Анализ крови при чуме плотоядных

Общие сведения

Чума плотоядных — высоко контагиозное заболевание собак и других плотоядных (волков, лис, енотовидной собаки, песца, шакалов и др.), вызываемое РНК содержащим вирусом из рода Morbilliviridae. Также чувствительны к вирусу представители семейства кошачьих.
Вирус очень неустойчив в окружающей среде: на солнечном свете может жить до 14 ч, в помещениях и на одежде — несколько дней, разрушается под действием большинства дезинфектантов.

В настоящее время случаи заболевания чумой собак значительно сократились благодаря ежегодной вакцинации. После выздоровления иммунитет может сохраняться пожизненно, но при нарушении функции иммунной системы возможно повторное заболевание.

К вирусу чумы плотоядных наиболее чувствительны щенки. Выделение вируса происходит с глазными и носовыми истечениями, мокротой, гноем, слюной, мочой, калом и из кожных пустул, возможна непрямая передача (через руки, одежду, посуду).

Инкубационный период в среднем 5-7 дней. Различают гастроинтерстинальную (понос, рвота), респираторную (серозно-слизистые, а позже гнойные назальные и конъюнктивальные выделения, кашель, затрудненное дыхание, тонзиллит), нервную (судорожные сокращения, эпилептические припадки, психические расстройства, тик, параличи и др) и кожную формы (образование пузырей, пустул).

Неспецифическая диагностика основана на изучении данных анамнеза, проводимых вакцинациях, клинических признаках, общеклинических лабораторных исследованиях. Окончательный диагноз устанавливается только после непосредственного нахождения вируса в смывах со слизистых или сыворотке крови.

В настоящее время для выявления вируса чумы собак используется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), основанный на обнаружении ДНК или РНК возбудителя. Также возможно проведение экспресс-тестов на основе хроматографического иммунохимического анализа, который используется для обнаружения антигенов или антител.

Материал

Вид материала зависит от фазы болезни, особенностей клинических признаков, наличия или отсутствия вакцинаций. Для исследования берется кровь, мазки со слизистой носа, глаз, прямой кишки или кал (по клиническим симптомам).

При длительности заболевания до 5 дней для исследования рекомендуется
использовать мазки со слизистых, учитывая клинические симптомы (наличие выделений из носа или наличие диареи). При длительности заболевания более 5 дней рекомендуется одновременное исследование мазков со слизистых, цельной крови (плазмы или сыворотки крови). Кровь берется в биохимическую пробирку или пробирку с антикоагулянтом ЭДТА. Гепарин использовать нельзя!

Мазки со слизистой носа и прямой кишки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного физиологического раствор. Конец зонда отрезают, с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки.

Для приготовления смывов с конъюнктивы используют стерильные зонды с ватными тампонами и стерильные пробирки объемом 1,5 мл, содержащие 500 мкл стерильного физиологического раствора.

Методика получения смывов:

а) зонд смочить в жидкости и отжать влагу, прислоняя ватный наконечник к внутренней стенке пробирки.

б) оттянув веко животного, провести зондом по слизистой века по направлению к носу, обмывая глазное яблоко.

в) тщательно прополоскать зонд в пробирке.

г) провести процедуры а.-в. последовательно с каждым веком обоих глаз, собирая материал в одну и ту же пробирку.

д) от зонда отломить часть с ватным наконечником (палочка должна быть полностью погружена в пробирку) и поместить его в ту же пробирку, плотно закрыв крышку.

Материал доставляют в лабораторию в день взятия, сохраняя при температуре от 2 до 8 °С не более суток. Допускается хранение материала при температуре не выше минус 16 °С в течение 1 нед, при температуре не выше минус 68°С длительно.

Допускается только однократное размораживание материала.

Интерпретация результатов

Вирус чумы собак обнаружен

— При наличии клинических симптомов говорит о заболевании.

— При диагностике методом ПЦР возможно появление ложноположительных результатов, связанных с тем, что метод, обладая высокой чувствительностью, может реагировать на вакцинный штамм, поэтому необходимо, чтобы после вакцинации прошло не менее 2-х недель.

— После лечения и исчезновения клинических признаков, некоторое время вирус может обнаруживаться в организме, до тех пор, пока не произойдет его полная элиминация.

— Может быть при бессимптомном вирусоносительстве.

Вирус чумы собак не обнаружен

— Отсутствие чумы плотоядных.

