Анализ на определение группы крови rapidvet цена
Метод определения
Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами — агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрёстный метод).
При необходимости (обнаружение А2-подтипа) проводится дополнительное тестирование с использованием специфических реактивов.
Исследуемый материал
Цельная кровь (с ЭДТА)
Определяет принадлежность к определённой группе крови по системе АВО.
Группы крови — это генетически наследуемые признаки, не изменяющиеся в течение жизни при естественных условиях. Группа крови представляет собой определённое сочетание поверхностных антигенов эритроцитов (агглютиногенов) системы АВО.
Определение групповой принадлежности широко используется в клинической практике при переливании крови и её компонентов, в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности.
Система групп крови AB0 является основной системой, определяющей совместимость и несовместимость переливаемой крови, т. к. составляющие её антигены наиболее иммуногенны. Особенностью системы АВ0 является то, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Систему группы крови АВ0 составляют два групповых эритроцитарных агглютиногена (А и В) и два соответствующих антитела — агглютинины плазмы альфа (анти-А) и бета (анти-В).
Различные сочетания антигенов и антител образуют 4 группы крови:
Группа 0 (I) — на эритроцитах отсутствуют групповые агглютиногены, в плазме присутствуют агглютинины альфа и бета;
Группа А (II) — эритроциты содержат только агглютиноген А, в плазме присутствует агглютинин бета;
Группа В (III) — эритроциты содержат только агглютиноген В, в плазме содержится агглютинин альфа;
Группа АВ (IV) — на эритроцитах присутствуют антигены А и В, плазма агглютининов не содержит.
Определение групп крови проводят путём идентификации специфических антигенов и антител (двойной метод или перекрёстная реакция).
Несовместимость крови наблюдается, если эритроциты одной крови несут агглютиногены (А или В), а в плазме другой крови содержатся соответствующие агглютинины (альфа- или бета), при этом происходит реакция агглютинации. Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая групповую совместимость. Чтобы избежать несовместимости крови донора и реципиента, необходимо лабораторными методами точно определить их группы крови. Лучше всего переливать кровь, эритроциты и плазму той же группы, которая определена у реципиента. В экстренных случаях эритроциты группы 0, но не цельную кровь!, можно переливать реципиентам с другими группами крови; эритроциты группы А можно переливать реципиентам с группой крови А и АВ, а эритроциты от донора группы В — реципиентам группы В и АВ.
Карты совместимости групп крови (агглютинация обозначена знаком «+»)
| Кровь донора | Кровь реципиента | |||
| 0 (I) | A (II) | B (III) | AB (IV) | |
| 0 (I) | — | + | + | + |
| A (II) | + | — | + | + |
| B (III) | + | + | — | + |
| AB (IV) | + | + | + | — |
| Эритроциты донора | Кровь реципиента | |||
| 0 (I) | A (II) | B (III) | AB (IV) | |
| 0 (I) | — | — | — | — |
| A (II) | + | — | + | — |
| B (III) | + | + | — | — |
| AB (IV) | + | + | + | — |
Групповые агглютиногены находятся в строме и оболочке эритроцитов. Антигены системы АВО выявляются не только на эритроцитах, но и на клетках других тканей или даже могут быть растворёнными в слюне и других жидкостях организма. Развиваются они на ранних стадиях внутриутробного развития, у новорожденного уже находятся в существенном количестве. Кровь новорожденных детей имеет возрастные особенности — в плазме могут ещё не присутствовать характерные групповые агглютинины, которые начинают вырабатываться позже (постоянно обнаруживаются после 10 месяцев) и определение группы крови у новорождённых в этом случае проводится только по наличию антигенов системы АВО.
Помимо ситуаций, связанных с необходимостью переливания крови, определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребёнка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных.
Гемолитическая болезнь новорождённых — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус- (С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в её организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.
Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учёта резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей. Существуют разновидности (слабые варианты) антигена А (в большей степени) и реже антигена В. Что касается антигена А, имеются варианты: сильный А1 (более 80%), слабый А2 (менее 20%), и еще более слабые (А3, А4, Ах — редко). Это теоретическое понятие имеет значение для переливания крови и может вызвать несчастные случаи при отнесении донора А2 (II) к группе 0 (I) или донора А2В (IV) — к группе В (III), поскольку слабая форма антигена А иногда обуславливает ошибки при определении группы крови системы АВO. Правильное определение слабых вариантов антигена А может требовать повторных исследований со специфическими реагентами.
