Анализ крови пцр после укуса клеща

[40-176]
ПЦР-диагностика «клещевых» инфекций

1870 руб.

Комплексное исследование крови, в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) выявляют возбудителей боррелиоза (Borrelia burgdorferi), моноцитарного эрлихиоза человека (Ehrlichia chaffeensis) и анаплазмоза человека (Anaplasma phagocytophilum).

Синонимы русские

ПЦР-диагностика боррелиоза, эрлихиоза и анаплазмоза.

Синонимы английские

Tick-borne diseases, polymerase chain reaction, PCR, Lyme disease, Human ehrlichiosis, Human anaplasmosis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевые инфекции представляют серьезную проблему для здоровья человека. Наибольшее значение имеют следующие клещевые инфекции:

• болезнь Лайма (клещевой боррелиоз), возбудителем заболевания является спирохета Borrelia burgdorferi;
• анаплазмоз, ранее известный как гранулоцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Anaplasma phagocytophilum.

В обоих случаях переносчиком инфекции являются иксодовые клещи Ixodess capularis, I. ricinus, I. pacificus и I. persulcatus. В России наибольшее значение имеют виды I. ricinus и I. persulcatus.

• моноцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Ehrlichia chaffeensis. Переносчик инфекции – иксодовые клещи Amblyomma americanum.

Клещевые инфекции обладают рядом общих свойств:

• Клиническая картина клещевых инфекций имеет много общих черт и неспецифична. Как правило, заболевание манифестирует в виде гриппоподобного синдрома с лихорадкой, головной болью, миалгией и артралгией. Дифференцировать клещевые инфекции между собой и с другими острыми инфекционными на основании только лишь клинической картины заболевания невозможно.
• Некоторые иксодовые клещи инфицированы сразу двумя (реже тремя) патогенами (коинфекция) и могут приводить к развитию у одного и того же человека сочетанной инфекции. Чаще описаны случаи сочетанного боррелиоза и анаплазмоза.

Учитывая эти особенности, при подозрении на клещевую инфекцию необходимо комплексное лабораторное исследование, включающее анализы на все значимые возбудители клещевых инфекций.

Для лабораторной диагностики клещевых инфекций могут применяться несколько методов, в том числе серологические тесты, анализ окрашенного мазка крови, бактериологический посев, иммуногистохимический анализ и методы молекулярной диагностики. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это один из методов молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в крови) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Исследование обладает целым рядом преимуществ по сравнению с другими методами идентификации клещевых инфекций:

• Быстрота получения результата. ПЦР – это один из самых быстрых на сегодняшний день методов идентификации возбудителя. Благодаря этому, метод ПЦР считается самым опитмальным способом диагностики острой инфекции.
• Высокая чувствительность метода. Другой «быстрый» метод диагностики эрлихиоза – это окраска мазков крови по Гимзе. Обнаружение в мазках крови так называемых морул (скоплений микроорганизмов внутри лейкоцитов) – это характерный признак эрлихиоза и анаплазмоза. Морулы, однако, удается выявить не всегда: лишь в 3 % случаев моноцитарного эрлихиоза и 25-75 % случаев анаплазмоза. Чувствительность же ПЦР анализа достигает 85 % в отношении E. chaffeensis и 90 % в отношении A. phagocytophilum, что позволяет считать ПЦР самым точным среди быстрых методов диагностики клещевых инфекций.
• Высокая специфичность (60-85 %). Специфичность метода особенно важна для дифференциальной диагностики клещевых инфекций. Известно, что, например, серологические тесты на клещевые инфекции часто дают ложноположительный результат из-за наличия перекрестных реакций, обусловленных общими антигенными свойствами указанных микроорганизмов. Так как в ПЦР используются специфические для каждого из микроорганизмов праймеры, вероятность ложноположительного результата гораздо ниже.

Следует отметить ограничения метода ПЦР:

• Так как в реакции определяется ДНК как живых, так и погибших микроорганизмов, метод ПЦР не предназначен для оценки эффективности лечения: результат будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени после начала эффективного лечения.
• Чувствительность ПЦР в меньшей степени, чем других методов идентификации возбудителя, зависит от приема антибиотиков. Наиболее точный результат, однако, будет получен при взятии образца биоматериала до начала лечения антибактериальными препаратами.