— Наличие другого заболевания, которое протекает с похожими клиническими признаками.

— В случае бессимптомного вирусоносительства при исследовании смывов со слизистых не всегда удается обнаружить вирус, так выделение его происходит нерегулярно.

Светлакова Е.С
Ветеринарный врач-лаборант
лаборатории «BIOVETLAB»

Чума плотоядных (Febris catar-rhalis infectiosa canis), чума собак, болезнь Карре, острая вирусная болезнь животных семейства псовых и куньих, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистых оболочек, пневмонией, расстройством функции нервной системы и желудочно-кишечного тракта. Заболевание широко распространено во всех странах мира; летальность достигает от 30 до 90%.

1. Подготовка пациента
2. Показания и противопоказания
3. Интерпретация и форма выдачи результата

Вирус чумы собак (Canine distemper virus, CDV) одноцепочечный РНК вирус из семейства Paramyxoviridae, в настоящее время известен как Canine morbillivirus. Как этиологический агент чумы собак (canine distemper), вирус известен с 1760 года. Будучи высокотропным к эпителиальным, лимфоидным и тканям нервной системы CDV поражает системы органов дыхания, пищеварения, лимфатической системы, кожи, скелета и центральной нервной системы. Различные штаммы вируса имеют разную степень патогенности и вызывают различные клинические проявления этой инфекции.

Источники возбудителя инфекции больные и переболевшие животные. Инфицированные животные выделяют вирус с истечениями из носа, глаз, слюной, мочой и калом спустя 7 дней после заражения и до трех месяцев после переболевания.

Чума плотоядных регистрируется в любое время года, но наиболее часто весной и осенью. Вирус чувствителен к высоким температурам, ультрафиолетовому излучению, эфиру, хлороформу, фенолу, аммиачным соединениям. Обычная дезинфекция эффективна и уничтожает CDV в окружающей стреде.

Антитела у щенков исчезают после прекращения вскармливания грудным молоком в течение 3 — 6 месяцев.

Характерны два способа заражения: оральный и респираторный при прямом контакте с заражённым животным, либо через загрязненные вирусом корма, воду, воздух, выделения больных животных и различные предметы ухода за ними.

В патогенезе чумы отмечают следующие основные периоды. После внедрения через слизистые оболочки CDV реплицируется в макрофагах, посредством которых попадает в лимфоидные ткани миндалин и бронхиальных лимфатических узлов. К 4-6 дням инфицирования патоген атакует лимфоидные ткани всего организма, что сопровождается повышением температуры и выраженной лейкопенией в результате поражения Т и В-клеток. Между 8-9 днями течения болезни у собак отмечается поражение эпителиальных тканей ЦНС посредством клеточно-ассоциированной виремии. Важно помнить, что контагиозными собаки становятся в период распространения вируса в организме. К 14 дню инфицирования при адекватном ответе иммунной системы может наступить полное освобождение организма от вируса. Ослабленный иммунитет, стрессовые ситуации, воздействие высоких концентраций высоковирулентных вирусных частиц к 9 – 14 дню инфицирования приводят к генерализованной инфекции и летальному исходу. Течение заболевания усугубляется активацией вторичных бактериальных инфекций.

CDV проникает через плацентарный барьер, при этом велика вероятность абортов, появления мертворожденных или ослабленных щенков. Щенки, инфицированные внутриутробно иммуносупрессивны, у них возможно проявление неврологических проявлений.

Системная инфекция CDV нередко осложняется сальмонеллёзом, приводящим к геморрагической диарее и сепсису. Отмечают сочетанное инфицирование CDV, Toxoplasma gondii или Neosporum caninum, приводящее к миозитам и радикулоневритам. Данный момент необходимо учитывать при комплексной диагностике.

Диагноз на чуму плотоядных основывается на клинических проявлениях заболевания у не привитых щенков в возрасте от 3 до 6 месяцев. В лабораторной практике для определения сывороточных антител класса IgG и IgM к CDV используется ИФА. Повышенные титры сывороточных антител класса IgM выявляются в сыворотке крови собак в период острой фазы на 8 день инфицирования. Высокие титры антител IgG могут свидетельствовать о перенесенном заболевание или проведенную вакцинацию. ИФА, направленный на выявление антител IgG позволяет диагностировать хроническую форму чумы с инфицированием тканей нервной системы.

