Анализ крови в камере горяева
Что такое камера Горяева, ее технические характеристики
Камера Горяева
Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.
Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.
Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.
Описание сетки камеры Горяева
Сетка в камере Горяева
Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом. Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм. Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм3 или 10-4 мл.
Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.
Правило Егорова для подсчета форменных элементов
Правильный подсчет клеток в сетке
Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.
Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки. Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова. Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.
Методика подсчета лейкоцитов
При ошибке анализатора помогает камера Горяева
Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.
Подсчет при помощи камеры Горяева оправдан в тех случаях, когда автоматический анализатор не способен верно идентифицировать клетки крови пациента. Это случается при онкологических заболеваниях системы крови и некоторых других болезнях, при которых клетки имеют нетипичный вид и объем. К плюсам визуального подсчета относится возможность углубленной диагностики благодаря тому, что опытный врач способен отличить измененные клетки, характерные для отдельных патологий, и отразить их наличие в результатах анализа.
Лейкоциты должны быть подготовленными перед работой
Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.
После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.
После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах. Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100). Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.
Методика подсчета эритроцитов
Соблюдение алгоритма позволяет произвести точный подсчет клеток
Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение. После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов. Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.
Источник
Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К., является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа. Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.
Популярные области применение камеры Горяева:
- Подсчет форменных элементов крови
- Подсчет эритроцитов
- Подсчет лейкоцитов
- Подсчет ретикулоцитов
- И т.п.
- Подсчет форменных элементов мочи
- Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
- Вычисление концентрации спор в вакцине
- Подсчет ооцист в препарате
- И т.п.
Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.
Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой. В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка. В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.
Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец. Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру. Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами. Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2. Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.
Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:
X=M*2.5*10^5
где X — количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.
При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.
После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:
- Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
- Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.
Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.
Практическое применение камеры Горяева
Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева. Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта. Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев. Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.
При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.
Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:
X=(p1-p2)/(a*N)
где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a — размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).
Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.
Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно. Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости. В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.
Подсчет форменных элементов крови
Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:
N=m*4000*s/q,
где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.
Формула для подсчета эритроцитов
Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:
N=m*4000*200/(5*16)=m*10000
Формула для подсчета лейкоцитов
Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:
1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах
N=m*4000*20/(64*16)=m*78,125≈m*78
2. Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)
N=m*4000*20/(169*16)≈m*29,6
3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)
N=m*4000*20/(100*16)=m*50
Таблица нормальных значений:
| Форменные элементы | Норма | |
| Эритроциты | Мужчины | 4 000 000 – 5 100 000 в 1 мкл |
| Женщины | 3 700 000 – 4 700 000 в 1 мкл | |
| Лейкоциты | 4 000 – 9 000 в 1 мкл | |
Подсчет форменных элементов в мочевом осадке
Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:
N=m/0.676,
где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)
Автор статьи: Галина Цехмистро
Источник
Сегодня камера Горяева является одним из самых используемых приспособлений в лабораторной диагностике. С ее помощью можно подсчитать количество тех или иных кровяных клеток. Как известно, анализ крови крайне важен для процесса диагностики и лечения почти каждого заболевания.
Что такое Камера Горяева?
Столь известное и полезное приспособление было разработано и предложено русским врачом Н. К. Горяевым. Камера Горяева, по сути, представляет собой специфическое предметное стекло с нанесенной на него микроскопической сеткой.
Для чего используется эта камера? В первую очередь с ее помощью определяют количество кровяных клеток, в частности лейкоцитов и эритроцитов. Кстати, с ее же помощью можно определить увеличение используемого микроскопа. Формула для этого выглядит следующим образом:
- Kg = (m2 – m1)/ aN
В данном случае:
- Kg — это увеличение микроскопа;
- m2 — положение правой границы клетки камеры Горяева;
- m1 — положение левой границы;
- а — размер одной клетки, который является стандартным и составляет 0,05 мм;
- N — это количество клеток между измеряемыми границами камеры.
Строение камеры
Камера Горяева представляет собой не что инное, как предметное стекло (но намного толще обычного), разделенное поперечными бороздами на три части. Средняя часть стекла содержит специальную сетку для подсчета. Крайние же части камеры служат для притирания покровного стекла — таким образом, по центру создается закрытая камера с капиллярными пространствами по бокам, через которые она и заполняется жидкостью.
Что же касается сетки, то камера Горяева разделена на 225 больших квадратов равных размеров — расположены они в пятнадцать рядов. 25 больших квадратов дополнительно разделены на меньшие, по 16 в каждом. Длина каждой стороны этого маленького квадратика составляет 0,05 мм.
Подготовка к подсчету форменных элементов
Безусловно, в данном случае огромное значение имеет техника проведения лабораторного исследования. Конечно же, все поверхности камеры Горяева должны быть чистыми и сухими. После этого покровное стекло притирают так, чтобы можно было увидеть характерные радужные кольца. Крайне важно, чтобы в камере не было пузырьков воздуха, так как это может исказить результаты анализа.
Естественно, для того чтобы подсчитать количество форменных элементов, для каждой разновидности кровяных клеток используются разные реактивы. Например, для подсчета эритроцитов используется 0,9% раствор натрия хлорида. В пробирке нужно смешать 8 мл раствора соли и 0,02 мл крови. Так, лаборант разбавляет кровь в 400 раз. Иногда разведение может быть большим.
