Анализ крови собак на инфекции

Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Основные принципы ПЦР открыл в 1983 году американский химик Кэри Б. Мюллис, за что и был удостоен Нобелевской премии.

ПЦР-анализ состоит из нескольких этапов. Первый этап — пробоподготовка — заключается в обработке исследуемого материала (приготовление суспензии, центрифугирование). На втором этапе проводится выделение наследственного материала — ДНК или РНК — из клеток. При этом после лизиса клеток и разрушения комплекса «ДНК-белок» производится осаждение ДНК или РНК на сорбенте с последующим переходом их в элюирующий буфер. На третьем этапе проводится амплификация, то есть умножение количества специфических участков ДНК. Для этого используются тест-системы, в состав которых входят праймеры — олигонуклеотиды, которые являются специфическими для каждого возбудителя. К разлитой в микропробирки ПЦР-смеси добавляют образцы и контроли, которые помещают в амплификатор или термоциклер — программируемый термостат с высокой скоростью и точностью задаваемой температуры. Процесс амплификации заключает в себе три стадии: денатурация, отжиг и элонгация. При определении в клинических образцах РНК-содержащих вирусов амплификации предшествует стадия обратной транскрипции, при которой РНК переводят в форму ДНК с использованием фермента обратной транскриптазы, или ревертазы. Четвертый этап ПЦР-диагностики заключается в проведении электрофоретической детекции продуктов ПЦР — ампликонов. При этом продукты ПЦР помещают в лунки агарозного геля и подвергают действию постоянного электрического тока, в результате чего отрицательно заряженная молекула ДНК движется к положительному электроду. В состав геля входит бромид этидия, который, образуя устойчивый комплекс с ДНК, делает эти полосы хорошо заметными при просмотре под ультрафиолетовым облучением (рис. 1).

Стадии ПЦР-анализа
Рис. 1. Стадии ПЦР

Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР-анализа необходимым условием является соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.

Взятие материала для ПЦР-исследования следует проводить в одноразовых неталькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). При взятии соскобов и смывов следует пользоваться одноразовыми стерильными зондами с повышенной адсорбцией (имеющими на конце щеточку), так как они отбирают оптимальное количество материала.

Соскобы и смывы со слизистых оболочек носа, ротовой полости, влагалища, конъюнктивы отбирают в одноразовые пластиковые микропробирки — эппендорфы — объемом 1,5 мл, в которые разлито по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Желательно не использовать зонды с ватными наконечниками. Следует также избегать отламывания кончика зонда в пробирку с физиологическим раствором, так как это затрудняет дальнейшую обработку и повышает риск перекрестной контаминации проб. Для получения необходимого количества материала достаточно вращать зонд в пробирке в течение 1-2 минут, избегая разбрызгивания жидкости. Проба должна быть мутной на вид, а при отстаивании в ней должен образовываться небольшой осадок.

Забор крови проводят одноразовой иглой в одноразовый шприц или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц, кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Возможно использование вакуумных систем («Vacuette») для забора крови. Для исследования можно предоставить сыворотку крови: пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка, затем центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 минут и переносят в количестве не менее 1 мл в стерильные эппендорфы объемом 1,5 мл.

Сперму отбирают в стерильные одноразовые пробирки или флаконы.

Моча. Отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-40 мл в стерильный сухой флакон или пробирку.

Фекалии. Отбирают пробы массой 1-3 грамма из предварительно продезинфицированного и вымытого лотка, одноразовыми лопаточками переносят в стерильный флакон.

Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры или в чистые стеклянные или пластиковые емкости.

Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом. При хранении материала более суток его необходимо заморозить при Т минус 20°С.

Наиболее часто встречающимися заболеваниями у кошек и собак являются конъюнктивит, ринотрахеит, а также энтерит. Для того чтобы выяснить этиологию заболевания, требуется провести качественную лабораторную диагностику.

Причиной коньюнктивитов или инфекций верхнего респираторного тракта у кошек может быть инфицирование следующими микроорганизмами: герпесвирус типа 1 (FHV1), калицивирус кошек, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococ-cuc aureus, Brohaemolytic streptococcic и Salmonella tephimurium.

