Анализ крови толстая капля что это
ТОЛСТАЯ КАПЛЯ — метод обнаружения паразитов крови, а также выявления морфологических элементов крови. Предложен Р. Россом в 1903 г. для выявления возбудителей малярии (см.).
Метод толстой капли используется для выявления спирохет (см.), трипаносом (см.), микрофилярий (см. Филяриатозы). Он нашел широкое применение в мед. практике, т. к. позволяет за одно и то же время исследовать в 30—50 раз большее количество крови на наличие паразитов, чем в тонком мазке. Это обусловлено тем, что при использовании этого метода кровь не фиксируется и во время окраски происходит гемолиз эритроцитов, к-рые становятся прозрачными, а паразиты, находящиеся в них, после окраски хорошо видимыми. С помощью этого метода может быть подсчитано число паразитов на определенное количество лейкоцитов. Ввиду неравномерного распределения паразитов и лейкоцитов в различных участках приготовленного по этому методу препарата подсчет следует производить в центральных и периферических его участках и выводить среднее значение.
При постановке метода возможно выявление полихроматофилов (см. Полихромазия), эозинофилов, базофилов, эндотелия (при затяжном септическом эндокардите и сепсисе), метгемоглобиновых телец (телец Гейнца — Эрлиха).
Приготовление препарата по методу толстой капли: на предметное стекло наносят 2—3 капли крови, к-рые распределяют с помощью иглы или угла предметного стекла до величины пятнадцатикопеечной монеты. Другой метод приготовления препарата был предложен в 1925 г. Гуппенбауэром (Huppenbauer): на предметном стекле делают мазок крови и, пока он влажный, наносят на него каплю крови, к-рая равномерно растекается, образуя правильный круг. Преимущества этого метода — равномерность капли,исключение механического повреждения элементов крови при ее размазывании; в мазке сохраняется строма эритроцитов, что позволяет изучать форму н величину пораженных эритроцитов; капля не трескается, хорошо пристает к стеклу.
Капли крови на стекле высушивают на воздухе или в термостате и, не фиксируя, окрашивают, чаще по Романовскому (см. Романовского— Гимзы метод) при pH 7,2—7,3. Препарат рекомендуется окрашивать не позже чем через 2—3 сут. после приготовления. В препаратах, длительно сохранявшихся, особенно в условиях сухого жаркого климата, паразиты окрашиваются хуже, эритроциты плохо лизируются. На такие препараты с целью обеспечения гемолиза рекомендуется до окраски наливать на 3—5 мин. дистиллированную воду, к-рую затем заменяют красящим р-ром.
Рекомендованы методы ускоренной окраски препаратов метиленовой синькой и эозином. Препарат, приготовленный по методу толстой капли, может быть также окрашен (после гемолизирования) щелочной синькой Мансона, а также по методу И. Г. Иоффе метиленовой синькой с фуксином ii другими методами.
См. также Гемограмма, Кровь, методы исследования.
Библиогр.: Лабораторные методы исследования патогенных простейших, под ред. Д. Н. Засухина, с. 165, М., 1957; Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, М., 1975; Field J. W. The microscopic diagnosis of human malaria, v. 1—2, Kuala Lumpur, 1948—1956.
H. А. Демина.
Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание
Рекомендуемые статьи
Источник
Малярия — одно из опаснейших паразитарных заболеваний на планете, ежегодно поражающее сотни миллионов человек. Люди должны понимать, как проводятся исследования на малярию, как распознать симптомы и когда обратиться за лечением. Ежегодно из сотен миллионов заразившихся сотни тысяч умирают, несмотря на то, что существует лекарство, заболевание поддается лечению.
Что такое малярия?
Малярия — опасное и очень заразное паразитарное заболевание, легко передающееся через укусы комаров рода анофелис и через кровь, например, при переливании. Недуг сопровождается повторяющимися приступами лихорадки, наиболее широко распространен в странах с влажным и жарким климатом. После того как паразит попал в тело, он начинает размножаться, поражает клетки, разрушает их, лавинообразно наращивая свое присутствие. Посему решившие посетить жаркие тропические страны должны проявлять повышенную осторожность, и при наименьших подозрениях сдать анализ крови. Заражению особенно подвержены:
- люди с низким иммунитетом,
- дети до 5 лет,
- беременные женщины.