В диагностике клещевых инфекций также могут помочь дополнительные лабораторные исследования. Так, характерной чертой эрлихиозов является панцитопения и умеренное повышение печеночных трансаминаз. При тяжелом течении заболевания могу наблюдаться гипонатриемия, гипокальциемия, гипомагниемия, повышение креатинина и мочевины и признаки ДВС-синдрома.

Следует отметить, что иксодовые клещи также являются переносчиками вируса клещевого энцефалита. При необходимости это комплексное ПЦР-исследование может быть дополнено исследованием на вирус клещевого энцефалита.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики боррелиоза, моноцитарного эрлихиоза и анаплазмоза.

Когда назначается исследование?

• При наличии у пациента гриппоподобного синдрома (лихорадки, головной боли, миалгии и артралгии) в сочетании с указанием на укус клеща;
• при обнаружении у пациента с лихорадкой «лабораторных» признаков клещевых инфекций: панцитопения, повышение уровня печеночных трансаминаз.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

• боррелиоз (Borrelia burgdorferi), моноцитарный эрлихиоз человека (Ehrlichia chaffeensis) и/или анаплазмоз человека (Anaplasma phagocytophilum).

Отрицательный результат:

• норма.



Важные замечания

• Исследование не предназначено для оценки эффективности лечения заболевания.

Также рекомендуется

[02-029] Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой и СОЭ

[06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)

[06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)

[07-092] Вирус клещевого энцефалита, IgM

[07-095] Вирус клещевого энцефалита, антиген (в ликворе)

Инфекционист, терапевт, врач общей практики.

Литература

1. Ismail N, Bloch KC, McBride JW. Human ehrlichiosis and anaplasmosis. Clin Lab Med. 2010 Mar;30(1):261-92.
2. Swanson SJ, Neitzel D, Reed KD, Belongia EA. Coinfections acquired from ixodes ticks. Clin Microbiol Rev. 2006 Oct;19(4):708-27.

Опасность получить укус клеща подстерегает человека повсюду – при походе за грибами в лес, прогулках в парке, поездках на дачу. Находясь на ветвях деревьев и в траве, они могут попасть на человека, и тот даже некоторое время может об этом не догадываться.

Переносимые паразитом инфекции могут стать причиной инвалидности или летального исхода. Поэтому важно сделать анализ крови при укусе клеща, чтобы определить наличие инфекции и срочно начать лечение при необходимости.

Какие анализы нужно сдать после укуса клеща

Чем продолжительнее время пребывания клеща на теле, тем выше риск инфицирования от него. Если при контакте в несколько минут риск еще минимален, то при большем времени нахождении паразита на коже он составляет уже 80%.

Клещи не так безобидны, как многие другие насекомые, поэтому каждый должен знать о тех серьезных болезнях, которые они переносят. Сюда относятся:

1. Клещевой энцефалит – природно-очаговая инфекция вирусного характера, которая характерна лихорадочным состоянием, отравлением всего организма и поражением серого вещества мозга. Вначале, несколько дней, болезнь может протекать абсолютно бессимптомно. Только к 3–4 неделе сильно повышается температура, тошнота и потеря аппетита, сильные головные боли, судороги и даже парез конечностей, кома. Если не оказать квалифицированную медицинскую помощь, все может закончиться летальным исходом.
2. Боррелиоз (или болезнь Лайма) – инфекция, наиболее распространенная среди тех, которые передаются клещами. Болезнь поражает ЦНС, суставы, кожу и сердечную мышцу. Нередко, практически в 50% случаев, переходит в хроническую форму. Подробно о боррелиозном клеще и лечении.
3. Конго-крымская геморрагическая лихорадка – тяжелое заболевание, распространяемое клещами, результатом которого становится интоксикация организма и кровотечения.
4. Омская геморрагическая лихорадка – вирусное очаговое заболевание с лихорадкой, поражением дыхательных органов и синдромом геморрагии.
5. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом – к прочим признакам добавляется тяжелое поражение почек, и даже развитие острой почечной недостаточности.