Наиболее частой причиной, по данным различных авторов и методов исследования, являются герпес-вирус типа FHY1 (от 10% до 34%) и калицивирус кошек (от 20% до 53%). Chlamydia pcittaci (от 10% до 35%).

Герпесвирусная инфекция, ассоциирована абортами, высокой смертностью новорожденных (инфицирование почти 60% случаев) с признаками интерстициальной пневмонии.
Калицивирус — тяжело протекает у котят, в то же время 25-80% переболевших взрослых животных становятся носителями и являются источником заражения, передавая вирус через слюну.

Панлейкопения — контагиозное вирусное заболевание кошек, характеризующееся резким падением уровня лейкоцитов, гастроэнтеритом, ринитами с конъюнктивитами, высокой смертностью (30-90 % заболевших котят).

Настоящим бичом для питомников является инфекционный перитонит кошек — тяжелое заболевание, возбудителем которого является РНК-содержащий высокопатогенный вирус. Вирус реплицируется в миндалинах и энтероцитах тонкого кишечника, рассеиваясь по организму через макрофаги и моноциты. Коронавирусы с низкой вирулентностью вызывают энтериты средней тяжести, чаще всего у котят после отъема от матери. Высоковирулентный коронавирус может привести к развитию сухого или выпотного перитонита. Перитонит часто сопровождается почечной недостаточностью, печеночными и неврологическими симптомами.

При инфицировании аденовирусами обоих типов и вирусом чумы плотоядных у собак проявляется общий комплекс симптомов: лихорадка, конъюнктивиты и ринотрахеиты, расстройство желудочно-кишечного тракта, поражение нервной системы.

При чуме плотоядных клинические признаки могут включать серозно-слизистые назальные и конъюнктивальные выделения, кашель, одышку, пневмонию, рвоту и понос, а также лихорадку и гиперкератоз.

Аденовирус плотоядных. Возбудитель — ДНК-содержащий аденовирус плотоядных первого типа (вызывает инфекционный гепатит плотоядных) и второго типа (вызывает аденовироз собак). Наблюдаются лихорадка, апатия, анорексия, жажда, рвота и понос, болезненность брюшной стенки при пальпации. Иногда развиваются конъюнктивит, кератит, светобоязнь. Могут быть точечные кровоизлияния на слизистой оболочке и коже. Редко наблюдаются неврологические нарушения.

Все перечисленные заболевания имеют высокий индекс контагиозности и ассоциированы с высокой смертностью среди щенков, от парвовирусного энтерита погибает 10-50% заболевших щенков, при инфицировании не вакцинированных щенков вирусом чумы плотоядных смертность доходит до 100%.

Токсоплазмоз. Возбудитель — простейшее Toxoplasma gondii. Размножение возбудителя происходит у кошек на стенках кишечника. С калом они выделяют во внешнюю среду ооцисты.

Промежуточными хозяевами могут быть кошка, собака, человек. У кошек развитие паразита в кишечнике обычно проходит бессимптомно, изредка вызывая «легкий» понос.

Тканевые цисты могут вызывать анорексию, угнетение, кератиты, желтуху, рвоту, понос и неврологические симптомы в зависимости от пораженных органов. У собак клинические симптомы зависят от пораженных органов: могут наблюдаться неврологические нарушения (тремор, атаксия, паралич) или токсоплазмозный миозит (нарушение походки, атрофия мышц, ригидность), а также миокардит и гепатит.

Хламидиоз и орнитоз. Возбудители у кошек — Chlamydophila felts, у собак — Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, у тех и у других заболевание может вызывать Ch. psittaci. У птиц — Ch. psittaci.
У кошек заболевание проявляется в основном в форме гнойных и негнойных конъюнктивитов и кератитов, также могут наблюдаться ринит, пневмония, вагинит, аборты и бесплодие. У котят встречается неонатальныи хламидиозный конъюнктивит. У собак симптомы разнообразны и проявляются воспалительными заболеваниями конъюнктивы, половых органов, гастритами, артритами, абортами и бесплодием. Есть данные о роли хламидий в патогенезе атеросклероза у собак.