Снижение или полное отсутствие естественных агглютининов альфа и бета иногда отмечается при иммунодефицитных состояниях:
новообразования и болезни крови — болезнь Ходжкина, множественная миелома, хроническая лимфатическая лейкемия;
врождённые гипо- и агаммаглобулинемия;
у детей раннего возраста и у пожилых;
иммуносупрессивная терапия;
тяжёлые инфекции.
Трудности при определении группы крови вследствие подавления реакции гемагглютинации возникают также после введения плазмозаменителей, переливания крови, трансплатации, септицемии и пр.
Наследование групп крови. В основе закономерностей наследования групп крови лежат следующие понятия. В локусе гена АВО возможны три варианта (аллеля) — 0, A и B, которые экспрессируются по аутосомно-кодоминантному типу. Это означает, что у лиц, унаследовавших гены А и В, экспрессируются продукты обоих этих генов, что приводит к образованию фенотипа АВ (IV). Фенотип А (II) может быть у человека, унаследовавшего от родителей два гена А или гены А и 0. Соответственно фенотип В (III) — при наследовании двух генов В или В и 0. Фенотип 0 (I) проявляется при наследовании двух генов 0. Таким образом, если оба родителя имеют II группу крови (генотипы AА или А0), кто-то из их детей может иметь первую группу (генотип 00). Если у одного из родителей группа крови A (II) с возможным генотипом АА и А0, а у другого B (III) с возможным генотипом BB или В0 — дети могут иметь группы крови 0 (I), А (II), B (III) или АВ (IV).
Источник
В связи с тем, что практика ветеринарной гемотрансфузиологии за последние годы пережила период значительного роста, возросла значимость определения групп крови у кошек. В частности, растет необходимость в определении групп крови, поскольку только при предварительном определении группы крови у реципиента при переливании крови возможно избежать потенциально опасных для жизни ошибок при переливании.
У кошек система групповых антигенов крови описана как состоящая из двух антигенов, выраженных либо одиночно, либо в сочетании: А группа, В группа и АВ группа. Антигены неродственны человеческим А В О-антигенам и определяются по аллоиммунным сывороткам кошачьих. Встречаемость группы крови варьируется в зависимости от породы. Группы крови у кошек передаются по наследству как простые аутосомные признаки, при этом А группа доминирует над В группой. Большинство кошек обладают антигеном А, и около одной трети из них имеют природное анти-В антитело с низким титром. Кошки с В группой все имеют природное анти-А антитело с высоким титром.
Инструкция
Анализ на определение группы крови RapidVet
Для проведения в лабораторных условиях Feline
Описание и использование: В связи с тем, что практика ветеринарной гемотрансфузиологии за последние годы пережила период значительного роста, возросла значимость определения групп крови у кошек. В частно-сти, растет необходимость в определении групп крови, поскольку только при предварительном определении группы крови у реципиента при переливании крови возможно избежать потенциально опасных для жизни ошибок при переливании.
У кошек система групповых антигенов крови описана как состоящая из двух антигенов, выраженных либо одиночно, либо в сочетании: А группа, В группа и АВ группа. Антигены неродственны человеческим А В О-антигенам и определяются по аллоиммунным сывороткам кошачьих. Встречаемость группы крови варьирует-ся в зависимости от породы. Группы крови у кошек передаются по наследству как простые аутосомные призна-ки, при этом А группа доминирует над В группой. Большинство кошек обладают антигеном А, и около одной трети из них имеют природное анти-В антитело с низким титром. Кошки с В группой все имеют природное анти-А антитело с высоким титром. Недавно проведенное в Соединенных Штатах исследование показало, что процент кошек с В антигеном варьируется от 0,3% до 59% в зависимости от породы. Ниже приводятся породы с высокой частотностью В группы крови: Кошки с АВ группой встречаются редко, и поскольку у таких кошек имеются и А и В антигены на мембране эритроцитов, то они не имеют либо не вырабатывают анти-А или анти-В антитела.
