Lohmann L., Nataf V., El Halali N., Gautier E. Fetal RHD genotyping in maternal serum during the first trimester of pregnancy. British journal of haematology. 2002;119:255-260.
Finning K.M., Martin P.G., Soothill P.W., Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion. 2002;42:1079-1085.
Freeman K., Osipenko L., Clay D., Hyde J., Szczepura A. A Review of Evidence on Non-invasive Prenatal Diagnosis (NIPD): Tests for Fetal RHD Genotype. Workpackage 6, SAFE Network of Excellence Warwick Medical School, UK. 2006.
Wagner F.F., Frohmajer A., Flegel W.A. RHD positive haplotypes in D negative Europeans. BioMed Central genetics. 2001;15:10.
Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. – СПб. 2004:188.
Инструкция по применению набора реагентов для выявления гена RHD плода в крови матери методом ПЦР в режиме реального времени Резус-фактор плода ООО «ДНК-технология». Регистрационное удостоверение № ФСР 2017/5310.

Источник

Метод исследования: Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Иммунологический конфликт по системе резус является актуальной проблемой. Гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН) входит в пятерку самых частых пренатальных патологий. ГБН развивается, как правило, при беременности женщины с резус-отрицательной принадлежностью резус-положительным плодом. Мембрана эритроцитов у людей с резус-положительным статусом пронизана комплексом специфических белков, которые на поверхности клетки образуют своеобразный комплекс системы антигенов. Наиболее иммуногенным и значимым среди них является D-антиген. Ген RHD кодирует синтез белка RhD (D-антигена). В случае делеции участка хромосомы, на которой расположен ген RHD, на поверхности эритроцита отсутствует белок системы резус. Таким образом, резус-отрицательный генотип определяет резус-отрицательную принадлежность крови (Rh-). Иммунная система беременной женщины с Rh- атакует эритроциты плода, на поверхности которых есть чужеродный для нее белок RhD. Эритроциты разрушаются, что ведет к соответствующей клинической картине — анемии плода, гемолитической желтухе, холестазу, энцефалопатии и водянке плода. Тяжесть клинических проявлений не всегда можно предугадать, и зависит она от защитных механизмов по сохранению беременности в каждом конкретном случае. Определить резус-принадлежность плода очень важно для предупреждения развития ГБН и для своевременного проведения необходимых мер ее профилактики. Так же данное исследование дает возможность избежать диагностических манипуляций, направленных на многократное определение уровня антител и отказаться от инвазивных процедур (кордоцентез), применение которых может стать причиной прерывания беременности и ее осложнений.

Во время беременности происходит обновление клеток плаценты и в кровоток матери в небольшом количестве попадает внеклеточная фетальная ДНК плода. Определение резус-фактора происходит путем исследования непосредственно фетальной ДНК плода в крови матери и является неинвазивным, высоко информативным, достоверным и выполняется всего один раз. Исследование позволяет дать ответ о резус-принадлежности плода уже на ранних сроках беременности (начиная с 8 недель). В процессе исследования из крови матери выделяют фракцию ДНК плода, и далее ДНК плода исследуют на наличие гена RHD. При выявлении гена RHD, можно сделать вывод о резус-положительной принадлежности, при отсутствии гена RHD соответственно о резус-отрицательной принадлежности. С целью предупреждения негативных последствий, важно как можно раньше выявить резус-статус плода.

Показания к назначению исследования:

ведение беременности у женщин с отрицательным резус-фактором для своевременного выявления риска развития резус-конфликта;
перед профилактическим введением иммуноглобулина. В случае если в крови беременной женщины с отрицательным резус-фактором отсутствуют антитела к D-антигену плода, но при этом резус-статус отца ребенка положительный;
при наличии в анамнезе у женщины с отрицательным резус-фактором хирургического прерывания беременности или выкидыша. При резус-конфликте в анамнезе женщина заведомо сенсибилизирована антирезусными антителами. Для прогнозирования развития резус-конфликта необходимо определить резус-фактор плода.

Пример результата исследования:

Параметр	Результат
Выявление гена RHD	Не выявлен
Заключение: Резус-фактор плода генотипически отрицательный. Развитие резус-конфликта маловероятно (<0.1%).