Для того чтобы подсчитать количество лейкоцитов, нужно смешать 0,4 мл уксусной кислоты (берут 3% или 5% раствор) и 0,02 мл крови.
После того как компоненты перемешаются в пробирке, с помощью специальной пипетки набирают небольшое количество смеси и аккуратно заполняют камеру для счета (как правило, одной или двух капель будет вполне достаточно).
Как правильно рассчитать количество кровяных клеток?
Подсчет эритроцитов в камере Горяева осуществляется в пяти больших квадратах, что равно восьмидесяти малым. Для того чтобы избежать ошибки из-за неравномерного распределения образцов крови, выбирают квадраты, расположенные по диагонали. Отдельное внимание обращают на клетки, расположенные по краям, — здесь считают эритроциты на левой и верхней стенках, но не берут во внимание те, которые расположены на нижней и правой линиях.
Для того чтобы определить количество эритроцитов в миллилитре крови, число клеток в пяти больших квадратах умножают на 20 000 (при разведении в 400 раз).
Лейкоциты в камере Горяева считают по-другому. Здесь нужно вычислить количество элементов по меньшей мере в сотне больших квадратов. Полученное количество делят на 1600, после чего умножают на 4000, а затем на 20 (степень разведения).
Источник
Камера Горяева – это приспособление для измерения числа клеток и частиц в определённом объёме жидкости (кровь, моча), состоящее из специального толстого предметного и покровного стёкла.
Предметное стекло имеет углубленную площадку посередине, на которую нанесена сетка из 225 больших квадратов. Из этих квадратов 25 равномерно разделены на 16 меньших квадратов. Благодаря такому объёму сетки подсчёт выполняется точнее, нежели в других ручных счётных устройствах.
Обслуживание камеры
После использования инструмента предметное стекло дезинфицируют путём погружения в 4% раствор формалина на час или в 70% раствор этилового спирта на полчаса. После этого камеру тщательно промывают дистиллированной водой. Излишек жидкости убирают мягкой салфеткой. Стоит обратить внимание на то, что камеру нельзя протирать ватным тампоном из-за цепляющихся к ней волокон. Хранится стекло в сухом месте.
Правило Егорова
Во время использования камеры в подсчитываются те ФЭ, которые располагаются внутри квадрата сетки и на верхней и левой линии его периметра. При этом частицы, касающиеся правой и нижней линии периметра во время расчёта данной клетки не включаются.
Определение лейкоцитов в крови
Методика подсчёта лейкоцитов
Подсчёт количества лейкоцитов начинается с разведения крови в 3-5% растворе этановой кислоты с метиловой синью в 20 раз. Рабочий материал перед применением протирают марлей насухо.
Покровное стекло нужно протереть до возникновения цветных колец Ньютона. Далее, камеру заполняют разведённой кровью, при этом первые две капли выпускают на фильтровальную бумагу. Жидкость попадает в камеру благодаря капиллярному свойству воды. Важно проследить, чтобы в желобки при заполнении ничего не затекало. Если это произошло, жидкость аккуратно убирают фильтровальной бумагой. Затем оставляют сетку в покое на минуту, ожидая, пока ФЭ остановят своё движение.
Подсчёт лейкоцитов осуществляется в пределах ста больших квадратов при малом увеличении, то есть при окуляре 10х и объективе 8х, по правилу Егорова. Полученная цифра используется в формуле.
Х = (n × 250 × 20) / 100 или Х = n × 50
Х – количество лейкоцитов.
n – число, полученное в результате подсчёта в камере.
Количество лейкоцитов определяют, принимая во внимание число больших квадратов сетки – 100 и разведение крови – 20.
Норма лейкоцитов и отклонения
Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.
На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:
- приём пищи перед сдачей крови,
- стресс,
- беременность или менструация у женщин,
- переохлаждение или перегрев,
- большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.
Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.
Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.
Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л. Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови. Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).
Лейкоцитарная формула
Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.
Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.
- Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
- Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.
Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.
Методика подсчёта лейкоцитов в моче
В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.
Сбор мочи
В изучение идёт только первая утренняя моча в середине мочеиспускания. Для пациента важно следовать основным правилам сбора этого биоматериала. Специальной дополнительной подготовки для исследования не требуется.
Методика расчета
10 мл свежесобранной мочи центрифугируют в течение трёх минут при 2,5 тыс. оборотов в минуту. Перед этим необходимо проследить, чтобы моча, во избежание частичного распада клеток, имела слабокислую реакцию.
При помощи пипетки с узким оттянутым концом убирают верхний слой. В пробирке оставляют от 0,5 мл мочи до 1 мл в зависимости от объёма осадка.
Осадок аккуратно перемешивают с надосадочной жидкостью. Полученным раствором заполняют счётную камеру Горяева по схожему принципу, что используется при подсчёте ФЭ крови. Камеру оставляют в покое от 3 до 5 минут.
Лейкоциты необходимо подсчитать в больших квадратах по всей сетке с окуляром 7х и объективом 40х.
Полученная цифра используется в формуле:
Х = (а/0,9) × (1000/V)
Х – число лейкоцитов в 1 мл мочи.
а – подсчитанное количество, делённое на объём камеры в 1 мкл осадка мочи.
v – Количество мочи, взятой для исследования.
1000 – количество осадка.
Это важно! Норма лейкоцитов: в 1 мл мочи не более 2 × 10³ белых кровяных клеток.
Загрузка…
Источник