Определение группы крови у кошек важно в ветеринарной медицинской практике для предотвращения трансфузионных реакций у кошек с А или В эритроцитами. У кошек с эритроцитами В при переливании крови А группы сразу же проявляется катастрофическая системная анафилаксия (пониженное давление, брадикардия, одышка, мочеиспускание, стул, рвота и сильное неврологическое угнетение), а также гемолитические признаки (гемоглобинемия и гемоглобинурия) в связи с природным мощным анти-А антителом. У кошек с эритроцитами А и природным слабым анти-В антителом умеренное проявление реакции при поступлении крови В, но даже в таком случае возможно различие в воспроизводимости в медицинских условиях, поскольку эритроциты при переливании обладают коротким жизненным циклом. У остальных кошек с эритроцитами А при первичном переливании крови В группы реакция не проявляется, но в результате развиваются умеренные титры анти-В антитела, что может привести к серьезной реакции при последующем переливании несовместимой крови. Определение группы крови у кошек также важно при принятии решений о скрещивании и при выявлении медицинских проблем у котят.
При несовместимости материнской и фетальной крови возможно возникновение гемолитической болезни новорожденных. Так как у кошек со В группой в природе встречается анти-А антитела с высоким титром, то у котят с А группой может возникнуть гемолитическая болезнь новорожденных в результате скрещивания самки с В группой и самца со А группой. Антитело против А группы материнского происхождения появляется в молози-ве, откуда передается новорожденному котенку, и, следовательно, может разрушить его эритроциты. Клиниче-ски котенок при рождении может считаться нормальным, но признаки проявляются после кормления, происходит увядание и смерть наступает в течение первых дней жизни. Определение групп крови самки и самца до скрещивания, в сочетании с соответствующим генетическим консультированием, может свести гемолитическую болезнь новорожденных к минимуму.
Предназначение RapidVet-H (для кошачьих) – использование с целью классификации кошек по группам крови – А, В, АВ.
В обоих случаях титры иммунных сывороток, лиофилизированных на тестовой плате, восстанавливаются и хорошо смешиваются с цельной кровью пациента. Все эритроциты А группы реагируют со своими специфиче-скими титрами иммунных сывороток, вызывая агглютинацию; все эритроциты В группы реагируют подобным образом; все эритроциты АВ группы реагируют с обоими титрами иммунных сывороток, вызывая агглютинацию во всех случаях. Результаты определяются визуально. Агглютинация в лунках «А» и в лунках «В» значительно различается в связи с разной природой используемых титров иммунных сывороток.
Оговорка: у некоторых кошачьих происходит аутоагглютинация различной степени в связи с сывороточными факторами, вызывающими агглютинацию собственных эритроцитов пациента. Если такое явление проявляет-ся в условиях проведения испытания, то определение группы у данного пациента невозможно без отделения сыворотки и последовательного промывания оставшихся эритроцитов перед проведением теста. В комплекте RapidVet-H (для кошачьих) имеется лунка, предназначенная для проведения скрининга таких пациентов.
Принцип и интерпретация анализа: Анализ RapidVet-H (для кошачьих) основан на реакции агглютинации, которая происходит, когда эритроцит, содержащий антиген А, В либо АВ группы на поверхности мембраны, взаимодействует с лиофилизированными титрами иммунной сыворотки, специфичной для конкретного антигена.
Лиофилизированный материал трудно визуально различить на тестовой плате.
Эритроциты А группы характеризуются формой NeuGc2GD3 гликолипидного антигена на поверхности мембраны.
В RapidVet-H (для кошачьих) используется крысиное моноклональное антитело, с доказанной специфичностью к этому антигену, лиофилизированному на тестовой плате. Молекула антитела придает ему способность сшивания и агглютинации антигенов, специфичных для А группы крови.
Эритроциты В группы характеризуются формой NeuАc2GD3 нейраминовой кислоты, содержащейся в ганглиози-де, и нехваткой NeuGc, содержащегося в эритроцитах В группы. Установлена связующая особенность данной формы с лектином из пшеницы обыкновенной. В RapidVet-H (для кошачьих) используется лектин из пшеницы обыкновенной для определения наличия В группы крови.
Реагенты и материалы:Хранить в вертикальном положении.
Данный комплект для проведения теста содержит следующие реагенты и материалы: Тестовые платы для агглютинации.В каждой плате имеется 3 зрительно различимых лунки. Одна лунка обозначена как «Соляной скрининг на аутоагглютинацию», и 2 лунки обозначены как «Проба пациента» — одна на А группу и одна – на В группу. Платы запакованы в индивидуальную упаковку с герметичным полиэтилено-вым клапаном, в каждой содержится пакет с осушителем. Платы хранить в холодильнике при 2-7°С.
