Анализ крови олигоклональный igg в ликворе
Метод определения
Изоэлектрофокусирующий электрофорез с иммуноблоттингом
Исследуемый материал
Сыворотка крови. Спинномозговая жидкость, выпот (взятие биоматериала осуществляется врачом в условиях стационара)
Тест используют в диагностике рассеянного склероза и других демиелинизирующих заболеваний ЦНС.
Рассеянный склероз представляет собой хроническое аутоиммунное неврологическое заболевание, сопровождающееся фокальным воспалением, демиелинизацией и утратой аксонов в центральной нервной системе. Заболевание дебютирует с преходящей слабости конечностей, нарушений чувствительности, невритом зрительного нерва, слепотой или двоением в глазах, нарушением функции тазовых органов. Повторные эпизоды появления неврологической симптоматики могут постепенно трансформироваться в прогрессирующее течение с нарастанием необратимой нейродегенерации и инвалидизацией больного.
Иммунное воспаление при рассеянном склерозе протекает за гематоэнцефалическим барьером, который защищает нервную систему от проникновения многих веществ из периферической крови. Поэтому в настоящее время только анализ цереброспинальной жидкости позволяет установить характер воспаления в центральной нервной системе.
Выявление олигоклонального иммуноглобулина IgG в ликворе (цереброспинальной жидкости) является наилучшим лабораторным тестом для диагностики рассеянного склероза на всех стадиях заболевания.
Результат этого лабораторного метода позволяет оценить изменения клональности иммуноглобулинов в ходе хронического иммунного ответа в центральной нервной системе. Если при остром воспалении иммунный ответ обычно поликлональный, то по мере хронизации нарастает число тех клонов иммунных клеток, которые активно взаимодействуют со своими антигенами. Это приводит к формированию «олигоклонального иммуноглобулина», появление которого отражает трансформацию специфического иммунного ответа по мере воспаления и указывает на хроническое воспаление в центральной нервной системе.
Метод изоэлектрофокусирования позволяет «сфокусировать» молекулы IgG. Повышение количества идентичных молекул IgG какого-либо клона проявляется в виде четкой тонкой полосы. Поликлональный профиль характеризуется диффузной картиной распределения IgG. Олигоклональный профиль характеризуется наличием двух и более четких полос. Поэтому, помимо термина «олигоклональный IgG», применяют термин «олигоклональные полосы» (англ.: oligoclonal bands или OCB).
Важно сравнить клональность иммуноглобулинов в цереброспинальной жидкости и в сыворотке крови. Это сравнение позволяет выявить случаи, когда олигоклональный иммуноглобулин, всё же проникает через гематоэнцефатический барьер, поступает в центральную нервную систему из крови при системных воспалениях аутоиммунной или инфекционной природы. Для интерпретации и анализа результатов теста применяют классификацию типов синтеза Anderson et al. 1994 (см. таблицу в разделе Интерпретация результатов). Помимо поликлонального и олигоклонального, различают моноклональный профиль IgG, который отмечается при онкогематологических заболеваниях.
Олигоклональный IgG (2 тип синтеза) выявляется у 75-95% пациентов с рассеянным склерозом и в совокупности с результатами магнитно-резонансной томографии (МРТ) позволяет установить диагноз у 70-95% пациентов. Обнаружение олигоклонального IgG на этапе дебюта заболевания (клинически изолированный синдром) позволяет с вероятностью 72-91% предсказать развитие достоверного рассеянного склероза. Отсутствие олигоклонального IgG при остром диссеминированном энцефаломиелите позволяет исключить диагноз рассеянного склероза.
Выявление олигоклонального IgG не абсолютно специфично для рассеянного склероза, поскольку в цереброспинальной жидкости олигоклональный IgG может быть выявлен при нейроборрелиозае и нейросаркоидозе (в 60%), герпетическом, туберкулезном и ВИЧ- энцефалите (в 11-50%), а также при ревматических заболеваниях и системных васкулитах. При воспалительных заболеваниях, отличных от рассеянного склероза, чаще выявляют 3 и 4 типы синтеза. В совокупности с клиническими и инструментальными находками, а также расширенным анализом цереброспинальной жидкости, выявление олигоклонального IgG позволяет значительно улучшить проведение дифференциального диагноза поражений центральной нервной системы.
