Анализ крови при паротите у детей
07.04.2019/Ольга
Добрый день. Меня зовут Ольга, мне 33 года, и я мама двух замечательных мальчиков, старшему 10 лет, а младшему 4 года. Мои ребята растут здоровыми, и я очень слежу за своевременностью их лечения и прохождения профилактических осмотров. Мой старший сын ходит на секцию айкидо и одна из мам недавно в разговоре обмолвилась, что в их школе несколько детей заболело свинкой. Она сказала, что это очень серьезная инфекция и опасная, особенно для мальчиков. Дома в интернете я немного почитала об этой болезни и узнала, что переболевшие мальчики становятся бесплодными. Теперь я переживаю за своих сыновей, так как однажды я совершенно точно хочу стать бабушкой.
Мои дети привиты, но кажется сегодня это уже ничего не гарантирует. Я также прочитала, что свинка иногда может протекать бессимптомно или имитировать обычную простуду. Скажите, пожалуйста, как можно диагностировать эту болезнь наверняка? Какие анализы сдавать, чтобы узнать, больны мои сыновья или это просто ОРВИ?
Ответ для Ольга
Здравствуйте, Ольга. При подозрении на эпидемический паротит следует проводить лабораторные исследования. Острая паротитная инфекция может быть подтверждена обнаружением вируса с помощью анализа ПЦР (полимеразная цепная реакция) в реальном времени или с помощью получения вирусной культуры паротита при выращивании в вирусологической лаборатории. Присутствие сывороточного иммуноглобулина M (IgM) эпидемического паротита, значительное повышение титра антител иммуноглобулина G (IgG) в образцах сыворотки больного в острой и реконвалесцентной фазах, а также сероконверсия IgG также могут быть использованы для диагностики инфекции паротита. Однако, как у невакцинированных, так и у ранее вакцинированных лиц могут иметь место ложноположительные серологические результаты, поскольку на анализы могут влиять другие диагностические объекты, вызывающие неэпидемический паротит. Кроме того, лабораторное подтверждение эпидемического паротита в сильно вакцинированных популяциях может быть проблематичным, и серологические тесты следует интерпретировать с осторожностью, поскольку часто встречаются ложноотрицательные результаты у вакцинированных лиц (то есть, негативный серологический тест у человека с истинным паротитом). При предыдущем контакте с вирусом эпидемического паротита либо в результате вакцинации (особенно при введении 2 доз), либо в результате естественного инфицирования результаты теста на сывороточный IgM против паротита могут быть отрицательными, в то время как результаты теста на IgG могут быть положительными Таким образом, случаи паротита не должны быть исключены отрицательными лабораторными результатами.
Обнаружение вируса
Вирус паротита может быть обнаружен из жидкости, собранной из протока околоушной железы (протока Стенсена), других пораженных протоков слюнных желез, горла, из мочи и из спинномозговой жидкости. Мазки из околоушного протока дают лучший вирусный образец при наличии паротита. Наиболее информативный образец можно получить, когда область слюнных желез массируют приблизительно за 30 секунд до взятия мазка со слизистой оболочки щеки/протока околоушной железы, чтобы образец содержал выделения из околоушной железы или других слюнных протоков. Следует предпринять усилия для получения образца как можно скорее после возникновения паротита или менингита. В идеале, клинические образцы должны быть получены в течение первых 3 дней и не позднее 8 дней после начала паротита. Образцы мочи с меньшей вероятностью, чем образцы из ротовой полости, содержат достаточное количество копий вируса или инфицированных вирусом клеток для культивирования или обнаружения молекулярными методами, и поэтому не являются предпочтительными в качестве исследовательских образцов. Однако у пациентов с осложнениями эпидемического паротита, такими как орхит или менингит, образцы, такие как моча или спинномозговая жидкость, могут быть полезны для дифференциальной диагностики в дополнение к оральным образцам. Успешное выделение вируса всегда должно подтверждаться иммунофлуоресценцией моноклонального антитела, специфического для эпидемического паротита, или молекулярными методами. Молекулярные методы, такие как ПЦР, также могут быть использованы для обнаружения РНК вирусов паротита непосредственно для подтверждения наличия вируса свинки в надлежащим образом собранных образцах. Молекулярное типирование рекомендуется, потому что оно предоставляет важную эпидемиологическую информацию. Молекулярно-эпидемиологический надзор (т. е. определение происхождения «родственников» вируса) позволяет создать базу данных последовательностей, которая поможет отследить пути передачи штаммов эпидемического паротита, циркулирующих в мире в целом и в каждой стране в отдельности. Кроме того, доступны методы генотипирования, позволяющие отличить вирус паротита дикого типа от вируса из вакцины.
