Анализ крови рпга и ифа антитела
Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.
Где можно сдать анализ?
ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.
Узнать больше…
Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.
Как подготовиться?
Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.
Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).
Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.
Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.
Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.
Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).
Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.
Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.
Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.
ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.
Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.
Преимущества метода
Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.
ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.
Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.
Недостатки метода
К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.
В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.
ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.
Показания к назначению и выявляемые заболевания
Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:
- Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Анализируемый биоматериал и особенности его забора
Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.
Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.
Сроки готовности результатов ИФА
При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.
Расшифровка иммуноферментного анализа
Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).
Анализируемые показатели
- IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
- IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
- IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Возможные результаты ИФА
В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.
Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).
Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.
Источник
Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр
Общая информация об исследовании
Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических («нетрепонемных»), так и специфических («трепонемных») антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифические («нетрепонемные») и специфические («трепонемные»). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к «трепонемным», то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.
РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, «нетрепонемного» исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.
Чувствительность РПГА и других «трепонемных» тестов превосходит чувствительность неспецифических («нетрепонемных») тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять «трепонемные» тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой «трепонемный» тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).
Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.
При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.
Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5 % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).
Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза «сифилис» необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.
Для чего используется исследование?
- Чтобы подтвердить диагноз «сифилис» при положительном результате неспецифического скринингового теста;
- для скрининга сифилиса;
- для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
- для исключения сифилиса у донора крови.
Когда назначается исследование?
При обследовании:
- пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием «сухого» рубца (третичный сифилис);
- лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
- донора крови;
- при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.
Источник
Что такое ИФА на сифилис
ИФА на сифилис — доступный и высоко информативный тест
ИФА — это иммуноферментный анализ, применяющийся в качестве высокочувствительного теста в диагностике различных патологий, в том числе сифилиса. Позволяет выявить заболевание и максимально точно определить его стадию.
Сифилис зарождается при проникновении в организм бактерии Treponema pallidum (Трепонема бледная). Через 2 — 4 недели на кожных покровах образуется твёрдый шанкр в локализации, где произошло внедрение, чаще всего характерная для сифилиса папула образуется на половых органах, что означает начальный этап первичного сифилиса. По мере развития заболевания папулы преобразуются в язвы, а затем в большинстве случаев исчезают, что даёт пациенту ложную надежду на самоизлечение. Но латентный период переходит в стадию вторичного сифилиса, при этом трепонемы распространяются уже по всему организму, проникая в ткани и органы. На коже и слизистых оболочках образуются множественные высыпания. При отсутствии лечения наступает следующий этап — третичный сифилис с формированием гумм и поражением ЦНС, сердца, костной ткани, ЖКТ, ротовой полости и других органов.
Выявление антител подтверждает инфицирование
ИФА определяет первичный, вторичный, третичный (чаще всего только на начальном этапе), врождённый, рецидивный и латентный сифилис. Суть метода заключается в обнаружении антител, которые организм вырабатывает в ответ на внедрение трепонемы. На начальном этапе болезни образуются антитела класса М, через несколько недель к ним присоединяются иммуноглобулины класса G. Концентрация тех или иных антител меняется в зависимости от этапа развития сифилиса, что позволяет определить стадию болезни. При выполнении ИФА используется истинная трепонема бледная либо её антигены, поэтому тест относится к трепонемным анализам.
В отличие от нетрепонемных тестов, в которых в качестве антигенов выступают аналоги трепонемы, ИФА обладает минимальным количеством ложных результатов.
Преимущества и недостатки метода
Любой метод исследования не лишен недостатков
Ранее в диагностике сифилиса применялись различные методы, такие как: РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), RW (реакция Вассермана), МР (микрореакция преципитации), РСК (реакция связывания комплемента) и другие тесты. Разнообразие анализов в качестве отборочных тестов и отсутствие единой системы нередко приводило к путанице, а в результате — к негативным последствиям, например, когда донор с ложноотрицательным результатом становился посредником в заражении реципиентов. С 2006 года тестирование стало более стандартизированным, ИФА был признан одним из наиболее эффективных методов диагностики и используется в настоящее время в качестве проверочного теста при обнаружении положительного результата нетрепонемного анализа.
Нетрепонемные тесты являются скриннинговыми
Теперь нетрепонемные анализы используются для выявления возможного заражения сифилисом у всех групп населения, то есть являются скрининг-тестами. При сомнительном либо положительном результате назначается ИФА либо иной трепонемный анализ. ИФА стал одним из ведущих тестов на сифилис благодаря своим преимуществам:
- высокая чувствительность, позволяющая выявить антитела к трепонеме в очень низкой концентрации;
- высокая специфичность достигается за счёт использования антигенов трепонемы бледной;
- объективность результатов благодаря автоматическому учёту;
- лёгкость постановки реакции осуществляется благодаря полной комплектации наборов для диагностики;
- универсальность теста: может применяться для профилактического обследования населения, для диагностики всех стадий болезни и проверки сомнительных результатов.
Антитела к Treponema pallidum схожи на некоторые виды иммуноглобулинов, образующихся при иных видах инфекции, поэтому несмотря на специфичность ИФА ложноположительные результаты могут выявляться в небольшом количестве. Ещё один недостаток ИФА заключается в том, что по мере развития болезни число антител снижается, что может привести к ложноотрицательному результату.