Все эти заболевания вспыхивают в тех регионах, где их передают клещи, но бывают нетипичные случаи заражения. Если человека укусил клещ, важно знать, какие обязательные первоочередные меры нужно предпринять. К ним относятся:

• Извлечение паразита с помещением его в плотно закрывающуюся емкость для последующего его исследования. Но это целесообразно только тогда, когда есть возможность его своевременной доставки в лабораторию – это должно произойти не позднее чем через сутки;
• Смазать место укуса любым антисептиком – йодом, зеленкой, перекисью и прочими;
• Узнать какие анализы нужно сдать;
• По предписанию врача пройти полный курс медикаментозного лечения;
• самостоятельно контролировать самочувствие месяц, следующий за укусом. Особенно это важно, когда обращения в больницу не было, и клещ не исследовали. Тогда, если появляются тревожные симптомы, все равно потребуется медицинское вмешательство.

В целях безопасности, нельзя:

• брать клеща незащищенными руками – если он заразен, можно также инфицироваться через трещинки на коже;
• ковырять рану с клещом острыми предметами;
• совершать резких движений при извлечении, сдавливать клеща;
• следует заливать рану и мазать, прижигать присосавшегося клеща в надежде, что он выйдет сам;
• расчесывать место поражения.

В любом случае не время поддаваться панике – в 80%, даже если клещ был зараженным, это не вызывает инфицирование человека. Чтобы отмести все сомнения, проводятся анализы крови.

Существует несколько методик проведения анализов:

1. ПЦР – метод полимерной цепной реакции, выявляет в крови или другой жидкости возбудителя заболевания. Метод способен установить возбудителя, даже при самой минимальной его концентрации в крови и в самые минимальные сроки. Выполняется очень быстро – лаборантам достаточно всего лишь нескольких часов. Кровь берется из пальца. Из недостатков – потребуется специфическое оборудование, имеющееся далеко не в каждой больнице. Данный анализ нецелесообразно использовать при обнаружении энцефалита – если идет позитивная фаза иммуноглобулина М, то зачастую он дает отрицательный результат.
2. ИФА – иммуноферментный анализ обнаруживает антитела к возбудителю болезни в крови, сначала иммуноглобулины М, появляющийся самым первым после заражения. Они являют собой первичный иммунный отклик организма на чужеродные антигены. Затем обнаруживаются иммуноглобулины G, они будут присутствовать в крови долго, так как их основная задача противостоять повторному появлению чужих антигенов. Этот способ очень надежен, что является неоспоримым плюсом. Минусом же можно назвать то, что берется кровь из вены, что не очень практично с маленькими детьми.
3. Вестерн-блоттинг схож с ИФА, но обладает еще более высокой точностью, особенно при установлении боррелиоза и для того, чтобы отделить его от энцефалита – в этом метод стопроцентный. В отличие от ИФА, которое обнаруживает общее количество иммуноглобулинов, данное исследование может даже определить антитела на специфические гены возбудителя. Результат анализа представлен в виде полос на тестовой полоске: положительно, отрицательно, сомнительно (неопределенного вида полоски). Он проводится в качестве дополнительного. Дожидаться результатов такого исследования придется 6 дней. Также к недостаткам относят дороговизну этого метода, высокую вероятность неопределенных результатов (в особенности когда речь идет о пациентах с состояниями иммунодефицита) и необходимость в высококвалифицированных лаборантах.
4. Хемилюминесцентный иммуноанализ МФА на боррелиоз. Исследуется сыворотка венозной крови. Именно этот метод дает самый точный диагноз, достоверность – свыше 95%. Важно провести его в период 2–4 недель после укуса. Пик антител бывает лишь спустя 3 месяца.
5. РИФ – радиоиммуноферментный анализ. Быстр и недорог, но все больше утрачивает свою актуальность и уступает место новым методикам.
6. Иммунофлюорисцентный анализ крови – самый доступный из всех. Многие больницы обеспечивают его выполнение. Для установления инфекции используются сыворотка крови, ликвор, суставная жидкость. Помеченные флюорисцином комплексы при обнаружении вируса начинают светиться при рассматривании их в специальный микроскоп.