В настоящее время для подтверждения диагноза используется ОТ-ПЦР в режиме реального времени, которая позволяет выявить РНК вируса в тканях и жидкостях заболевшего животного. Установлено, что максимальная вирусная нагрузка выявлена в пробах мочи, смывах с конъюнктивы и миндалин, цельной крови что делает данные виды биоматериала максимально информативными.

Сроки исполнения: 2 дня (плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: эпителий слизистой оболочки прямой кишки.

Метод исследования: ПЦР – Real-time.

Подготовка пациента: не рекомендуется взятие соскобов после применения средств, облегчающих введение термометра ; не рекомендуется взятие соскоба, если животное получает сорбенты.

Показания: рвота, диарея.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: соскоб эпителиальных клеток со слизистой оболочки прямой кишки с помощью зонда.

Преаналитика: урогенитальный зонд аккуратно ввести на глубину 0,5 см в прямую кишку и вращательными движениями набрать клеточный материал со слизистой оболочки. Перенести зонд в микропробирку с транспортной средой, вращательными движениями «смахнуть» биоматериал в жидкость, зонд утилизировать. Если зонд оставляется в пробирке, длина отрезанного зонда не должна мешать плотному закрыванию крышки пробирки! Микропробирку плотно закрыть крышкой до щелчка. Заполнить все графы направительного бланка. Сохранность образца 10 дней при +2°С …+8°С.

Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С … +8°С (синий пакет).

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

Форма выдачи результата: качественный метод.

Обнаружение или не обнаружение в исследуемой пробе РНК Canine distemper virus, CDV

Использованная литература:

1. Rendon-Marin S, da Fontoura Budaszewski R, Canal CW, Ruiz-Saenz J.Tropism and molecular pathogenesis of canine distemper virus.
   Virol J. 2019 Mar 7;16(1):30. doi: 10.1186/s12985-019-1136-6
2. Klotz D, Baumgärtner W, Gerhauser I.Type I interferons in the pathogenesis and treatment of canine diseases.
   Vet Immunol Immunopathol. 2017 Sep;191:80-93. doi: 10.1016/j.vetimm
3. Martinez-Gutierrez M, Ruiz-Saenz J. Diversity of susceptible hosts in canine distemper virus infection: a systematic review and data synthesis.
   BMC Vet Res. 2016 May 12;12:78. doi: 10.1186/s12917-016-0702-z

Чума плотоядных (Febris catarrhalis infectiosa canis Pestis carnivorum, чума собак, катаральная лихорадка) — вирусная, остро протекающая болезнь, проявляющаяся лихорадкой, воспалением слизистых оболочек, пневмонией и поражением центральной нервной системы. Распространено заболевание во всём мире. Восприимчивы собаки и пушные звери, из диких животных: волки, еноты, лисы, барсуки, выдры.

Этиология

Возбудитель РНК-содержащий вирус семейства Paramyxoviridae, размером 110-180 нм содержащий суперкапсиду. Является иммунологическим родственником возбудителя кори человека и чумы КРС.

В биологическом материале (кровь, кал) вирус хранится до 15 дней, в крови — до 3-х, слизи — до 2-х месяцев.

Инактивация вируса происходит при температуре 60 ᵒС за 30мин, при 100 ᵒС за 1 минуту.

Наибольшая концентрация вируса находится в крови, костном мозге, селезёнке, носовых истечениях. Выход патогена из организма происходит с носовыми и глазными истечениями, фекалиям, выдыхаемым воздухом.

Вирусоносительство у переболевших животных происходит на протяжении 3-5 месяцев.

Культивирование вируса проводят в эмбриональной куриной культуре, клеток почки и лёгких.

Эпизоотология

Болезнь может возникнуть в любое время года. Наиболее подвержены инфицированию молодняк: собаки до 1 года, пушные звери до 6 месяцев. При этом летальность молодняка может быть в пределах 70-90%, взрослого поголовья 40-70%.

Инкубационный период у собак15-20 дней, у пушных зверей от 10 до 30 дней.

Течение может происходить в нервной, кишечной, кожной, легочной формах.

Фактором передачи инфекционного начала являются предметы окружающей среды, обслуживающий персонал, переносящий вирус на одежде и обуви. Щенки заражаются внутриутробно. Резервуаром вируса служат дикие плотоядные и не иммунизированные животные.