Также результат ИФА не может выступать в качестве единого показателя для диагностики сифилиса, а используется в комплексе с иными исследованиями, что не позволяет назвать его точным маркером заболевания.
К минусам теста можно отнести и его относительную дороговизну.
Показания к проведению исследования.
Период беременности — показание для проведения анализа
ИФА проводится как подтверждающий тест после нетрепонемного анализа, но может выступать и в качестве отборочного анализа. Назначается в следующих случаях:
- плановое тестирование при устройстве на некоторые виды работ;
- плановое выявление риска инфицирования;
- госпитализация, предоперационный период;
- донорство;
- беременность;
- обследование при симптомах сифилиса.
Заподозрить сифилис можно по специфичному признаку — образованию твёрдого шанкра, а также болевым ощущениям в суставах и костях, отёчности половых органов, повышению температуры тела до 38 °С, увеличению лимфоузлов. В качестве профилактики рекомендуется проходить исследование регулярно при активной сексуальной жизни со сменой партнёров.
Подготовка к исследованию
В лихорадочный период стоит воздержаться от теста
Для минимизации риска получения ложного результата следует выполнять правила.
- Образец крови сдаётся на голодный желудок, в зависимости от лаборатории период голода должен составлять от 4 до 12 часов.
- В предыдущие сутки исключается алкоголь и жирная пища, курение ограничивается минимум за час до исследования.
- Накануне анализа пить можно только чистую воду, не допускается употребление соков, кофе, лекарственных препаратов.
- Все иные исследования и медицинские манипуляции проводятся после сдачи теста.
- Не следует сдавать анализ, если в предыдущие дни отмечалось лихорадочное состояние либо проводилась вакцинация.
- Женщинам не рекомендуется проходить тест в период менструации.
Расшифровка результатов
Положительный результат свидетельствует о наличии вируса
Положительный результат:
- наличие инфицирования трепонемой бледной;
- ложноположительный результат при наличии иных факторов;
- последствия вылеченного ранее сифилиса.
Отрицательный результат:
- отсутствие заражения;
- инкубационный (ранний первичный) период сифилиса;
- поздний период, в том числе поздние этапы развития третичного сифилиса.
Ложноположительный результат и его причины
Ложноположительный тест может быть при сахарном диабете
Treponema pallidum является спирохетой, содержащей 42 семейства генов, 17% из них аналогичны белкам иных видов бактерий, что провоцирует в небольшом количестве случаев положительный результат при наличии заражения другими микроорганизмами. Например, при ряде аутоиммунных заболеваний выявляются антифосфолипидные антитела, схожие с антителами при сифилисе. На рубеже XXI века было установлено, что в данном случае разница между антителами заключается в факторе зависимости, при аутоиммунных болезнях антитела зависимы от p2-гликопротеина-1, при сифилисе — не зависимы. Но на сегодняшний день вопрос о возникновении ложноположительных реакций остаётся открытым, так как причина таких результатов не всегда ясна.
Некоторые ложные показатели являются хроническими и могут сопровождать человека на протяжении десятилетий.
По статистике чаще всего ложноположительные результаты проявляются в следующих случаях:
- гепатиты;
- лепра;
- инфаркт миокарда;
- интоксикация;
- заболевания соединительной ткани;
- аутоиммунные патологии;
- сахарный диабет;
- беременность;
- период менструации;
- поствакцинальный период.
Трепонема имеет сходство с другими возбудителями
Treponema pallidum является не единственным видом трепанем, к патогенным возбудителям относятся и другие спирохеты: Treponema pertenue (возбудитель явса), Treponema bejel (возбудитель беджеля), Treponema carateum (возбудитель пинты) и многие другие. При микроскопическом осмотре они мало отличаются от бледной трепонемы, а антитела против них схожи на иммуноглобулины при сифилисе.
Положительный результат может отражать наличие болезни в прошлом, так как иммуноглобулины класса G способны задерживаться в кровотоке годами.
Ложноотрицательный результат и его причины.
В инкубационном периоде результат может быть отрицательным
На начальном этапе болезни ИФА показывает отрицательный результат, этот период является инкубационным, когда первичный сифилис ещё не наступил, и отсутствуют характерные признаки болезни. Инкубационный период по сравнению с данными по инфицированию сифилисом середины XX века увеличился на 7 — 10 дней, в настоящее время составляет около 3 недель. Это означает, что после проникновения трепонемы в организм, ложноотрицательный результат будет выявляться на протяжении 3-х, а иногда и более недель.
Третичный сифилис при отсутствии терапии обычно развивается через 3 — 5 лет с момента инфицирования, в некоторых случаях болезнь может проявиться через 10 — 15 лет на фоне бессимптомного протекания и перехода сифилиса из одной стадии в другую. К этому времени число антител значительно снижается или они отсутствуют вовсе, что приводит к ложноотрицательному результату. По некоторым данным на некорректный ложный итог могут повлиять различные инфекционные заболевания, сахарный диабет, приём некоторых антибиотиков.
Несоблюдение правил подготовки к анализу, например, употребление спиртного накануне исследования, может привести как к ложноположительному, так и ложноотрицательному результату.
Источник