Результат лабораторного исследования не является диагнозом. Тактика обследования, назначение лечения пациентам, интерпретация результатов лабораторных исследований определяется лечащим врачом.

Однако бывают случаи, когда фетальная ДНК плода в крови матери присутствует в недостаточном для анализа количестве. Такая ситуация может быть связана с физиологическими особенностями беременной женщины. При большой массе тела женщины снижено процентное соотношение фетальной ДНК плода к свободной циркулирующей ДНК матери. Ещё одно состояние, при котором может снижаться фракция фетальной ДНК — это анеуплоидии плода. В этих случаях рекомендуется повторная сдача анализа через 1-2 недели, когда уровень фетальной ДНК плода в крови матери возрастет.

Следует отметить, что существует небольшой процент женщин, у которых есть мутация в гене RHD. Мутации могут приводить к сокращению выработки белка или изменению его функциональных свойств (например, невозможности полноценного встраивания в мембрану эритроцита). В таких случаях генотип называют Weak D (D – ослабленный), что означает снижение иммунного потенциала. При серологическом исследовании статус таких женщин определяется как резус-отрицательный, хотя генотипически это резус-положительные женщины. При таких особенностях генотипа матери определить резус-принадлежность плода невозможно.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.

Источник

Располагая штатом специалистов с 15-летним опытом в сфере исследования человеческого генома, а также передовым материально-техническим обеспечением для проведения лабораторных анализов, ДНК-центр «ИнЛаб Генетикс» предлагает сдать тест и установить резус фактор плода по крови матери. Генетическая экспертиза позволит установить группу крови эмбриона на ранних сроках беременности.

Зачем необходимо узнавать резус-фактор плода?

Определение резуса (Rh) необходимо для оценки возможности конфликта и риска развития гемолитического заболевания у новорожденного. Процедура подразумевает:

Инвазивное вмешательство, с забором материалов посредством биопсии;
Неинвазивный анализ на основе крови, содержащей генетическую информацию будущего ребенка.

При своевременном выявлении отклонений, врач сможет предпринять комплекс профилактических мер, способствующих нормальному развитию и дальнейшему рождению ребенка.

Неинвазивное определение резус-фактора ребенка в генетическом центре «INLABgenetics»

Работать с нами выгодно, ведь мы предлагаем:

Бесплатные консультации от экспертов;
Оперативность проведения анализов;
Высокую (до 99,99999%) точность исследований;
Документальное оформление полученных результатов;
Доступные цены.

Менеджеры «ИнЛаб Генетикс» готовы ответить каждому. Свяжитесь с нами по телефону, с помощью e-mail, либо посетите офис нашей лаборатории в Москве!

ПРЕИМУЩЕСТВА ЛАБОРАТОРИИ

Точность

Скорость

Конфиденциальность

Сертификация

Гарантия низкой цены

Для суда

Выезд по городу

КАК СДЕЛАТЬ АНАЛИЗ

Выберите удобную форму оформления заказа

Изучите рекомендации по подготовке

Сдайте необходимый биоматериал

Получите результаты анализов

Инструкция предназначена для самостоятельного забора ДНК образцов. Все материалы можно бесплатно получить лично или по почте у нашей лаборатории. Внимательно следуйте инструкции, соблюдая следующие ограничения:

— За час до забора не есть, не курить и не жевать жевательную резинку;

— Грудных детей не кормить за два часа до забора, промыт рот ребенка теплой водой.

Инструкция:

Вымойте тщательно руки с мылом или наденьте резиновые перчатки перед началом процедуры;
На одного участника теста возьмите один конверт для забора образцов. Заранее подпишите конверт, заполнив все поля на лицевой стороне конверта, чтобы не проткнуть ручкой конверт после взятия образцов;
На одного участника возьмите одну упаковку с зондами (2 зонда в упаковке);
Аккуратно откройте упаковку с зондами и возьмите один зонд за пластиковый конец;
Введите зонд в ротовую полость. Плотно прижмите зонд к внутренней стороне щеки и проведите зондом вверх — вниз по щеке 8-12 раз. При этом пальцами немного проворачивайте зонд;
Подсушите зонд 20-30 секунд на воздухе и уберите в заранее подписанный конверт для образцов;
Повторите пункты 5-6 со вторым зондом и второй щекой;
Запечатайте, используя специальную клейкую полосу конверт с образцами;
Передайте образцы в пункт приема ДНК образцов или отправьте почтой на адрес ДНК лаборатории, который можно увидеть в разделе Контакты.