Вернуться к оглавлению
Виды плазмодий
Всего различают четыре различных вида малярии и четыре типа плазмодий, ее вызывающие:
- Plasmodium falciparum, что провоцирует тропическую лихорадку — одну из самих опасных и нуждающихся в срочном лечении разновидностей заболевания.
- Plasmodium vivax — провоцирует появление трехдневной малярии.
- Plasmodium malariae — является источником четырехдневной лихорадки.
- Plasmodium ovale — главная причина малярии овале (недуга вроде трехдневной).
Вернуться к оглавлению
Симптомы малярии
Главными (и самим очевидными) симптомами, проявляющимся при малярии, являются повторяющиеся с равными промежутками времени приступы лихорадки, повышение температуры и озноб. Длятся они несколько часов и сопровождаются такими признаками:
- повышение температуры до 41 °C;
- дрожь;
- проявления кашля;
- повышенная потливость (обычно сопровождает окончание приступа и снижение температуры).
Кроме того приступы могут сопровождаться такими явлениями как:
- расстройства пищеварительной системы,
- боль в разных частях тела, мышцах, голове,
- повышенная утомляемость,
- желтуха.
Хотя обычно симптомы при малярии проявляются спустя несколько недель после заражения, некоторые возбудители могут месяцами жить в организме незаметно. Во время острых приступов наблюдается тенденция к изменению состава крови, может возникать анемия, в особенности при тропической лихорадке. Возможно увеличение внутренних органов, например селезенки, но точную оценку может дать лишь врач.
Вернуться к оглавлению
Диагностические исследования малярии
Для точного диагноза необходимо сделать общий анализ крови и мочи.
При обнаружении вышеперечисленных симптомов необходимо срочно провести диагностику малярии. Единственным основным способом диагностирования заболевания до сих пор остается непосредственное обнаружение плазмодиев в крови, которая берется у больного во время приступов. Самые распространенные способы анализа включают взятие крови на малярию методом толстой капли и мазка. Обнаружив плазмодии, можно определить, серьезно ли болен человек, каким именно штаммом. Проводятся также общее исследование крови, обследование мочи, биохимические исследования на содержание билирубина или уровень альбумина.
Вернуться к оглавлению
Общий анализ крови
Поскольку паразит влияет непосредственно на кровь, из-за лихорадки в ее составе наблюдаются различные изменения. Таким образом, показано проведение общего обследования крови для выявления малярии. Лейкоцитоз, анемия, тромбоцитопения — вот лишь немногие возможные последствия болезни.
В общий анализ входят:
- Сравнение уровня гемоглобина, а также эритроцитов — плазмодии влияют напрямую на кровяные тельца, разрушая их во время болезни.
- Оценка показания уменьшения тромбоцитов — наблюдается у подавляющего большинства больных, является одним их характерных признаков малярии.
- Проверка лимфоцитов — их уровень тоже может меняться во время болезни.
Вернуться к оглавлению
Другие анализы
Толстая капля на малярию – простой метод обнаружения заболевания.
Можно также выделить ряд других анализов крови, что могут обнаружить малярию:
- Метод выявления антител к малярии — позволяет с помощью введения в организм плазмодия отслеживать реакцию иммунитета на него. Если итогом будет негативная реакция, это позволит исключить диагноз.
- Метод выявления белков плазмодия является одним из новейших возможных анализов, позволяющих определять составные молекулы возбудителя. При сравнительной быстроте способ обладает неплохой точностью, а также небольшими финансовыми затратами для пациента.
- Метод ПЦР, или полимеразная цепная реакция — непосредственно определяет генетический материал малярийного плазмодия. Проводя такой анализ крови можно определить точное число возбудителей, даже если оно небольшое. К сожалению, одним из недостатков является высокая стоимость процедуры.