Есть некоторые различия в тактике забора материала при подозрении на эпидемический паротит у невакцинированных и вакцинированных пациентов:
- Невакцинированные лица: вирус может быть выделен из околоушного протока/слизистой оболочки щеки в течение 11–14 дней после увеличения слюнной железы; тем не менее, обнаружение вируса, скорее всего, будет успешным как до, так и в течение первых 3 дней после начала паротита.
- Вакцинированные лица: чтобы оптимизировать выход вируса, необходимо сделать акцент на получении клинических образцов вирусного инфектогена из слизистой оболочки щеки в течение 1-3 дней после появления симптомов (отека околоушной железы).
Серологическое тестирование
Доступные серологические тесты для диагностики острой паротитной инфекции и подтверждения предыдущего контакта с паротитом различны в разных лабораториях. Медицинские работники могут отправлять образцы сыворотки крови от больных с подозрением на эпидемический паротит в лаборатории для определения IgM с использованием иммуноферментного анализа (подсвечивание особенных антител с помощью меченых веществ).
- Тесты на антитела IgM (антитела острой фазы)
Иммуноферментный анализ (ИФА): высокоспецифичный тест для диагностики острой паротитной инфекции. Использование ИФА для захвата паротит-специфичных IgM является предпочтительным по сравнению с иммунофлуоресцентным анализом (МФА).
Иммунофлуоресцентный анализ: тест, который является относительно недорогим и простым, но формат МФА особенно чувствителен к помехам от высоких уровней специфического к эпидемическому паротиту IgG. Чтение текста требует значительных навыков и опыта, так как это неспецифическое окрашивание может привести к ложноположительным показаниям, если сыворотку не обработать средством для удаления человеческого антитела IgG.
- Тесты на антитела IgG (антитела «памяти»)
Тесты на антитела IgG могут использоваться для диагностики паротита или для определения предшествующего контакта с паротитной вакциной или вирусом паротита. Доступны различные тесты на IgG-антитела к эпидемическому паротиту, которые включают ИФА, МФА и реакцию нейтрализации вирусов. У пожилых людей или лиц, у которых в анамнезе не было эпидемического паротита или вакцинации, могут обнаруживаться IgG, вследствие предшествующей субклинической инфекции.
Однократный забор образца сыворотки крови, проверенный на специфический против эпидемического паротита IgG, не подходит для диагностики острой паротитной инфекции. Документирование перехода от отрицательного к положительному или 4-кратное повышение титра IgG с использованием парных образцов, может использоваться для диагностики паротита. Тесты на антитела IgG должны проводиться как на образцах в острой фазе, так и в фазе выздоровления в одно и то же время, и один и тот же тип теста должен использоваться на обоих образцах.
Источник
Метод определения
Иммуноанализ.
Исследуемый материал
Сыворотка крови
Маркёр острой инфекции вирусом эпидемического паротита.
Эпидемический паротит («свинка») – системная высокозаразная вирусная инфекция, обычно протекающая с воспалением околоушных слюнных желез. Возбудителем является представитель парамиксовирусов — Mamps virus, проявляющий антигенное сходство с вирусом парагриппа.
Источником инфекции является больной человек; путь передачи инфекции – воздушно-капельный. Инкубационный период обычно составляет 16 — 18 суток. Вирус присутствует в секретах дыхательных путей и до появления припухлости околоушных слюнных желез. Максимально заразны больные за 1 — 2 дня до увеличения слюнных желез и в последующие 5 суток. Примерно у трети заболевших инфекция протекает без увеличения слюнных желез и не диагностируется. После перенесённой инфекции развивается пожизненный иммунитет, независимо от характера и выраженности клинических проявлений инфекции. Повторные случаи паротита могут не иметь связи с вирусом эпидемического паротита. После успешной вакцинации против эпидемического паротита также развивается стойкий иммунитет. Новорожденные дети у матерей, имеющих иммунитет против данного вируса, в первые месяцы жизни защищены материнскими специфическими антителами, проходящими через плаценту во время беременности.