Источник
[13-058]
Диагностика рассеянного склероза (изоэлектрофокусирование олигоклонального IgG в ликворе и сыворотке)
5240 руб.
Обнаружение в ликворе и сыворотке крови олигоклональных иммуноглобулинов G (IgG) для диагностики и оценки прогноза рассеянного склероза.
Синонимы русские
Олигоклональные антитела в спинномозговой жидкости и крови, олигоклональные полосы, анализ ликвора и крови при рассеянном склерозе.
Синонимы английские
Oligoclonal IgG (CSF, Serum); Oligoclonal bands, isoelectric focusing.
Метод исследования
Иммуноблотинг.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь, ликвор.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
- Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 30 минут до исследования.
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Рассеянный склероз – заболевание центральной нервной системы, которое чаще встречается у женщин в молодом возрасте (до 55 лет). В некоторых случаях он проявляется в виде достаточно характерных симптомов (например, преходящего нарушения зрения в результате неврита), однако чаще наблюдаются неспецифические признаки, например слабость или покалывание в руках и ногах. Учитывая, что эти признаки могут наблюдаться и при многих других неврологических заболеваниях, диагноз «рассеянный склероз» невозможно установить на основании только клинической картины. Для точной диагностики этого заболевания используют лабораторные методы.
Одним из методов диагностики рассеянного склероза является анализ спинномозговой жидкости на наличие олигоклональных иммуноглобулинов G. Олигоклональные IgG определяются в виде нескольких пиков концентрации IgG при электрофорезе белков ликвора («олиго» – «несколько»). В норме в ликворе не выявляются никакие моно-, олиго- или поликлональные иммуноглобулины. У пациентов с рассеянным склерозом IgG могут быть выявлены в 85-95 % случаев. Роль этих иммуноглобулинов в развитии рассеянного склероза не ясна, однако показано, что они синтезируются В-лимфоцитами в ликворе в областях, прилегающих к зоне демиелинизации (повреждения демиелиновой оболочки мозга), что, по-видимому, указывает на аутоиммунную природу заболевания. Следует отметить, что олигоклональные IgG не являются специфическим признаком рассеянного склероза и могут быть обнаружены при многих других заболеваниях ЦНС, таких как криптококковый менингит, нейросифилис или васкулит с поражением сосудов головного мозга. С учетом этого исследование ликвора на олигоклональные IgG служит в настоящий момент дополнительным диагностическим тестом. Его роль значительно возрастает, если результаты основного диагностического теста (МРТ) неоднозначны.
Результаты анализа ликвора на олигоклональные IgG необходимо всегда интерпретировать с учетом результатов исследования сыворотки крови на олигоклональные IgG, что было учтено при составлении этого анализа. Такой подход позволяет дифференцировать заболевания, протекающие с изолированным интратекальным синтезом IgG (рассеянный склероз), от системных заболеваний, при которых появление олигоклональных IgG в ликворе является лишь отражением их усиленного системного, но не интратекального синтеза (например, синдром Гийена – Барре). Наличие в ликворе 2 и более пиков концентрации иммуноглобулинов, отсутствующих в сыворотке крови, – доказательство их истинного интратекального синтеза. Для рассеянного склероза типично наличие олигоклональных IgG в ликворе при нормальной картине электрофореза белков сыворотки крови. Наличие одинаковых олигоклональных полос как в ликворе, так и в сыворотке крови не характерно для рассеянного склероза, а указывает на какое-либо системное воспалительное заболевание (например, СКВ). Наличие разного количества олигоклональных полос или их разной формы в ликворе и в сыворотке крови также может указывать на наличие сочетанной патологии, например рассеянного склероза и саркоидоза.
Кроме того, для дифференциальной диагностики рассеянного склероза и других заболеваний могут быть исследованы и другие параметры ликвора: уровень белка, количество и состав клеток. Так, для рассеянного склероза более характерно умеренное увеличение концентрации белка (уровень белка более 100 мг/дл – не характерный для этого заболевания признак) и плеоцитоз менее 50-100 лимфоцитов.
На сегодняшний день самым лучшим методом определения олигоклональных IgG является изоэлектрическое фокусирование, представляющее собой разновидность метода электрофореза. Другие иммуноглобулины (IgA, IgM, свободные легкие цепи иммуноглобулинов) реже используются в диагностике рассеянного склероза.