Микоплазмоз. Возбудители — микроорганизмы рода Mycoplasma. Протекает с признаками бронхопневмонии, кератоконъюктевитов и кератитов.

Вирусный иммунодефицит кошек. Иммунодефицит кошек — тяжелое заболевание, вызываемое вирусом из семейства Retrovoridae, рода Lentivirus. Вирус поражает иммунную и нервную системы. Обладает тропизмом к Т-лимфоцитам. В результате иммунодепрессии организм становится беззащитным против бактерий, грибов, вирусов и погибает от вторичной инфекции.
Клинические признаки развиваются медленно, и заболевание чаще регистрируется среди кошек 6-10 лет.

И.М. Донник, член-корреспондент РАСХН, д.б.н., профессор, Н.А. Пелевина, м.н.с, О.Г. Бодрова, м.н.с,
ГНУ Уральский государственный научно-исследовательский ветеринарный нститут РАСХН

Источник

Собаки подвержены многим вирусным заболеваниям и самые распространенные из них – парвовирусный энтерит, коронавирусный энтерит, чума плотоядных, инфекционный аденовироз, парагрипп.

Парвовирусный энтерит – вирусное заболевание, возбудитель которого вызывает острые желудочно-кишечные болезни у собак. Энтерит чаще всего поражает щенков, но могут также болеть и взрослые животные.

Заболевание следует подозревать у щенков, не вакцинированных или не полностью вакцинированных собак с соответствующими клиническими признаками, а также у животных, живущих при скученном содержании. Диагноз на парвовирусный энтерит ставится комплексно с учетом:

• анамнеза (отсутствие вакцинации, нарушение рекомендаций по выполнению и рекомендуемых сроков вакцинации),
• клинической картины (рвота, понос, вялость, анорексия),
• клинического и биохимического анализа крови.

Во время болезни у большинства собак развивается лейкопения (от умеренной до тяжелой), преренальная азотемия, гипоальбуминемия, гипонатриемия, гипокалиемия, гипохлоремия и гипогликемия, увеличение активности ферментов печени. Широко используются фаст-тесты ИХА, диагностическая ценность которых находится под вопросом, так как они могут давать как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты. Самым достоверным методом считается ПЦР-диагностика, которая обнаруживает фрагменты генов возбудителя. Для исследования берутся смывы из прямой кишки. Также есть диагностика ИФА методом, которая обнаруживает антитела к возбудителю, но повышенные титры могут быть также у носителей, переболевших или недавно вакцинированных животных.

Коронавирусный энтерит протекает с длительной диареей, приводящей к быстрой потере тургора кожи. Если парвовирус переносится крайне тяжело и нередко становится причиной гибели организма, то коронавирус обычно проходит легко, а симптомы его менее выражены. Опасность представляет возникающее обезвоживание и нарушение межклеточного обмена (особенно это выражено у щенков). В остальном клиническая картина у инфекций похожа. Она не имеет характерной выраженности, поэтому ПЦР-тест и лабораторное обследование, направленные на изучение смывов из прямой кишки, подтверждают или опровергают предположение специалиста.

Чума плотоядных поражает одновременно или выборочно ЖКТ, дыхательную и нервную систему. Соответственно локализации условно выделяют три ее вида: кишечная, респираторная и нервная. Чаще всего встречается одновременное присутствие нескольких типов. Даже на начальном этапе заметны изменения в конъюнктиве глаз.

Первые признаки чумки включают резкое повышение температуры тела. Владелец наблюдает выделение гноя из носа путем чихания или истечения, вокруг глаз образуется корка. Сразу появляются вялость, многократная рвота и частые позывы на нее. Сразу после окончания инкубационного периода стул может быть нормальной консистенции, но в короткое время развивается диарея вплоть до профузной. Депрессия и отказ от пищи –обычные симптомы.