Вернуться к оглавлению
Анализ толстой капли крови и мазка
Анализ мазка и толстой капли крови являются наиболее дешевыми и простыми методами обнаружения малярии. В то же время они требуют внимательности и значительных трудозатрат, а также исполнения ряда рекомендаций. При необходимости обследовать более одного пациента необходимо подготовить инструментарий заранее. При тонком мазке кровь берут из безымянного либо среднего пальца на левой руке. При изготовлении мазка палец удерживается ранкой кверху. Мазок крови — небольшой, его располагают в центре стекла.
Толстая капля отличается от мазка возможностью исследовать больший объем материала. Если обычные мазки крови— тоненькие, то капля, наносимая на стекло этим методом, имеет размер с монету. В итоге, исследуется в десятки раз больший объем крови. В дальнейшем каплю подсушивают, и после окрашивания краской Романовского, промывания — исследуют. Лучше, если анализы будет проводить опытный исследователь, ведь неподготовленный может принять за паразитов различные загрязнения или образования: бляшки Биццоцеро, обломки лейкоцитов, различные микроорганизмы, включая грибок или простейших, случайно попавших на образец.
Источник
01.12.2017 1388 0.0 0
Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:
- Демонстрационные препараты.
- Микроскоп.
- Иммерсионное масло.
Изучение плазмодиев — возбудителей трехдневной, четырехдневной и тропической малярии
С целью обнаружения плазмодиев малярии толстую каплю и мазки изучают с иммерсионной системой микроскопа. Малярийные плазмодии отыскивают в более тонкой части капли (по краю ее), где лучше сохраняется форма паразитов.
В сомнительных случаях изучение малярийных плазмодиев проводят в мазках крови. Паразиты, как правило, обнаруживаются в эритроцитах; их цитоплазма окрашивается в серовато-синий или голубой цвет, а ядро — в оттенки красного цвета.
Возбудитель трехдневной малярии — Plasmodium vivax (рис. 46а, 1 и 46б, 1). Мерозоит имеет овальную или круглую форму, размер его 1-2 ц. Он представляет собой ядро и комочек цитоплазмы.
Рис. 46а. Возбудители малярии человека в мазке крови. 1 — Plasmodium vivax, 2 — Plasmodium malarie, 3 — Plasmodium falciparum
Кольцевидный шизонт по виду напоминает перстень. Он имеет в центре вакуоль, окруженную ободком цитоплазмы, в наиболее тонком месте которой расположено маленькое ядро. Различают мелкие, средние и крупные кольцевидные шизонты.
Амебовидный шизонт имеет одно ядро и цитоплазму, окружающую в молодых шизонтах одну, а во взрослых несколько вакуолей. Имеющиеся в питоплазме паразита ложноножки придают ему причудливую форму. На полюсе, противоположном ядру, цитоплазма шизонта значительно шире и содержит коричневые зернышки пигмента. В участках эритроцитов, свободных от плазмодиев, выявляют обильную, мелкую красноватую зернистость Шюффнера.
Шизонт, подготавливающийся к делению, теряет вакуоли, принимает округлую форму с правильными ровными контурами, пигмент располагается диффузно, либо собирается в кучки, а ядро — ближе к периферии цитоплазмы паразита. Шизонт заполняет почти весь эритроцит, который увеличивается в размере. В свободном от паразита пространстве выявляется зернистость Шюффнера. В делящемся шизонте выявляют два и более ядер в необособленной цитоплазме.
Морула имеет от 14 до 22 мерозоитов, тесно прилегающих друг к другу, пигмент в ней собирается в одну кучку, реже — в две или остается рассеянным.
Женские гаметоциты (макрогаметоциты) крупнее мужских, имеют маленькое плотное ядро, располагающееся эксцентрично. Цитоплазма темно-голубого цвета, в которой равномерно рассеян обильный пигмент темно-коричневого цвета. Мужские гаметоциты (микрогаметоциты) имеют более крупное и рыхлое ядро, располагающееся центрально, в периферических участках цитоплазмы обнаруживается обильный пигмент коричневатого цвета. В свободных от паразита участках эритроцита выявляется зернистость Шюффнера.