Считается, что обнаружение олигоклональных IgG связано с более быстрым прогрессированием заболевания, поэтому исследование этих антител может быть также использовано для прогноза заболевания.
Важно отметить, что обнаружение олигоклональных IgG в ликворе при отсутствии каких-либо клинических симптомов или признаков демиелинизациии на МРТ не означает ни наличия рассеянного склероза, ни повышенного риска этого заболевания. Лабораторные тесты не могут быть использованы в отдельности от других методов обследования для постановки этого диагноза.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики и оценки прогноза рассеянного склероза.
Когда назначается исследование?
- При наличии симптомов рассеянного склероза: нарушения зрения (помутнение, двоение в глазах), слабости, онемении, покалывании в руках и ногах, нарушении равновесия, учащении мочеиспускания, особенно если симптомы носят перемежающийся характер и наблюдаются у молодой женщины;
- при получении неоднозначных результатов магнитно-резонансного исследования головного мозга (МРТ).
Что означают результаты?
Референсные значения
Тип синтеза IgG: поликлональный IgG.
Положительный результат:
- рассеянный склероз;
- любые патологические образования ЦНС;
- СКВ с поражением ЦНС;
- васкулит сосудов головного мозга;
- сахарный диабет;
- синдром Гийена – Барре;
- нейросифилис;
- нейроборрелиоз;
- панэнцефалит (краснушный, подострый склерозирующий);
- полинейропатия;
- синдром Шегрена с поражением ЦНС;
- артериовенозная мальформация сосудов спинного мозга.
Отрицательный результат:
- норма.
Что может влиять на результат?
- Наличие текущих системных воспалительных заболеваний (например, СКВ) или воспалительных заболеваний ЦНС в анамнезе (например, состояние после лечения нейросифилиса).
Также рекомендуется
- Белок общий в ликворе
- Treponema pallidum, IgG в ликворе
- Borrelia burgdorferi s.l., ДНК [ПЦР]
Кто назначает исследование?
Невролог, врач общей практики, терапевт.
Литература
- Andersson M, Alvarez-Cermeño J, Bernardi G, Cogato I, Fredman P, Frederiksen J, Fredrikson S, Gallo P, Grimaldi LM, Grønning M, et al. Cerebrospinal fluid in the diagnosis of multiple sclerosis: a consensus report. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 1994 Aug;57(8):897-902.
- Puccioni-Sohler M. Cerebrospinal fluid oligoclonal IgG bands in multiple sclerosis: what does it mean? Arq Neuropsiquiatr. 2012 Aug;70(8):569-70.
- McPhee S.J., Papadakis M. CURRENT Medical Diagnosis and Treatment / S. J. McPhee, M. Papadakis; 49 ed. — McGraw-Hill Medical, 2009.
Источник
Метод исследования: Изоэлектрофокусирование с последующим иммуноблоттингом.
Обнаружение олигоклональных полос иммуноглобулинов G при изоэлектрическом фокусировании является одним из диагностических критериев Рассеянного склероза (РС) (McDonald W.I. и соавт., 2010).
В патогенезе развития рассеянного склероза ключевая роль принадлежит формированию аутоиммунного повреждения центральной нервной системы (ЦНС). Для заболевания характерны развитие очагов воспаления в ЦНС (с последующим замещением рубцовой тканью), демиелинизация и утрата нейронов. Аутоиммунный ответ на ряд белковых и небелковых антигенов ЦНС приводит к синтезу олигоклональных антител, протекающему за гематоэнцефалическим барьером (интратекально), вне зависимости от продукции антител в крови.
Параллельное исследование проб сыворотки крови и спинномозговой жидкости (СМЖ), взятых у пациента, позволяет оценить распределение IgG в двух средах, разделенных гематоэнцефалическим барьером. Выявление олигоклональных фракций IgG в ликворе при их отсутствии в сыворотке крови является высокоспецифичным лабораторным признаком демиелинизирующих заболеваний ЦНС.
Метод изоэлектрофокусирования с последующим иммуноблоттингом позволяет разделить антитела, продуцируемые разными клонами плазматических клеток, по их изоэлектрической точке. Исследование является качественным и позволяет определить характерный тип синтеза IgG.