1 бутылка с разбавителем.Прозрачная пластиковая бутылка содержит 0,02 моль/л фосфатно-буферный солевой раствор (ФСБ) с рН 7,4. Капельный наконечник дозирует точно 40 μл. Хранить в холодном месте (2-7°С).
Пипетки и мешалки.Каждый полиэтиленовый пакет содержит 2 пластиковые пипетки и 3 мешалки.
Необходимые, но не предоставленные материалы:нет. Приготовление реагента:нет.
Хранение и стабильность:
1. Тестовые платы на агглютинацию стабильны в течение 18 месяцев с даты производства при хранении в холодном месте. На каждой тестовой плате нанесена маркировка с указанием истечения срока годности. Перед использованием тестовой платы нет необходимости выдерживать ее при комнатной температуре.
2. Разбавитель стабилен в течение 18 месяцев с даты производства при хранении в холодном месте (2-7°С). На каждой бутылке с разбавителем нанесена маркировка с указанием истечения срока годности.
3. При правильном проведении теста агглютинация наблюдается как минимум в одной из лунок, обозначенных «Проба пациента». Тем самым, производится авто-контроль теста. ПРИМЕЧАНИЕ: На каждом комплекте RapidVet-H (для кошачьих) отпечатана дата истечения срока годности, представляющая собой ближайшую дату истечения срока годности одного из компонентов комплекта. Не смотря на то, что у остальных компонентов комплекта в отдельности может быть более продолжительный срок годности, их использование с другими компонентами из других комплектов не рекомендуется.
МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ТЕСТИРОВАНИЯ:
1. ЗАБОРкрови у пациента в шприц либо в пробирку, покрытую либо с содержанием ЭДТА в качестве антикоагулянта. Для анализа требуется только 150 μл цельной крови, но пробирка должна быть полной, либо шприц должен быть заполнен так, чтобы была соответствующая концентрация ЭДТА. Если не планируется определять группу сразу же, то не следует добавлять такие нутриенты как CPDA
2. ИЗВЛЕЧЕНИЕтестовой платы из пластиковой упаковки. Пластиковую упаковку сохранить, пакет с осушите-лем отложить.
3. ПОДПИСАТЬна плате имя/номер кошки и дату проведения тестирования.
4. ПОМЕСТИТЬтестовую плату на плоскую поверхность.
5. ДОЗИРОВАТЬ1 каплю разбавителя (40 μл) из капельной бутылки в лунку с обозначением «Соляной скрининг на аутоагглютинацию».
6. ВЫТЯНУТЬнебольшое количество пробы пациента в пипетку и дозировать 1 каплю (50 μл) в лунку с обозначением ««Соляной скрининг на аутоагглютинацию». С помощью мешалки распределить и переме-шать материалы в ПРЕДЕЛАХданной лунки в течение примерно 10 секунд, АКТИВНО НАГНЕТАЯ ПО НАПРАВЛЕНИЮ ВНИЗ. (См. Примечание 1 по правильному использованию пипетки).
7. Аутоагглютинация происходит у небольшого процента больных кошек и здоровых кошек. Если наблюдается агглютинация, ОСТАНОВИТЬпроведение тестирования, и перед тем, как продолжить, провести процедуру промывания нормальных клеток.
8. ДОЗИРОВАТЬ1 каплю разбавителя (40 μл) из капельной бутылки в каждуюиз оставшихся лунок. Разбави-тель помогает восстановлению лиофилизированного материала.
9. Аккуратно взболтатьпробирку, содержащую пробу пациента для восстановления любого твердого вещества
10. ВЫТЯНУТЬнебольшое количество пробы пациента в пипетку и дозировать 1 каплю (50 μл) в каждую из 2 лунок с обозначением «Проба пациента». С помощью мешалки распределить и перемешать материалы в ПРЕДЕЛАХодной лунки в течение примерно 10 секунд, АКТИВНО НАГНЕТАЯ ПО НАПРАВЛЕНИЮ ВНИЗ. Взять новую мешалку и таким же образом распределить и перемешать материалы в ПРЕДЕЛАХдругой лунки в течение примерно 10 секунд. НОВОЕ11. ДОБАВИТЬ ВТОРУЮ КАПЛЮ РАЗБАВИТЕЛЯ В ЛУНКУ, ОБОЗНАЧЕННУЮ «А ГРУППА (ТИП А)».
НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ МЕШАЛКОЙ.
12. ВСТРЯХИВАТЬплату поперечным движением в течение 2 минут, убедившись, что материалы в каждой лунке смешиваются и «создается завихрение». Избегать перекрестной контаминации.
