Анализ крови при эпид паротите

Эпидемический паротит (ЭП) – острое инфекционное заболевание, вызываемое вирусом ЭП, характеризующееся лихорадкой, интоксикацией, поражением слюнных желез, других железистых органов и центральной нервной системы. Возбудитель ЭП – РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Paramyxoviridae, роду Rubulavirus. В мире циркулирует 12 генотипов вируса ЭП: A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, K, L и референс – штаммы для потенциально новых генотипов. Различие в нуклеотидных последовательностях у разных штаммов варьирует от 6 до 19%, что используется для дифференциации эндемичных и импортированных штаммов вируса ЭП, а также дифференциальной диагностики ЭП и поствакцинальных осложнений при применении вакцин против этой инфекции.

Источником заражения при ЭП является только человек, больной клинически выраженной, стертой или бессимптомной формой. Инфицирование происходит преимущественно воздушно-капельным путем, однако не исключается контактнобытовой путь передачи инфекции. Инкубационный период составляет от 11 до 23 дней. Вирус выделяется во внешнюю среду со слюной за 1-2 дня до появления клинических симптомов, наиболее интенсивное выделение отмечается в течение первых 3-5 дней болезни и прекращается после 9-го дня от начала заболевания.

Возбудитель проникает в слюнные железы гематогенным путем. Вирусемия является важным звеном патогенеза ЭП, что обеспечивает возможность выделения вируса из крови на ранних этапах болезни. АТ к вирусу ЭП обнаруживаются в течение первой недели после появления клинических признаков. Вначале появляются АТ IgM, которые исчезают к концу первого месяца. Почти одновременно с АТ IgM появляются низкоавидные АТ IgG3, позднее – высокоавидные АТ IgG1 и IgG2. Отсутствие АТ в крови является индикатором того, что человек не болел ЭП ранее, не переносит инфекцию в настоящее время и не был иммунизирован.

Показания к обследованию. Больные с клиническим диагнозом ЭП; контактные из очагов ЭП при подозрении на заболевание, включая атипичные и стертые формы; пациенты с диагнозом серозный менингит, орхит, панкреатит предположительно паротитной этиологии; лица недавно привитые против ЭП (от 10 до 42 дней) с диагнозом серозного менингита; пациенты с другими инфекционными заболеваниями, хирургической и соматической патологией, имеющей сходные клинические проявления.

Дифференциальная диагностика. Заболевания, протекающие со сходной симптоматикой (острые гнойные паротиты, инфекционный мононуклеоз, токсическая и субтоксическая дифтерия зева, токсические паротиты, серозный менингит, рецидивирующий аллергический паротит, слюнокаменная болезнь, хронический сиалоаденит, околоушной лимфаденит, актиномикоз слюнных желез, опухоли слюнных желез, флегмона дна полости рта, субмандибулит, периостит, синдром Микулича, синдром Шегрена, гемобластозы, саркоидоз); при подозрении на поствакцинальные осложнения – серозный менингит, менингоэнцефалит.

Этиологическая диагностика включает выделение вируса ЭП, выявление РНК вируса, обнаружение АТ к вирусу ЭП.

Материал для исследования

• Сыворотка крови – выявление АТ;
• носоглоточные смывы, слюна, моча, СМЖ (при серозном менингите), лейкоциты периферической крови – выделение вируса ЭП;
• слюна, носоглоточные смывы, кровь, СМЖ – выявление РНК вируса.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Лабораторная диагностика является обязательной составляющей стандартного определения случая и системы эпидемиологического надзора за ЭП. В ходе лабораторной диагностики ЭП, предпочтение традиционно отдается выявлению АТ к вирусу ЭП. Для выявления АТ могут быть использованы методы РСК, РТГА, реакция нейтрализации бляшкообразования (РН), однако в практике наиболее часто применяют ИФА. При использовании РСК необходимо учитывать, что комплементсвязывающие АТ появляются на 2-5 день болезни и держатся в сыворотке крови довольно долго. Это позволяет использовать РСК как для ранней, так и для ретроспективной диагностики. Исследования проводят одновременно в двух образцах крови, взятых в начале болезни и на 2-3 неделях болезни («парные сыворотки»). При применении РТГА также используют «парные сыворотки». Нарастание титров антигемагглютининов в 4 раза и более в динамике болезни свидетельствует о паротитной инфекции.

Метод ИФА высокочувствителен, специфичен, улавливает весь спектр АТ. Применение ИФА позволяет проводить определение разных классов АТ: обнаружение вирусоспецифических АТ IgM (маркеры текущей инфекции) и АТ IgG, при определении авидности которых можно дифференцировать острую инфекцию от инфекции, перенесенной ранее.

