Анализ крови пцр качественный и количественный
Содержание
- Виды ПЦР
- Показания для анализа
- Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
- Расшифровка результатов ПЦР-исследования
- Преимущества ПЦР-анализа
- Недостатки ПЦР
- Цена ПЦР-анализа на гепатит С
ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.
Виды ПЦР
ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.
Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл. При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.
Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.
При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.
Рекомендуемые товары
Показания для анализа
Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:
- У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
- Проводятся скрининговые профилактические исследования.
- Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
- Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
- Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
- У пациента диагностирован цирроз.
- Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.
Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита
Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.
Пациент должен следовать следующим правилам:
- Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
- Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
- Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
- Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).
Расшифровка результатов ПЦР-исследования
Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.
Качественный анализ. Расшифровка
| Обнаружено | Пациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса. |
| Не обнаружено | Пациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности. |
Количественный анализ. Расшифровка
| Не обнаружено | Человек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности. |
| До 1,8*10^2 МЕ/мл | Концентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование. |
| До 8*10^5 МЕ/мл | Низкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении. |
| Больше 8*10^5 МЕ/мл | Высокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. |
| Больше 2,4*10^7 МЕ/мл | Поскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови. |
Генотипирование. Расшифровка
| Обнаружена РНК определенного генотипа | В биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3. |
| Обнаружена РНК вируса гепатита С | В биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования. |
| Не обнаружено | Человек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса. |
Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.
В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:
- Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
- Загрязнение образца крови.
- Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
- Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).
Преимущества ПЦР-анализа
Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.
Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).
Недостатки ПЦР
Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:
- В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
- Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
- Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.
Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.
Цена ПЦР-анализа на гепатит С
В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.
Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.
В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.
Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.
Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.
Источник
Возможность записаться к врачу как мужского так и женского пола на выбор
Уникальная авторская 100% БЕЗБОЛЕЗНЕННАЯ методика забора мазков у мужчин
300 метров от метро Кропоткинская
БЕЗ ВЫХОДНЫХ с 09:00 до 20:00
Результаты анализов за 20 минут (мазок и кровь на ЗППП) стоимость 500 рублей на 1 инфекцию
Врачи высшей категории, кмн с опытом работы от 15 лет — консультация 900 рублей
Анонимность анализов и лечения
Записаться на прием
* поиск по всем статьям на сайте
Полимеразная цепная реакция, сокращенно ПЦР.
Представляет собой метод, используемый для экспоненциальной амплификации определенной последовательности ДНК-мишени.
Позволяющей изолировать, секвенировать или клонировать одну РНК среди многих.
ПЦР была разработана более 30 лет назад, американским биохимиком Кэри Муллисом.
Полимеразная реакция имеет широкое использование, применяется не только как анализ на ИППП.
Применение ПЦР практикуется в следующих направлениях: генотипирование:
- клонирование
- обнаружение мутаций
- секвенирование
- криминалистика
- тестирование на отцовство
Как правило, ПЦР представляет собой трехступенчатую реакцию.
Образец, содержащий разбавленную концентрацию матричной ДНК, смешивают с термостабильной ДНК-полимеразой.
Такой как Taq-полимераза, праймер, дезоксинуклеотидтрифосфаты (dNTP) и магний.
На первой стадии ПЦР образец нагревают до 95-98 градусов.
На втором этапе температуру снижают до приблизительно 55-65 градусов.
На третьей стадии температуру обычно повышают до 72 градусов.
Эта последовательность денатурации, отжига, и расширения повторяется для множества циклов.
Что и приводит к экспоненциальному усилению матричной ДНК.
ПЦР достаточно сложный, но информативный метод исследования.
Зачастую применяется в диагностике патологий вирусной и инфекционной этиологии.
Анализ позволят практически со 100% точностью выявить и определить разновидность патогенного микроорганизма.
В последнее время, полимеразная реакция приобрела популярность в ранней диагностике туберкулеза.
Позволяет выявить возбудителя с 98% точностью на доклинической стадии.
Преимущества диагностики туберкулеза при помощи ПЦР:
- Максимально высокая точность обнаружения присутствия в организме Mycobacterium tuberculosis, за счет использования специального фермента, предназначенного для возбудителя туберкулеза.