Чтобы выделить носителя врач берет смывы. ПЦР-исследованию подлежат образцы истечения из глаз, слизистой носа и кишечника.

Читайте также: Анализ крови мнс что это

Аденовирусная инфекция сопровождается тяжелым состоянием, организм длительное время является вирусоносителем. При заражении формой 1 (CAV-1) животное выявляет признаки инфекционного гепатита. Тип 2 поражает дыхательные пути.

Инфекционный гепатит поражает клетки печени. На слизистой оболочке органов желудочно-кишечного тракта возникает воспалительный процесс. Резкое повышение температуры приводит к обезвоживанию. Увеличенная нагрузка на дыхательную систему в сочетании с растущей бактериальной атакой приводит к застойным явлениям. Наблюдаются нарушения в работе ЦНС.

Подтверждение диагноза не всегда возможно из-за перебоев с поставками необходимых для лабораторий реактивов.

Аденовироз респираторный устанавливается после ПЦР-исследования пробы с гортани.

Источник

ПЦР диагностика незаменима в диагностике инфекционных болезней.

Данный метод обладает высокой чувствительностью и позволяет безошибочно выявить возбудителя, причем на ранних стадиях развития болезни. На многие виды анализов нужно всего около 6 часов времени, поэтому уже в день обращения Вы можете получить результаты исследования.

В нашей лаборатории есть собственная ветеринарная лаборатория, которая позволяет проводить самые сложные исследования, не выходя из стен клиники.

ПЦР собаке — незаменимый метод ислледования

Для многих ПЦР диагностика является совсем новым видом исследования, однако в нашей клинике уже давно и успешно проводится ПЦР собаке. Когда речь касается инфекционных заболеваний, очень важно начать лечение как можно скорее. Причем требуется знать истинного возбудителя заболевания, так как многие лекарства являются токсичными, если применяются не по назначению.

В этом случае ПЦР диагностика становится незаменимым методом исследования (при парвовирозе, чуме плотоядных).

ПЦР диагностика имеет множество преимуществ перед другими методами, так как она направлена на поиск непосредственного возбудителя. Кроме того, при этом не наблюдается никаких побочных реакций.

Для анализа пригоден практически любой биологический материал, получаемый от животного, причем одного образца достаточно для анализа сразу на несколько возбудителей.

В каких случаях необходима ПЦР диагностика кошке

ПЦР кошке позволяет выявить с точностью возбудителя заболевания, чтобы начать как можно скорее лечение. Метод является весьма эффективным, например, при инфекционном перитоните кошек, и нашел в настоящее время широкое применение. Тот факт, что в наших клиниках есть собственная ветеринарная лаборатория, значительно облегчает процесс взятия анализов и дальнейшего их исследования. Уже в день обращения могут быть готовы результаты анализов на некоторые виды возбудителей.

Материалом для анализа служат различные выделения организма: кровь, моча, слюна и другие. Однако следует заметить, что для некоторых возбудителей пригоден лишь определенный материал, поэтому, естественно, необходима сначала консультация ветеринара.

Кроме того, существуют определенные правила сдачи, о которых Вам тоже расскажут на приеме у специалиста.

В нашей клинике квалифицированные ветеринары и лаборантыпомогут комплексно обследовать Вашего питомца для скорой постановки точного диагноза.

Прайс-лист

Новости о наших необычных пациентах. Самые свежие ролики на нашем Youtube канале о здоровье четвероногих любимцев. Вся свежая информация об открытии наших филиалов, интересных событиях и мероприятиях собрана для вас в этом разделе.

Почему новый год может быть опасен для собак? Как правильно купать кошку? Как подбирать аквариумных рыбок, чтобы они чувствовали себя комфортно в одном аквариуме? Читайте наши ветеринарные статьи и находите интересную информацию для себя. Ветеринарные статьи позволят получить ответы на волнующие вас вопросы о домашних любимцах и узнать интересные факты о разных видах животных.

На нашем форуме вы сможете обсудить интересующие вас вопросы и получить консультацию у ветеринарного врача. Иногда, важно узнать мнение специалиста, когда нет возможности посетить клинику. Спрашивайте наших врачей о тревожащих вас вопросах и получайте полезную информацию из первых рук.