Возбудитель четырехдневной малярии — Plasmodium malariae (рис. 46а, 2 и 46б, 2). Имеет те же формы развития, что и возбудитель трехдневной малярии. Встречаются как амебовидные, так и лентовидные формы шизонтов. Молодые формы лентовидных шпзонтов расположены поперек эритроцита в виде узкой полоски. Взрослые лентовидные шизонты находятся в виде ленты, ядро вытянуто в длину и расположено по краю ленты, шизонты занимают почти весь эритроцит. Пигмент сосредоточен на противоположной от ядра стороне.
Морула имеет 6-12 (чаше 8) мерозоитов; располагаются они в виде правильной розетки («маргаритки») вокруг кучки пигмента.
Рис. 46б. Возбудители малярии человека в толстой капле. 1 — Plasmodium vivax, 2 — Plasmodium malarie, 3 — Plasmodium falciparum
Половые формы развития (гаметоциты) округлые; они мельче гаметоцитов возбудителя трехдневной малярии. Возбудитель четырехдневной малярии имеет следую¬щие морфологические особенности: он меньше Plasmodium vivax; эритроциты с находящимися в них паразитами никогда не увеличиваются в размерах.
Возбудитель тропической малярии — Plasmodium рга-ecox falciparum (рис. 46а, 3 и 466, 3). Кольцевидные шизонты мелкие и имеют вид тонких ободков; они занимают 1/6 часть эритроцита.
Амебовидные шизонты имеют одну-две широкие ложноножки, пигмент располагается в одном месте в виде компактной кучки темно-коричневого цвета. Гаметоциты имеют характерную форму полулуния.
В середине возбудителя располагается ядро. Женские гаметоциты имеют компактное ядро, окруженное пигментом в виде зерен; цитоплазма окрашивается по Романовскому в синий цвет. У мужских гаметоцитов ядро более крупное и рыхлое, цитоплазма светло-голубого цвета, иногда виден ободок эритроцита. В крови больного обнаруживают кольца и гаметоциты раздельно или вместе. Эритроциты с находящимися в них плазмодиями не увеличены.
Обнаружение спирохет возвратного тифа в мазках крови и толстой капле
С целью обнаружения спирохет возвратного тифа препараты крови окрашивают по Романовскому или разведенным (1:4, 1:5) фуксином Циля. Чтобы окрасить мазки фуксином Циля, их фиксируют, наливают на 1-2 минуты разведенный фуксин Циля, сливают краску и смывают водой. Мазок высушивают и исследуют под микроскопом с иммерсией.
Спирохеты возвратного тифа (рис. 47) представляют собой штопорообразно извитые тонкие нити. По Романовскому окрашиваются в фиолетовый цвет, разведенным фуксином — в красный.
Рис. 47. Спирохета возвратного тифа в крови
Определение степени полихромазии в толстой капле
Степень полихромазии устанавливают в толстой капле, окрашенной по Романовскому. Препараты изучают с иммерсионной системой микроскопа. В нескольких полях зрения подсчитывают количество синевато-фполетовых сеточек (рис. 48). По количеству сеточек, содержащихся в каждом поле зрения, судят о степени полихромазии. Если при нормальном количестве эритроцитов в 1 мм3 крови насчитывают до 10 сеточек в поле зрения, то полихромазию обозначают одним полюсом (Р + ), при обнаружении до 20 сеточек ее обозначают двумя полюсами (Р++), при количестве сеточек до 30 — тремя полюсами (Р+ + +) и в случае большого количества сеточек — четырьмя плюсами (Р + + + +).