- Высокая чувствительность анализа, как следствие, исследование способно обнаружить присутствие даже одной бактерии.
- Быстрота получения результатов диагностики. Тестирование проводится достаточно быстро, уже спустя 3-5 часов можно получить готовые результаты.
Mycobacterium tuberculosis является внутриклеточным микобактериальным патогеном.
Представляет собой одно из самых распространенных и наиболее серьезных инфекционных заболеваний в мире.
Считается, что более 2 миллиардов людей имеют скрытую инфекцию M. Tuberculosis.
Около 8 миллионов — активную форму туберкулеза.
Кроме того, пациенты с ВИЧ и нарушением работы иммунитета на фоне заболевания чаще подвержены дополнительному инфицированию бактерией M. tuberculosis.
В их случае патология протекает сложнее, с многочисленными осложнениями.
ПЦР при подозрении на туберкулез является наиболее востребованным и точным анализом.
Способен выявить заболевание на самых ранних сроках, а также прибегнуть к своевременному, эффективному лечению.
Качественный ПЦР на гепатит С
В большинстве случаев, качественный ПЦР назначается при выявлении в организме пациента антител к гепатиту С.
Полимеразная реакция при подозрении на гепатит С проводится по следующему принципу.
Первое тестирование — на четвертую неделю после обнаружения антител.
Второе — на двенадцатую неделю, третье — на двадцать четвертую.
Далее анализ назначается на постоянной основе, один раз каждые 12 месяцев.
Проведение полимеразной реакции на гепатит Б, А, Ц позволяет получить максимально точные результаты за счет высокой чувствительности теста от 10 до 500 МЕ/мл.
Это дает возможность определять наиболее низкие показатели присутствия в организме вируса и контролировать его дальнейшее развитие.
Расшифровка результатов проводится лечащим врачом.
Положительный анализ говорить о наличии патогенного микроорганизма.
Отрицательный — чаще об отсутствии, но на 100% не исключает НСV.
Взятие анализа на проведение ПЦР НСV проводится в утреннее время, биологическим материалом является венозная кровь.
ПЦР количественный на гепатит С
Количественная полимеразная реакция назначается пациентам, уже имеющим диагноз «гепатит С».
Задача анализа выявить вирусную нагрузку на организм.
Определить количественное присутствие патогена, а также понять, насколько проводимая терапия эффективна.
Расшифровать результаты диагностического исследования поможет лечащей врач-гепатолог.
Поставьте оценку статье:
Типы ПЦР анализов
рассказывает подполковник
медицинской службы, врач
Ленкин Сергей Геннадьевич
Смотреть видео
Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.
Ленкиным Сергеем Геннадьевичем
Наши цены на услуги
| Наименование | Срок | Цена |
|---|---|---|
| Прием венеролога | 900.00 руб. | |
| ДНК Mycoplasma hominis | 1 д. | 300.00 руб. |
| ДНК Neisseria gonorrhoeae | 1 д. | 300.00 руб. |
| ДНК Trichomonas vaginalis | 1 д. | 300.00 руб. |
ПЦР качественный или количественный: что лучше, в чем отличие
Полимеразная реакция основана на обнаружении РНК возбудителя, проводится в двух вариантах — количественный и качественный метод.
В чем отличие проводимых способов диагностики?
Качественное исследование направлено на обнаружение патогенной микрофлоры в организме человека.
Результаты анализов будут содержать два варианта ответа: положительный, отрицательный.
В положительном случае — инфекция присутствует, в отрицательном — в организме ее нет.
ПЦР количественного типа определяет вирусную нагрузку на организм и количество патогенного микроорганизма на 1 мл крови.
Как правило, количественный ПЦР назначается пациентам, имеющим какое-либо заболевание.
Как мониторинг течения патологии или для определения эффективности терапии.