Клиническая картина. Общие проявления инфекции редко бывают тяжёлыми. Небольшое повышение температуры держится около 3 — 4 суток. Припухлость околоушных желез может быть первым проявлением болезни, но может и отсутствовать. Иногда увеличивается одна железа, иногда обе; может наблюдаться увеличение также поднижнечелюстных желез. Возможны головная боль, снижение аппетита и боль в животе. Последняя — следствие воспаления поджелудочной железы (активность амилазы в сыворотке в период болезни обычно повышена) или воспаления яичников.
Самое опасное осложнение инфекции у мальчиков – орхит (воспаление яичек), сопровождающийся сильной болью, припухлостью и болезненностью яичек. Впоследствии возможна атрофия одного или обоих яичек (в последнем случае развивается бесплодие). В ходе инфекции могут страдать и другие железы (у девушек старше 15 лет описано развитие мастита и оофорита (воспаление яичников). Иногда возможно поражение центральной нервной системы — менингит, менингоэнцефалит. Возможно развитие тугоухости, сахарного диабета, артрита. При острой инфекции у беременных повышается риск гибели плода и его инфицирование.
Лабораторная диагностика. В дифференциальной диагностике паротита для подтверждения инфекции вирусом эпидемического паротита могут быть использованы серологические тесты – определение IgM и IgG антител (в лаборатории ИНВИТРО тест № 253 и № 252).
Специфические антитела класса IgG появляются при инфицировании вирусом эпидемического паротита после появления клинических симптомов, вслед за IgM антителами. Концентрация их во время текущей инфекции быстро растёт. После выздоровления IgG антитела сохраняются обычно пожизненно, обеспечивая стойкий иммунитет. После проведённой в прошлом успешной вакцинации в сыворотке также длительно циркулируют обеспечивающие иммунитет IgG антитела, но в меньшей концентрации, чем после перенесённого заболевания. В редких случаях возникновения эпидемического паротита у вакцинированных людей наблюдается выраженный рост концентрации IgG антител без появления IgM антител. IgG антитела обладают способностью проходить через плаценту. Поэтому у младенцев, рождённых иммунными матерями, в первые месяцы жизни циркулируют материнские IgG антитела, защищающие их от данного вируса.
Специфические антитела класса IgM в 70% случаев выявляются в крови уже на второй день после проявления симптомов эпидемического паротита, на третий день заболевания их можно обнаружить практически всегда. Далее IgM выявляются, по крайней мере, в течение 6 недель от появления клинических симптомов заболевания. В редких случаях возникновения эпидемического паротита у вакцинированных людей, IgM антитела могут отсутствовать, наблюдается лишь выраженный рост концентрации IgG антител. Материнские IgM антитела через плаценту не проходят и в крови новорожденных детей не присутствуют.
Литература
- Инфекционные болезни у детей. Ред. Д. Марри. М. Практика, 2006. 928 с.
- Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006. 1798 p.
- J P Gut, C Spiess, S Schmitt, and A Kirn. Rapid diagnosis of acute mumps infection by a
direct immunoglobulin M antibody capture enzyme immunoassay with labeled antigen. J
Clin Microbiol. 1985; 21(3): 346–352.
Источник
Эпидемический паротит (ЭП) – острое инфекционное заболевание, вызываемое вирусом ЭП, характеризующееся лихорадкой, интоксикацией, поражением слюнных желез, других железистых органов и центральной нервной системы. Возбудитель ЭП – РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Paramyxoviridae, роду Rubulavirus. В мире циркулирует 12 генотипов вируса ЭП: A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, K, L и референс – штаммы для потенциально новых генотипов. Различие в нуклеотидных последовательностях у разных штаммов варьирует от 6 до 19%, что используется для дифференциации эндемичных и импортированных штаммов вируса ЭП, а также дифференциальной диагностики ЭП и поствакцинальных осложнений при применении вакцин против этой инфекции.