Анализы на антитела G бывают качественными (просто «да» или «нет») или количественными, с цифрами обнаруженных антител.

• Менее 10 ед./мл – отсутствие болезни или слишком ранние сроки его проведения;
• 10–15 – сомнительный;
• 15 и выше – положительный. Причем это возможно при ранее перенесенном боррелиозе и при других болезнях – сифилисе, мононуклеозе и прочих. Анализ повторяют спустя 1–2 недели.

На антитела М:

• До 18 ед./мл – отрицательно;
• 18-22 – сомнительно;
• Более 22 – положительно.

В инфекционной больнице подскажут, какие анализы сдать после укуса клеща.

Когда сдавать кровь после укуса паразитом

Анализ сдается чтобы подтвердить либо опровергнуть заболевание. Но это не делается сразу же после укуса – такое обследование не несет никакой нужной информации.

Когда сдавать анализ крови после укуса клеща:

1. Наибольшую достоверность дают обследования, проведенные спустя 10 дней – это если анализ делается методом ПЦР.
2. Если же используется метод ИФА, то кровь сдают только спустя 4–5 недель.

Антитела М и G в крови возникают лишь через 2–4 недели. Материал должен быть взят точно в установленные сроки потому, что, к примеру, боррелиоз появляется в крови не сразу. Если не соблюдать сроки, то вероятен ложноотрицательный результат.

Кровь нужно сдать два раза на скрытые инфекции. Первый – в установленный по заболеванию срок, а второй спустя месяц после первого. Причем оба раза должен использоваться одинаковый метод. Повторный анализ не делается, если первый положительный.

Сколько делается анализ самого клеща

Не менее важным является исследование самого укусившего клеща. Как уже упоминалось, его не хранят в банке более 24 часов с момента извлечения. Для микроскопического исследования это должно быть живое насекомое.

Совсем другое дело при ПЦР исследовании клеща – он годится и мертвым, достаточно даже какой-то части и годен он будет на протяжении 3 суток. Когда клещ доставляется в лабораторию, отдельно следует сказать, чтобы его исследовали одновременно на все возможные инфекции.

Сколько делается анализ клеща – зависит от лаборатории и оборудования. Чаще такой анализ делается 3 дня. В частных клиниках возможно выполнение исследования за 12 часов. Можно хранить клеща при температуре строго +5 градусов два дня.

Через сколько дней после укуса нужно сдавать кровь

Для выявления боррелиоза очень важно следить за динамикой исследований крови. Анализ берется дважды: первый раз обязательно спустя 10 дней после укуса, а второй – через 2–3 недели после. Повторный анализ необходим для определения эффективности лечения. Лабораторное обнаружение вируса боррелиоза проводится в следующих случаях:

• при нахождении клеща на теле и тем более – нескольких;
• когда укус имел место в эпидемоопасной зоне;
• если обнаружилось, что клещ является носителем вируса;
• когда у пациента отмечаются симптомы болезни;
• для дифференцирования одного заболевания от других, со схожей симптоматикой (например, менингита);
• для того чтобы определить, насколько эффективным было назначенное лечение;
• в целях подтверждения диагноза.

Забор крови берется из вены, утром натощак. Желательно не курить хотя бы час до анализа.

Возвращаясь к вопросу, какие анализы сдают при укусе клеща, важно запомнить одну вещь: иногда, правда, очень редко, могут одновременно развиваться боррелиоз и энцефалит, поэтому сдавать нужно на все одновременно.

Популяции этих насекомых обитают в любой климатической зоне по всей России. Значит, любой человек может стать потенциальной жертвой этого насекомого. Конечно, оптимальным вариантом является своевременная вакцинация от клещей. Но, в любом случае, после его укуса, не стоит впадать в панику, а четко следовать инструкции и сдать анализы на обнаружение болезней, которые передаются клещами.