Разновидности ПЦР
Основные используемые методики и разновидности полимеразной реакции:
Разновидность полимеразной реакции | Описание метода |
Вложенная ПЦР | Вложенная ПЦР представляет собой модификацию ПЦР, которая была разработана для повышения чувствительности и специфичности. Вложенная ПЦР включает использование двух наборов праймеров и двух последовательных реакций ПЦР. Вложенная ПЦР полезна для амплификации генов, присутствующих в малом количестве. |
Инвертированная ПЦР | Применяется в случае, когда имеется информация только о небольшом участке внутри необходимой последовательности. Обычная полимеразная реакция требует, чтобы ДНК-последовательности на обоих концах области, подлежащей амплификации, были известны. Инверсная ПЦР (IPCR) и фиксированная данного условия не требует. IPCR усиливает фланкирующие неизвестные последовательности ДНК, используя обратную амплификацию и универсальный праймер. |
ПЦР с обратной транскрипцией | RT-PCR — это технология, посредством которой молекулы РНК превращаются в их комплементарные последовательности ДНК с помощью обратных транскриптаз, с последующей амплификацией, вновь синтезированной ДНК стандартными процедурами ПЦР. Обратная транскрипция ПЦР (RT-PCR) использует мРНК, а не ДНК в качестве исходного шаблона. Обычно используется для тестирования генетических заболеваний и для характеристики экспрессии генов в различных типах клеток. |
Асимметричная ПЦР | Суть метода заключается в использование праймеров с различной концентрацией. Анализ проводится с отжигом на высоких температурах, что позволяет поддерживать эффективность реакции на всех этапах лабораторного тестирования. |
Количественная ПЦР (второе название метода: анализ в реальном времени) | Система ПЦР в реальном времени основана на обнаружении и количественном определении продукта полимеразной реакции (патогена). Метод предусматривает использование ДНК-зондов или флуоресцентный праймер. |
Ступенчатая ПЦР | Это метод повышения специфичности ПЦР-реакций. При проведении анализа ПЦР использует программу циклирования, где температура отжига постепенно уменьшается. Вначале температура достигает свыше 75 градусов. Затем температуру отжига постепенно уменьшают до тех пор, пока она не достигнет расчетной температуры отжига праймеров или нескольких градусов ниже. Амплификацию затем продолжают с использованием уже достигнутой, оптимальной температуры. |
Мультиплексная ПЦР | Метод предполагает использование более одной пары праймеров. Цель мультиплексной ПЦР состоит в том, чтобы одновременно амплифицировать несколько сегментов ДНК-мишени, и тем самым, сохранять матричную ДНК, сэкономить время и минимизировать затраты на тестирование. Часто используется для генетического скрининга, где необходимо амплифицировать несколько продуктов за одну реакцию. |
Real — time PCR
Real — time PCR (qRT-PCR) или количественная полимеразная реакция.
Это современный метод исследования, направленный на измерение количества ДНК определенного микроорганизма.
В ходе исследования проводится измерение количества уже амплифицированной ДНК в режиме real-time после каждого процесса (цикла) амплификации.
Есть основное преимущество qRT-PCR (rt- pcr) по отношению к другим методикам полимеразной реакции.
Real-time PCR позволяет определить начальное количество копий матричной ДНК с максимальной точностью и высокой чувствительностью.
Кроме того, данные qPCR в режиме реального времени могут быть оценены без гель-электрофореза.
Это приводит к сокращению времени работы сканера и увеличению пропускной способности.
Выполняется тестирование в единой, закрытой трубчатой системе qPCR.
Поэтому возможность проникновения постороннего ДНК сведена к нулю.
RAPD-ПЦР: в каких случаях используется
Метод RAPD-ПЦР используется при необходимости идентифицировать конкретный патоген, среди изолятов близкородственных штаммов.
Для проведения исследования требуется тщательная очистка диагностируемого ДНК.
В других методиках ПЦР, которые были упомянуты ранее, предполагается использование нескольких праймеров.
При RAPD- исследовании проводится отжиг только одного, комплементарного, со случайным участком ДНК диагностируемой бактерии.
В ходе анализа подбираются оптимальные условия (отжиг, праймер, температура).
Это позволяет добиться хороших результатов для определения конкретного патогена среди схожих.
ПЦР с обратной транскрипцией
Основные используемые методики полимеразной реакции–вложенная, инвертированная, асимметричная, ступенчатая, виртуальная.