Источником заражения при ЭП является только человек, больной клинически выраженной, стертой или бессимптомной формой. Инфицирование происходит преимущественно воздушно-капельным путем, однако не исключается контактнобытовой путь передачи инфекции. Инкубационный период составляет от 11 до 23 дней. Вирус выделяется во внешнюю среду со слюной за 1-2 дня до появления клинических симптомов, наиболее интенсивное выделение отмечается в течение первых 3-5 дней болезни и прекращается после 9-го дня от начала заболевания.
Возбудитель проникает в слюнные железы гематогенным путем. Вирусемия является важным звеном патогенеза ЭП, что обеспечивает возможность выделения вируса из крови на ранних этапах болезни. АТ к вирусу ЭП обнаруживаются в течение первой недели после появления клинических признаков. Вначале появляются АТ IgM, которые исчезают к концу первого месяца. Почти одновременно с АТ IgM появляются низкоавидные АТ IgG3, позднее – высокоавидные АТ IgG1 и IgG2. Отсутствие АТ в крови является индикатором того, что человек не болел ЭП ранее, не переносит инфекцию в настоящее время и не был иммунизирован.
Показания к обследованию. Больные с клиническим диагнозом ЭП; контактные из очагов ЭП при подозрении на заболевание, включая атипичные и стертые формы; пациенты с диагнозом серозный менингит, орхит, панкреатит предположительно паротитной этиологии; лица недавно привитые против ЭП (от 10 до 42 дней) с диагнозом серозного менингита; пациенты с другими инфекционными заболеваниями, хирургической и соматической патологией, имеющей сходные клинические проявления.
Дифференциальная диагностика. Заболевания, протекающие со сходной симптоматикой (острые гнойные паротиты, инфекционный мононуклеоз, токсическая и субтоксическая дифтерия зева, токсические паротиты, серозный менингит, рецидивирующий аллергический паротит, слюнокаменная болезнь, хронический сиалоаденит, околоушной лимфаденит, актиномикоз слюнных желез, опухоли слюнных желез, флегмона дна полости рта, субмандибулит, периостит, синдром Микулича, синдром Шегрена, гемобластозы, саркоидоз); при подозрении на поствакцинальные осложнения – серозный менингит, менингоэнцефалит.
Этиологическая диагностика включает выделение вируса ЭП, выявление РНК вируса, обнаружение АТ к вирусу ЭП.
Материал для исследования
- Сыворотка крови – выявление АТ;
- носоглоточные смывы, слюна, моча, СМЖ (при серозном менингите), лейкоциты периферической крови – выделение вируса ЭП;
- слюна, носоглоточные смывы, кровь, СМЖ – выявление РНК вируса.
Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Лабораторная диагностика является обязательной составляющей стандартного определения случая и системы эпидемиологического надзора за ЭП. В ходе лабораторной диагностики ЭП, предпочтение традиционно отдается выявлению АТ к вирусу ЭП. Для выявления АТ могут быть использованы методы РСК, РТГА, реакция нейтрализации бляшкообразования (РН), однако в практике наиболее часто применяют ИФА. При использовании РСК необходимо учитывать, что комплементсвязывающие АТ появляются на 2-5 день болезни и держатся в сыворотке крови довольно долго. Это позволяет использовать РСК как для ранней, так и для ретроспективной диагностики. Исследования проводят одновременно в двух образцах крови, взятых в начале болезни и на 2-3 неделях болезни («парные сыворотки»). При применении РТГА также используют «парные сыворотки». Нарастание титров антигемагглютининов в 4 раза и более в динамике болезни свидетельствует о паротитной инфекции.
Метод ИФА высокочувствителен, специфичен, улавливает весь спектр АТ. Применение ИФА позволяет проводить определение разных классов АТ: обнаружение вирусоспецифических АТ IgM (маркеры текущей инфекции) и АТ IgG, при определении авидности которых можно дифференцировать острую инфекцию от инфекции, перенесенной ранее.
Вирусологический метод основан на раннем выделении (при первых клинических признаках) возбудителя ЭП из лейкоцитов больного на различных культурах клеток (Vero, Л-41, Hela). Вирус в первые 5 дней заболевания также можно обнаружить в носоглоточных смывах, слюне, моче, СМЖ.