Источник

Выгуливая питомца, можно заразиться различными заболеваниями. Одно из таких – бешенство. При появлении малейших симптомов болезни, необходимо сдать анализ на бешенство у собак.

Как собака может заразиться

Бешенством называется заболевание, имеющее инфекционную этиологию и протекающее остро. Вызывается вирусом, поражающим центральную нервную систему, внутри организма происходят серьезные нарушения.

Возбудитель болезни – рабдовирус (РНК-содержащий вирус), поражающий всех животных. Он бывает искусственным и естественным

Инфекция способна передаваться от животного к человеку.

Заразиться можно от инфицированных хищников путем непосредственного контакта (после укуса, при попадании в открытую рану слюны). Слюна содержит в себе вирус. В организме он проходит по нервным путям в головной и спинной мозг, размножается в слюнных железах.

В слюне оказывается за неделю до возникновения первоначальных симптомов. В этот период животное является носителем рабдовируса и может заразить человека и других домашних питомцев.

Симптомы бешенства – стадии

Инкубационный (латентный) период может длиться несколько недель. На выраженность симптомов влияет возраст питомца, состояние иммунной системы, концентрация вируса. Болезнь как правило наблюдается в тихой, буйной или атипической форме.

Обычно наблюдается буйная форма, длится от шести до десяти дней. Выделяются несколько стадий данной формы.

Продромальная (протекает двое суток) – изменяется поведение животного: оно выглядит угнетенным, подавленным, сидит в тихих уголках, избегает общения, неадекватно реагирует на раздражители.
Маниакальная (три-четыре дня) – стадия возбуждения. Животное ведет себя агрессивно по отношению к животным и людям. Агрессивное поведение меняется на ласковое. Питомец бродяжничает, ест все подряд.
Паралитическая (до шести дней) – депрессивная. Проявляются следующие симптомы: паралич гортани, спазмы, судороги. Собака не может глотать, слюна постоянно вытекает. Панические состояния при громких звуках, изменяется координация движения. Наступает паралич сначала задних, затем передних конечностей. Питомец оказывается в коме, из которой не выходит (гибнет от истощения, нарушения дыхания и сердечной деятельности).

Больная собака может укусить, не предупредив об этом лаем.

При тихой форме (длится не более пяти суток) отсутствует стадия возбуждения. Животное угнетено, не реагирует на внешние раздражители. Гибнет от паралича мышц тела, глотки.

Болезнь не лечится, обязательно наступает летальный исход.

Атипичная форма (очень редкая). Она характеризуется следующими признаками: изменяется поведение, нарушается работа центральной нервной системы и желудочно-кишечного тракта.

Анализ крови на бешенство – как и где сдать

При появлении нехарактерных признаков у животных, рекомендуется срочно обратиться в ветеринарную клинику и проверить собаку на наличие вируса.

Перед тем как поставить первичный диагноз, учитывается история болезни, симптоматика, эпизоотологическая ситуация. Проводят несколько лабораторных и других анализов, экспресс анализ, биологический материал изучается под микроскопом. Проводится разграничивающая диагностика, с целью исключения инфекций со схожими симптомами.

Если человека укусила собака, ее изолируют на 10 дней. Пока готовятся анализы, за ней ведется наблюдение. При подтверждении заболевания, собаку усыпляют.

Точный диагноз можно поставить после смерти: получают патматериал и исследуют его при помощи различных методик.

Самый эффективный метод – изучение биоматериала под микроскопом на наличие телец Бабеша-Негри. Чтобы обнаружить специфический антиген в мозге, применяется реакция диффузной преципитации, иммунофлуоресцентный анализ отпечатка роговицы. Иммунофлуорисцентный метод способен обнаружить антиген в 93% случаев.

Из-за того, что вирус движется по нервным путям, его сложно обнаружить в крови. Обычно исследуется спинномозговая жидкость. Тем не менее проводят общий и биохимический анализ крови собаки, чтобы изучить изменение лейкоцитоза, олигурии и других показателей. Кровь берут из вен, которые расположены там же, где и у человека. Иногда берут анализ слюны животного.