Существует еще один метод диагностики патогенов–RT-PCR.
Для амплификации РНК-мишеней была разработана ПЦР-диагностика с обратной транскрипцией.
Чаще всего исследование применяется с целью выявления патогенной флоры, провоцирующей ВИЧ, грипп и ВПЧ.
Способ влечет за собой начальную стадию транскрибирования части генома РНК в комплементарную ДНК.
Которая затем амплифицируется с помощью ПЦР.
Процесс RT-PCR:
- После того, как РНК выделяется из клеточного материала путем экстракции, к реакционной смеси добавляют специальное вещество, которое содержит фермент обратной транскриптазы, а также праймеры, специфичные для интересующей мишени, и нуклеотиды. Если мишень присутствует, происходит обжигание цепи РНК при помощи праймеров.
- Фермент обратной транскриптазы синтезирует комплементарную нить ДНК, простирающуюся от праймера.
- Температуру повышают до 95 градусов и цепи РНК / ДНК отделяются.
- Затем происходит снижение температуры, что позволяет праймерам отжигать вновь образованную ДНК.
RT-PCR может выполняться как одно- или двухступенчатая процедура.
ПЦР на герпес 6 типа
Вирус герпеса 6 типа относится к роду герпесвирусов, состоит из двух подтипов — HHV6А и 6В.
Первый подтип поражает ткани нервной системы.
Нередко является провоцирующим фактором в развитии рассеянного склероза.
Второй часто проявляется сыпью и признаками краснухи.
Для выявления вирусной патологии герпеса 6 типа применяется ПЦР в реальном времени.
В некоторых случаях врач может рекомендовать диагностику герпеса 1 и 2 типа — наиболее распространенных и 16, 18 типа — провоцирующих злокачественные процессы.
Интерпретация анализа, как правило, следующая: положительный или отрицательный результат.
Провести диагностику и лечение ВЫ можете в нашей клинике, где есть все необходимое оборудование, а прием ведет опытный гинеколог, врач высшей категории
Запись на прием ежедневно по телефону
8 (495) 642-30-37
с 9:00 до 21:00
,
Провести диагностику и лечение ВЫ можете в нашей клинике, где есть все необходимое оборудование, а прием ведет опытный врач венеролог, уролог, врач высшей категории, кандидат медицинских наук
Запись на прием ежедневно по телефону
8 (495) 642-30-37
с 9:00 до 21:00
,
Провести диагностику и лечение ВЫ можете в нашей клинике, где есть все необходимое оборудование, а прием ведет опытный врач венеролог, уролог, врач высшей категории, кандидат медицинских наук
Запись на прием ежедневно по телефону
8 (495) 642-30-37
с 9:00 до 21:00
Отличная клиника, в случае проблем со здоровьем всегда обращаюсь к этим докторам, уже давно с ними знаком и никогда никаких проблем в обслуживании не возникало. Все четко и понятно, приехал и проконсультировался, получил лечение.
Мазуров Дмитрий, киноактер
Рекомендую всем своим знакомым, поскольку только здесь получил первоклассное лечение. Хорошая клиника, меня все устраивает, особенно демократичные цены и удобно, что можно проконсультироваться сразу по многим вопросам.
Артем
Весь наш коллектив регулярно лечится в этой клинике. Здесь работают классные специалисты, главное все комфортно, все обследования можно сделать сразу на месте и главное результаты лечения хорошие.
Коллектив группы НА-НА
Анонимная пациентка благодарна доктору Ленкину за квалифицированную помощь по диагностике и лечению вен заболеваний. Ранее обращалась в другие клиники, но результат был неудовлетворительным, и только в этой клинике смогли оказать квалифицированную помощь.
Благодарю своему спасителю, прекрасному врачу, и просто хорошему человеку доктору Ленкину, за очень уважительное и внимательное отношение к своим пациентам, терпение и объяснение всего процесса лечения. Конечно болеть всегда неприятно и плохо, но в руках этого замечательного специалиста чувствуешь себя уверенно и не переживаешь по поводу результатов лечения.
Пчелкина Мария Сергеевна
Видеоотзывы
Запишитесь на прием сейчас
Источник