При попадании в организм возбудитель проникает в региональные лимфоузлы. Быстро размножаясь наполняют кровеносное русло, вызывая лихорадочные явления и патологию внутренних органов.

Симптомы

Болезнь может протекать подостро, остро, хронически, атипично и абортивно.

Температурный порог достигает 42 ᵒC. Животное угнетено, наблюдается мышечная дрожь, пугливость.

Через некоторое время появляются истечения из носовых отверстий, первоначально слизисто-серозные, далее гнойные. Присыхая, экссудат закупоривает носовые ходы, дыхание становится затруднённым, сопящим, животные трутся носами о предметы, фыркают и чихают.

Из глазных отверстий выделяются слизистые, серозные, а затем и гнойные истечения. Веки склеиваются, конъюнктива гиперемирована, припухшая. Чётко просматривается светобоязнь, животное пытается спрятаться в тёмный угол.

Кишечная форма проявляется рвотой, слизистой и кровавой диареей, запорами, чередующимися с поносами.

При кожной форме на серозных оболочках близь ротового отверстия и носовых ходов возникает пустулёзная сыпь, со временем засыхающая и буреющая.

Нервная форма проявляется возбуждением, клоническими и тоническими судорогами, эпилептическими признаками, нарушением координации движений. Дальнейшее течение сопровождается параличами конечностей.

Форма болезни проявляется в зависимости от иммунитета животного, чаще смешанная. Через 6-7 дней симптомы могут сглаживаться, но затем проявляются вновь, сопровождаясь летальным исходом.

У норок чума проявляется повышением температуры, угнетением, потерей массы тела. На слизистых носа и губ возникает везикулярная сыпь. Нарушается координация движений, возникают парезы и параличи. У самцов болезнь проявляется опуханием лап, в основном задних.

Диагноз

Устанавливается на основании клинической картины и эпизоотологических данных.

Для подтверждения необходима лабораторная диагностика. Для этого отбираются мазки из носовых истечений, конъюнктивы и крови. Из пат. материала отбирают кусочек селезёнки, почки, мочевого пузыря, лёгкого.

Вирус выделяют в культуре клеток с последующей идентификацией посредством МФА, РСК, ИФА. Сыворотки крови исследуют РНГА, РСК, РДП.

Дифференцирование проводят от бешенства, пастереллёза, сальмонеллёза, болезни Ауески.

Лечение

Терапевтические мероприятия проводят с применением специфических и симптоматических препаратов.

В качестве лекарственного средства при первых же симптомах применимы Авирокан, Глобкан, Витафен. Можно применить поливалентную сыворотку против чумы плотоядных.

Носовые ходы очищают от корочек и проводят закапывание препаратами ципровет, анандин, лакрикан.

Внутривенно вводят плазмозамещающие препараты.

Применяют иммуностимуляторы типа имунофан, миксоферон, риботан.

Чтобы подавить развитие вторичной микрофлоры применяют антибиотики широкого спектра действия с пролонгированным эффектом с назначением пробиотиков.

Профилактика

В целях профилактики звероводческие и хозяйства и собаководческие питомники работают по режиму закрытого предприятия. Строго регламентируется посещаемость территорий посторонними лицами. Постоянно проводится борьба с грызунами и мероприятия по недопущению проникновения в хозяйство бродячих собак и диких плотоядных.

При установлении диагноза объявляется карантин. Запрещается перегруппировка, бонитировка, зооветеринарные мероприятия, которые могут повлечь за собой распространение болезни. В период гона к спариванию допускают только тех животных, которым проведена вакцинация, но не ранее 14 дней после неё.

Всех больных и подозреваемых изолируют и поддают специфическому и симптоматическому лечению.

В хозяйстве проводят текущие дезинфекции каждые 5 дней, а в изоляторе ежедневно. Для этого применимы: раствор натрия гидроокиси 2%, эмульсия лизола 3% концентрации, раствор хлорной извести.

Туши павших животных сжигают или утилизируют в биотермической яме.

Клинически здоровых животных иммунизируют. Для вакцинации применяют моновалентные (Вакчум и Мультикан-1) и поливалентные (гексаканивак, Мультикан-4) иммунные препараты.

Карантинные мероприятия заканчиваются через 30 дней после последнего случая падежа или выздоровления и проведения заключительной дезинфекции.

Перемещение собак проводят не ранее чем через 45 дней после снятия карантина, а пушных зверей через 180 дней.