Храните конверт с образцами при комнатной температуре в сухом месте. Образец может храниться до трех месяцев.

ВИДЫ НЕСТАНДАРТНЫХ ОБРАЗЦОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Женские гигиенические тампоны
Детские соски-пустышки
Костные останки, зубы
Срезанные ногти
Сперма на ткани
Презерватив
Жвачка

Питьевые трубочки-соломинки
Ушная сера на ватной палочке
Волосы с корешками
Носовой платок
Кровь на ткани
Зубные щетки
Окурки

Заказать ДНК тест в лаборатории «ИнЛаб Генетикс» можно:

Связавшись со специалистами по телефону 8 (800) 333-62-90
Написав нам через форму обратной связи
Придя лично в пункт приема образцов по адресу, указанному в разделе Контакты.

Оплатить ДНК тест можно после получения и проверти Ваших образцов специалистами лаборатории:

Наличными или банковской картой нашим специалистам в пункте приема образцов;
На нашем сайте в разделе Как оплатить ДНК тест;
В любом городе в отделении Сбербанка или любого другого Банка по квитанции;
Нашим выездным специалистам наличными или картой при передаче им образцов ДНК;
По расчетному счету для юридических лиц и ИП, с предоставлением всех лицензий, сертификатов и бухгалтерских документов.

Способы получения результата исследования смотрите в разделе Как получить заключение лаборатории.

О лаборатории

«InLab Genetics» является ведущей специализированной ДНК лабораторией в России. Основана специалистами с мировым именем, посвятивших генетике более 15 лет. Оснащение лаборатории высокоточным и современным оборудованием позволяет нам гарантировать точность и надежность всех проводимых исследований и со всей ответственностью утверждать, что качество – это основа любого теста, который мы делаем.

Нами проведено более 1 млн. ДНК анализов;
С нами сотрудничает более 500 партнеров по всей России;
Работаем со всеми судами Российской Федерации;
Нами постоянно проводятся автоматизация и совершенствование всех процессов;
Лаборатория имеет все необходимые лицензии и сертификаты.

(1 голос, в среднем: 5 из 5)

Источник

Метод определения
Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами — агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрёстный метод).

При необходимости (обнаружение А2-подтипа) проводится дополнительное тестирование с использованием специфических реактивов.

Исследуемый материал
Цельная кровь (с ЭДТА)

Определяет принадлежность к определённой группе крови по системе АВО.

Группы крови — это генетически наследуемые признаки, не изменяющиеся в течение жизни при естественных условиях. Группа крови представляет собой определённое сочетание поверхностных антигенов эритроцитов (агглютиногенов) системы АВО.

Определение групповой принадлежности широко используется в клинической практике при переливании крови и её компонентов, в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности.

Система групп крови AB0 является основной системой, определяющей совместимость и несовместимость переливаемой крови, т. к. составляющие её антигены наиболее иммуногенны. Особенностью системы АВ0 является то, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Систему группы крови АВ0 составляют два групповых эритроцитарных агглютиногена (А и В) и два соответствующих антитела — агглютинины плазмы альфа (анти-А) и бета (анти-В).

Различные сочетания антигенов и антител образуют 4 группы крови:

Группа 0 (I) — на эритроцитах отсутствуют групповые агглютиногены, в плазме присутствуют агглютинины альфа и бета;
Группа А (II) — эритроциты содержат только агглютиноген А, в плазме присутствует агглютинин бета;
Группа В (III) — эритроциты содержат только агглютиноген В, в плазме содержится агглютинин альфа;
Группа АВ (IV) — на эритроцитах присутствуют антигены А и В, плазма агглютининов не содержит.

Определение групп крови проводят путём идентификации специфических антигенов и антител (двойной метод или перекрёстная реакция).