Рис. 48. Полихроматофилия и базофильная зернистость в толстой капле. а — сеточка остатки полихроматофилии эритроцитов
Источник
Приглашаем посетить сайт
ТОЛСТАЯ КАПЛЯ
ТОЛСТАЯ КАПЛЯ, метод изучения морфол. элементов в гемолизированной капле крови, введенный в практику Россом (Ross) в 1903 г. и позволяющий за определенный период времени просмотреть в 30-50 раз большее количество крови, чем в тонком мазке. Благодаря простоте изготовления, удобству, экономии во времени Т. к. незаменима при исследовании крови на малярию, спирохеты, трипапосомы, микрофи-лярии, а также в качестве дополнительного метода клин, исследования крови. Метод приготовления Т. к.: на предметное стекло наносятся 2-3 капли крови, иглой или углом предметного стекла они размазываются до величины пятнадцатикопеечной монеты. По Гуппепбауе-р (Huppenbauer) капля наносится на влажный, только что приготовленный мазок, при этом она самостоятельно равномерно распространяется по поверхности мазка, образуя правильный круг; на мазке делается надпись простым карандашом, прекрасно сохраняющаяся после окраски. Преимущество этого метода-равномерность капли, исключение механического’повреждения элементов при размазывании; в тонком же мазке сохраняется строма эритроцитов, что позволяет изучать изменения формы и величины эритроцитов и отношение паразитов к эритроцитам, надпись па мазке хорошо сохраняется, капля не трескается и хорошо пристает к стеклу.-Рухадзе рекомендует стекло со свеже взятой каплей помещать до высыхания несколько наклонно, вследствие чего кровь собирается по нижнему краю в виде полулуния, в к-ром скопляется основная масса малярийных паразитов. Капли сушатся на воздухе или в термостате 1-2 часа и в дальнейшем но фиксируются.-Окраска производится чаще всего раствором Гимза. Окраску также можно производить по Менсону (предварительно, необходимо гемолизировать каплю деет. водой), Иоффу и др. При массовой работе очень удобен метод одновременной обработки целой серии препаратов (Barber и Котр). Капли наносятся ближе к краю стекла, на другом конце к-рого делается надпись. Препараты, разделенные прослойками картона, с конца, противополозкного каплям, скрепляются резинкой. Окраска производится путем погружения в сосуд с краской нижней половины препаратов с каплями; промывка-погружением окрашенной части в воду.-В Т.к. констатируются: 1) эозинофилы, особенно хорошо диференци-рующиеся при слабокислой реакции красящего раствора благодаря своей зернистости; 2) базофилы, окруженные переплетом нитей фибрина. По отношению к этим обоим видам лейкоцитов Т. к. служит методом процентного подсчета; 3) полихроматофилы в виде нежной серовато-синей сеточки; 4) паразиты-плазмодии, спирохеты, трипапосомы, микрофилярии; 5) эндотелий при endocarditis lenta и сепсисе; 6) эритроконты; 7) Innenkorper (метгемоглобип-ные тельца) Гейнц-Эрлиха.
Лит.: Рухадзе Н., Новый способ приготовления толстой капли, Рус. здурн. троп, мед., 1927, № 1; Ross R., Papers on the thick-film process for malaria diagnosis, Zancet, 10-th Jan., 1903; Schilling v., Anleitung zur Diagnose im dicken Bluttropfcn, Jena, 1924 (рус. изд.-Берлин, 1925).
И. Демина. TOLUID1NBLAU, толуидиновая синька, основная тиазокраска, темнозеленый порошок, легко растворяющийся в воде с синим цветом. По своим красящим свойствам толуидиновая синька близка к метил еновой синьке и Гарри-. сом (Harris) рекомендуется для витальной окраски нервов. Гросс (Gross) рекомендует подогретый 1%-ный раствор Т. вводить в ушную вену кролика для изучения выделения краски в извитых канальцах почек; Аникин для той же цели пользуется окрашенными пластинками агара, которые он накладывает на обнаженную поверхность почки. Для окраски гист. срезов употребляются водные растворы крепостью 0,3-1,0%. Т. является прекрасной ядерной краской, хорошо окрашивает также тигроидное вещество нервных клеток, зерна тучных клеток, основное вещество хряща, слизь (метахро-матически); метахромазия однако при обезвоживании обычно исчезает и во избежание отого срезы нужно пускать плавать на поверхности подогретого до 40° раствора краски, а затем вылавливать их па предметное стекло и просушивать, после чего. парафин растворяется ксилолом, и срезы заключаются в канадский бальзам. Т. входит также в ряд сложных красок-Манна, Пренса, Чиаччо, Доминичи (Mann, Prince, Ciaccio, Dominici).
Лит.: Enzyklopadie der mikroskopischen Technik, hrsg. v. R. Krausc, B. Ill, p. 21JSJ-89, В.-Wien, 1921 (лит.).
© 2000- NIV
Источник