Тест на наличие антирабических антител в крови можно сделать в аккредитованных лабораториях (реже в ветеринарных клиниках). Стоимость ее высокая, результаты готовы после двух-трех недель. Существует два вида теста RFFIT (быстрого торможения фокуса флюоресценции) и FAVN (определяет титр антител в МЕ/мл).

Обычно тест проводится при перевозе животного заграницу (некоторыми государствами запрещено завозить животных, которых не прививали от бешенства). Анализ на антитела к бешенству сдается только после выработки в крови антител к данной инфекции. Иммунитет к болезни развивается не раньше, чем через 30 дней после проведения вакцинации. По истечении этого срока питомец может сдавать тест на бешенство.

Если количество антирабических антител не достигает 0,50 МЕ/мл – животное ревакцинируют, спустя месяц сдают еще один анализ. На воспроизведение защитных антител оказывают влияние: порода, возраст питомца, индивидуальные особенности. Врачи рекомендуют проводить наблюдение за количеством антител после вакцинации.

Что делать, если результат положительный

Лечение от данной болезни не разработано. При подтверждении подозрений собаку усыпляют. Единственный выход – вакцинация. Если хозяин не сделал укол от бешенства – питомец гибнет от любого вируса, который влияет на его поведение.

Во время инкубационного периода болезнь не дает о себе знать. Тем не менее, как было сказано, собака уже заразна. После появления первых признаков болезни (боязнь воды, неспособность пить, агрессивное поведение), сроки жизни питомца составляют не более 11 дней, после чего умирает.

Что делать, если человека укусила собака

Люди заражаются через укус больного животного. Для человека характерны те же симптомы, что и для животных: судороги, паралич, боязнь воды, спазм глотки, смерть. После укуса первые признаки заболевания проявляются через неделю и до одного года (зависит от места поражения). Сразу после укуса (не позднее десятого дня) нужно обратиться к специалисту и сделать серию уколов (они помогут избежать летального исхода).

Первые действия при укусе собаки:

промыть место укуса под сильной струей воды (можно под краном или воспользоваться бутылкой); постараться вымыть грязь и слюну;
кожу тщательно вымыть хозяйственным мылом – не менее двух раз;
наложить чистую сухую повязку;
обратиться в травмпункт или поликлинику;
в экстренных случаях (при больших и глубоких ранах) вызвать неотложную помощь.

Врач устанавливает график вакцинации, дает рекомендации относительно питания во время лечения.

Профилактика заражения

Существует один способ профилактики от бешенства – своевременная вакцинация. Выбирается подходящий препарат, каждый год (при некоторых вакцинах раз в три года) проводят ревакцинацию (схему подбирает врач ветеринар. Цена прививки около 1400 рублей за отечественный препарат, 1600 за импортный.

Без прививки от бешенства запрещено вывозить питомца в некоторые страны, принимать участие в выставках. Прививка в некоторых государственных клиниках может проводиться бесплатно, она гипоаллергенная и безопасная.

Первый раз прививку нужно делать щенкам в возрасте трех-четырех месяцев, затем делается каждый год. До процедуры питомца обрабатывают от гельминтов и паразитов, она должна быть здорова. По желанию делают моноукол или комбинированным препаратом (от всех болезней).

Привитая собака тоже может заразится, если:

вакцина была просроченная или неправильно хранилась;
во время прививки животное было заразно, болезнь находилась в инкубационном периоде.

После прогулок с другими собаками (или поездок в лес) питомца нужно осмотреть на предмет укусов, ссадин и царапин.

Выгуливая питомца лучше не контактировать с незнакомыми и бродячими собаками. Особенно опасны стаи бездомных собак, которые могут не только покусать и заразить бешенством, но и нанести серьезный вред здоровью. Своевременная прививка от бешенства гарантирует здоровье и долгую жизнь четвероногому любимцу.

Источник: dogs-fan.club