Несовместимость крови наблюдается, если эритроциты одной крови несут агглютиногены (А или В), а в плазме другой крови содержатся соответствующие агглютинины (альфа- или бета), при этом происходит реакция агглютинации. Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая групповую совместимость. Чтобы избежать несовместимости крови донора и реципиента, необходимо лабораторными методами точно определить их группы крови. Лучше всего переливать кровь, эритроциты и плазму той же группы, которая определена у реципиента. В экстренных случаях эритроциты группы 0, но не цельную кровь!, можно переливать реципиентам с другими группами крови; эритроциты группы А можно переливать реципиентам с группой крови А и АВ, а эритроциты от донора группы В — реципиентам группы В и АВ.

Карты совместимости групп крови (агглютинация обозначена знаком «+»)

Кровь донора	Кровь реципиента
Кровь донора	0 (I)	A (II)	B (III)	AB (IV)
0 (I)	—	+	+	+
A (II)	+	—	+	+
B (III)	+	+	—	+
AB (IV)	+	+	+	—

Эритроциты донора	Кровь реципиента
Эритроциты донора	0 (I)	A (II)	B (III)	AB (IV)
0 (I)	—	—	—	—
A (II)	+	—	+	—
B (III)	+	+	—	—
AB (IV)	+	+	+	—

Групповые агглютиногены находятся в строме и оболочке эритроцитов. Антигены системы АВО выявляются не только на эритроцитах, но и на клетках других тканей или даже могут быть растворёнными в слюне и других жидкостях организма. Развиваются они на ранних стадиях внутриутробного развития, у новорожденного уже находятся в существенном количестве. Кровь новорожденных детей имеет возрастные особенности — в плазме могут ещё не присутствовать характерные групповые агглютинины, которые начинают вырабатываться позже (постоянно обнаруживаются после 10 месяцев) и определение группы крови у новорождённых в этом случае проводится только по наличию антигенов системы АВО.

Помимо ситуаций, связанных с необходимостью переливания крови, определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребёнка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных.

Гемолитическая болезнь новорождённых — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус- (С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в её организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.

Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учёта резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей. Существуют разновидности (слабые варианты) антигена А (в большей степени) и реже антигена В. Что касается антигена А, имеются варианты: сильный А1 (более 80%), слабый А2 (менее 20%), и еще более слабые (А3, А4, Ах — редко). Это теоретическое понятие имеет значение для переливания крови и может вызвать несчастные случаи при отнесении донора А2 (II) к группе 0 (I) или донора А2В (IV) — к группе В (III), поскольку слабая форма антигена А иногда обуславливает ошибки при определении группы крови системы АВO. Правильное определение слабых вариантов антигена А может требовать повторных исследований со специфическими реагентами.

Снижение или полное отсутствие естественных агглютининов альфа и бета иногда отмечается при иммунодефицитных состояниях:

новообразования и болезни крови — болезнь Ходжкина, множественная миелома, хроническая лимфатическая лейкемия;
врождённые гипо- и агаммаглобулинемия;
у детей раннего возраста и у пожилых;
иммуносупрессивная терапия;
тяжёлые инфекции.

Трудности при определении группы крови вследствие подавления реакции гемагглютинации возникают также после введения плазмозаменителей, переливания крови, трансплатации, септицемии и пр.

Наследование групп крови. В основе закономерностей наследования групп крови лежат следующие понятия. В локусе гена АВО возможны три варианта (аллеля) — 0, A и B, которые экспрессируются по аутосомно-кодоминантному типу. Это означает, что у лиц, унаследовавших гены А и В, экспрессируются продукты обоих этих генов, что приводит к образованию фенотипа АВ (IV). Фенотип А (II) может быть у человека, унаследовавшего от родителей два гена А или гены А и 0. Соответственно фенотип В (III) — при наследовании двух генов В или В и 0. Фенотип 0 (I) проявляется при наследовании двух генов 0. Таким образом, если оба родителя имеют II группу крови (генотипы AА или А0), кто-то из их детей может иметь первую группу (генотип 00). Если у одного из родителей группа крови A (II) с возможным генотипом АА и А0, а у другого B (III) с возможным генотипом BB или В0 — дети могут иметь группы крови 0 (I), А (II), B (III) или АВ (IV).

Источник