Вирусологический метод основан на раннем выделении (при первых клинических признаках) возбудителя ЭП из лейкоцитов больного на различных культурах клеток (Vero, Л-41, Hela). Вирус в первые 5 дней заболевания также можно обнаружить в носоглоточных смывах, слюне, моче, СМЖ.

Для верификации случая ЭП используют выявление РНК вируса методом ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Для определения вакцинных штаммов, оценки циркуляции и изменчивости вируса, выявления завозных случаев, подтверждения прекращения трансмиссии вируса на территории используют секвенирование.

Показания к применению различных лабораторных исследований. В соответствии с рекомендациями ВОЗ и СП 3.1.2952-11 «Профилактика кори, краснухи и эпидемического паротита» диагноз ЭП должен быть подтвержден лабораторно. Это особенно актуально в связи с существенными изменениями клинических проявлений заболевания в последние годы, наличием стертых и атипичных форм заболевания (25-40% всех заболевших).

Строгим доказательством заболевания ЭП является выделение от больного вируса паротита. Изоляция вируса из образца биологического материала пациента рекомендована ВОЗ в качестве одного из лабораторных критериев диагноза.

Метод ИФА позволяет определить наличие в крови пациента специфических АТ классов IgМ и IgG. Положительный результат выявления АТ IgМ входит в число лабораторных критериев диагноза, рекомендованных ВОЗ. АТ IgМ к вирусу ЭП обнаруживаются с 4 по 28 день от момента появления клинических симптомов. Оптимальным сроком взятия крови являются 4-7 дни от начала заболевания (не ранее). Если взять кровь в эти дни не представляется возможным, для подтверждения диагноза у реконвалесцента можно исследовать сыворотку до 28-го дня от момента появления клинических проявлений. Для подтверждения (исключения) диагноза требуется исследование одного образца сыворотки крови. В случае взятия первого образца сыворотки ранее четвертого дня от даты появления симптомов (неопределенный результат при исследовании АТ IgМ) может потребоваться взятие еще одного образца для проведения повторного тестирование АТ IgМ и оценки динамики уровня АТ IgG. Необходимо отметить, что у ранее привитых против ЭП АТ IgМ не обнаруживаются в 50-60% случаев.

Одним из лабораторных критериев диагноза, рекомендованных ВОЗ, является увеличение уровня специфических АТ IgG в «парных сыворотках». Второй образец сыворотки берется у больного через 14–35 суток после появления клинических признаков заболевания.

Выявление РНК вируса методом ОТ-ПЦР и определение нуклеотидной последовательности вируса (секвенирование) используют для решения ряда клинических и эпидемиологических задач: подтверждение диагноза ЭП, дифференциации диких и вакцинных штаммов при подозрении на поствакцинальные осложнения, определения генотипа вируса и его изменчивости, выявления завозных штаммов, подтверждения прекращения местной передачи вируса на этапе элиминации инфекции.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. При исследовании «парных сывороток» методами РСК и РТГА диагноз ЭП подтверждается при нарастании титра АТ в 4 раза и более. В случае однократного исследования в периоде реконвалесценции диагностически значимым результатом метода РТГА считается титр 1: 80 и выше. Использование ИФА позволяет обнаружить вирусоспецифические АТ IgM, что свидетельствует о текущей инфекции при отсутствии иммунизации против ЭП в предыдущие шесть недель. При определении специфических АТ IgG в «парных сыворотках» диагноз считается подтвержденным, если наблюдается не менее чем четырехкратное нарастание титров АТ к вирусу ЭП. В ряде случаев у двукратно вакцинированных может не наблюдаться 4-х кратного увеличения титров в связи с возможностью существенного возрастания уровня АТ IgG сразу после попадания вируса в организм, поэтому на момент взятия крови их уровень может приближаться к максимальному. По определению авидности специфических АТ IgG на 15-45 день от начала заболевания можно дифференцировать острую инфекцию от инфекции, перенесенной ранее.

Выявление РНК вируса имеет несомненные преимущества перед другими методами лабораторной диагностики ЭП. Применение ОТ-ПЦР с последующим рестрикционным анализом, ПЦР в реальном времени, а также анализ последовательностей нуклеотидов (секвенирование) позволяет не только быстро подтвердить или исключить диагноз ЭП, но определить циркулирующие генотипы вируса на конкретной территории, установить источник инфекции и дифференцировать местные случаи заболевания от завозных, отличить «дикие» вирусы ЭП от вакцинных штаммов, уловить изменения вируса ЭП, происходящие на генетическом уровне.