Для верификации случая ЭП используют выявление РНК вируса методом ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Для определения вакцинных штаммов, оценки циркуляции и изменчивости вируса, выявления завозных случаев, подтверждения прекращения трансмиссии вируса на территории используют секвенирование.
Показания к применению различных лабораторных исследований. В соответствии с рекомендациями ВОЗ и СП 3.1.2952-11 «Профилактика кори, краснухи и эпидемического паротита» диагноз ЭП должен быть подтвержден лабораторно. Это особенно актуально в связи с существенными изменениями клинических проявлений заболевания в последние годы, наличием стертых и атипичных форм заболевания (25-40% всех заболевших).
Строгим доказательством заболевания ЭП является выделение от больного вируса паротита. Изоляция вируса из образца биологического материала пациента рекомендована ВОЗ в качестве одного из лабораторных критериев диагноза.
Метод ИФА позволяет определить наличие в крови пациента специфических АТ классов IgМ и IgG. Положительный результат выявления АТ IgМ входит в число лабораторных критериев диагноза, рекомендованных ВОЗ. АТ IgМ к вирусу ЭП обнаруживаются с 4 по 28 день от момента появления клинических симптомов. Оптимальным сроком взятия крови являются 4-7 дни от начала заболевания (не ранее). Если взять кровь в эти дни не представляется возможным, для подтверждения диагноза у реконвалесцента можно исследовать сыворотку до 28-го дня от момента появления клинических проявлений. Для подтверждения (исключения) диагноза требуется исследование одного образца сыворотки крови. В случае взятия первого образца сыворотки ранее четвертого дня от даты появления симптомов (неопределенный результат при исследовании АТ IgМ) может потребоваться взятие еще одного образца для проведения повторного тестирование АТ IgМ и оценки динамики уровня АТ IgG. Необходимо отметить, что у ранее привитых против ЭП АТ IgМ не обнаруживаются в 50-60% случаев.
Одним из лабораторных критериев диагноза, рекомендованных ВОЗ, является увеличение уровня специфических АТ IgG в «парных сыворотках». Второй образец сыворотки берется у больного через 14–35 суток после появления клинических признаков заболевания.
Выявление РНК вируса методом ОТ-ПЦР и определение нуклеотидной последовательности вируса (секвенирование) используют для решения ряда клинических и эпидемиологических задач: подтверждение диагноза ЭП, дифференциации диких и вакцинных штаммов при подозрении на поствакцинальные осложнения, определения генотипа вируса и его изменчивости, выявления завозных штаммов, подтверждения прекращения местной передачи вируса на этапе элиминации инфекции.
Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. При исследовании «парных сывороток» методами РСК и РТГА диагноз ЭП подтверждается при нарастании титра АТ в 4 раза и более. В случае однократного исследования в периоде реконвалесценции диагностически значимым результатом метода РТГА считается титр 1: 80 и выше. Использование ИФА позволяет обнаружить вирусоспецифические АТ IgM, что свидетельствует о текущей инфекции при отсутствии иммунизации против ЭП в предыдущие шесть недель. При определении специфических АТ IgG в «парных сыворотках» диагноз считается подтвержденным, если наблюдается не менее чем четырехкратное нарастание титров АТ к вирусу ЭП. В ряде случаев у двукратно вакцинированных может не наблюдаться 4-х кратного увеличения титров в связи с возможностью существенного возрастания уровня АТ IgG сразу после попадания вируса в организм, поэтому на момент взятия крови их уровень может приближаться к максимальному. По определению авидности специфических АТ IgG на 15-45 день от начала заболевания можно дифференцировать острую инфекцию от инфекции, перенесенной ранее.
Выявление РНК вируса имеет несомненные преимущества перед другими методами лабораторной диагностики ЭП. Применение ОТ-ПЦР с последующим рестрикционным анализом, ПЦР в реальном времени, а также анализ последовательностей нуклеотидов (секвенирование) позволяет не только быстро подтвердить или исключить диагноз ЭП, но определить циркулирующие генотипы вируса на конкретной территории, установить источник инфекции и дифференцировать местные случаи заболевания от завозных, отличить «дикие» вирусы ЭП от вакцинных штаммов, уловить изменения вируса ЭП, происходящие на генетическом уровне.
Источник