13. УСТАНОВИТЬплату под углом 10 — 20°, чтобы избыток крови сбежал на дно лунок. Для этого можно поместить верхнюю часть платы на пакет с осушителем.
14. СЧИТАТЬ результаты и отметить лунки, в которых произошла агглютинация.
15. После высыхания материалов на плате ЗАМЕНИТЬплату в пластиковой упаковке для постоянной регистрации.
ПРИМЕЧАНИЕ 1 К МЕТОДИКЕ: Использование пипетки: Удерживать пластиковую пробирку большим и указательным пальцами у плоского уплотненного конца, плотно сжать и не снижать давление. Удерживать пробирку с образцом вертикально и разместить открытый конец пластиковой пробирки ниже поверхности образца. Ослабить давление пальцев и забрать пробу.
Далее, удерживать пипетку перпендикулярно, непосредственно над лункой, в которую помещается проба.
Аккуратно сжать и осуществить свободное падение одной капли в лунку (50μл). Каждая пипетка спроектиро-вана с учетом выпуска немного более чем 50 μл для компенсации того количества образца, которое остает-ся на мешалке.
Повторить со второй лункой.
Каждую пипетку использовать только для одной пробы пациента, затем выбросить. Пипетку ни при каких обстоятельствах нельзя использовать более чем для одной пробы во избежание перекрестной контамина-ции и неточности в результатах.
Результаты: При правильном проведении теста агглютинация наблюдается как минимум в одной из лунок, обозначенных «Проба пациента».
Если проба пациента показывает агглютинацию в лунке, обозначенной А группа (тип А), то у протестированной кошки кровь А группы. Если проба пациента показывает агглютинацию в лунке, обозначенной В группа (тип В), то у протестированной кошки кровь В группы. Если проба пациента показывает агглютинацию в обеих лунках, то у протестированной кошки кровь АВ группы.
Любое мелкое, зерненое проявление, возникающее спустя 2 минуты, не учитывается при определении результа-тов. Характер агглютинации в лунке с А группой отличается от агглютинации в лунке с В группой. Агглютинация в лунке с В группой обычно представлена небольшим количеством крупных амёбовидных шариков. Агглютина-ция в лунке с А группой обычно бывает в виде большого количества разобщенных мелких скоплений, каждое как головка мелкой булавки.
Если пациент очень анемичен, если у него А группа, зоны антигена могут быть насыщены связанным антителом, предотвращая сшивание и агглютинацию. Это связано со стерическим препятствием анти-А антитела. Если у пациента малый объем глобулярной массы, либо нет реакции, но при использовании дополнительного контроля он проводится нормально, то провести тест без использования PBS в лунках пациента.
Ограничительные условия:
1. Для получения точных результатов важно точно следовать методике.
2. Для каждого образца всегда использовать новую дозировочную пипетку и новую мешалку – для каждой лунки. Повторное использование любого приспособления вызовет перекрестную контаминацию и неточные результаты.
3. Стабильность отдельных компонентов комплекта варьируется. Хранить компоненты в соответствии с указаниями на упаковке. Не использовать компоненты после истечения указанного срока годности. Исполь-зованием материалов с истекшим сроком годности может привести к ненадежным результатам.
4. Разбавитель поставляется в бутылке с завинчивающейся пробкой во избежание непреднамеренного бактериального либо иного загрязнения. В лаборатории нельзя использовать разбавитель из других источников.
5. Для получения правильных результатов крайне важна физическая целостность пробы пациента.
6. Всегда набирать полный шприц либо пробирку, содержащую ЭДТА. Меньшее количество крови приведет к высокой концентрации ЭДТА в тестируемом образце.
Известные мешающие вещества: нет.
Показатели: С помощью анализа RapidVet-H (для кошачьих) в целом протестировано 2116 проб кошачьих эритроцитов с использованием анти-А моноклонального антитела. Из них определено 2075 – A группы, 31 — В группы и 10 – АВ группы. Данные результаты соответствуют результатам, полученным при пробе крови на перекрестную совместимость с известными титрами иммунной сыворотки и при других стандартных методах.
Утилизация: утилизировать все биологические материалы, пипетки и мешалки безопасным и утвержденным способом.
Проверка качества: качество всех реагентов и материалов, входящих в данный комплект, проверено в соответствии с порядком проведения стандартных испытаний в ходе производства с использованием определенной программы контроля качества
Источник