Типы синтеза иммуноглобулина Ig G в спинномозговой жидкости и в сыворотке крови в дифференциальной диагностике демиелинизирующих заболеваний центральной нервной системы1.
| Тип синтеза | Синтез в СМЖ (c) | Синтез в крови (s) | Нозологическая форма |
|---|---|---|---|
| 1 | Поликлональный | Поликлональный | Норма или острое воспалительное заболевание |
| 2 | Олигоклональный | Поликлональный | Рассеянный склероз 85-95% в дебюте заболевания |
| 3 | Олигоклональный | Олигоклональный (менее выраженный) | Рассеянный склероз, реже системная красная волчанка, постинфекционные энцефалиты, саркоидоз, вирусные энцефалиты |
| 4 | Олигоклональный | Олигоклональный идентичный СМЖ | Генерализованные процессы с вовлечением гематоэнцефалического барьера: боррелиоз, нейросифилис, синдром Гийена-Барре, ВИЧ-инфекция, грибковый менингоэнцефалит, туберкулез |
| 5 | Моноклональный | Моноклональный | Моноклональные гаммапатии |
1 С.В. Лапин, Е.П. Евдошенко. «Лабораторные методы диагностики рассеянного склероза и других неврологических заболеваний». Справочник заведующего КДЛ №1 январь 2011 г.
ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:
- Диагностика рассеянного склероза.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Пример результата исследования:
| Параметр | Результат |
|---|---|
| Тип синтеза | Тип синтеза 2 |
| Комментарий к услуге: Олигоклональные антитела IgG, определение типа синтеза Тип синтеза 2: олигоклональные IgG в СМЖ (ОСВ+) и поликлональные IgG в сыворотке крови. | |
Заключение к услуге Олигоклональные антитела IgG, определение типа синтеза. Олигоклональные IgG в спинномозговой жидкости (СМЖ) (ОСВ+) и поликлональные IgG в сыворотке крови (2 тип синтеза). Иммунное воспаление при демиелинизирующих заболеваниях протекает за гематоэнцефалическим барьером, который защищает нервную систему от проникания веществ из периферической крови. Поэтому только анализ СМЖ позволяет установить характер воспаления в ЦНС. В ходе метода сравнивается клональность иммуноглобулинов в СМЖ и сыворотке крови. Это сравнение позволяет выявить изолированный синтез олигоклональных IgG, а также случаи, когда олигоклональные иммуноглобулины поступают в ЦНС из крови при системных воспалениях. Для интерпретации и анализа результатов теста применяют классификацию типов синтеза Anderson et al.1994. Обнаружен 2 тип синтеза иммуноглобулинов, наиболее характерный для демиелинизирующих заболеваний. Редко отмечается при нейроборрелиозе и нейросаркоидозе, герпетическом, туберкулезном и ВИЧ-энцефалите, а также при ревматических заболеваниях и системных васкулитах. | |
Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.
Источник
У больных рассеянным склерозом в процессе длительно протекающего демиелинизирующего воспалительного процесса с патологической активацией иммунной системы в пределах ЦНС в ликворе начинают циркулировать иммунные белки. При этом речь идет преимущественно об определенных подгруппах неспецифических антител IgG (олигоклональные иммуноглобулины класса G), синтезируемых несколькими клонами (олигоклональными) плазматических клеток.
Для их выявления на специальном оборудовании проводят исследование ликвора и сыворотки крови больного методом гель-электрофореза с изоэлектрофокусированием (ИЭФ) и иммуноблотингом IgG. После ферментативного окрашивания в итоге можно визуализировать патологические олигоклональные полосы белковых концентратов IgG в ликворе (II паттерн, см. рисунок), отсутствующие в сыворотке крови.
Рисунок. Классические паттерны распределения IgG в процессе гель-электрофореза с изоэлектрофокусированием и иммуноблотингом [Ахмедова Г.М., Аверьянова Л.А., Хабиров Ф.А. и соавт., 2013].
Тип I — Отсутствие моно- и олигоклональных фракций IgG в ликворе и сыворотке крови (поликлональные Ig). Наблюдается в норме или на начальных стадиях РС при наличии очевидной неврологической симптоматики.
Тип II — Олигоклональные фракции IgG в ликворе, отсутствующие в сыворотке крови, что указывает на изолированный интратекальный синтез IgG. Олигоклональные IgG характеризуются наличием множества фракции Ig с неравномерным разбросанным распределением их в пространстве с отсутствием тенденции к сохранению градиенту концентрации. Наличие олигоклональных IgG в ликворе характерно для РС, подострого склерозирующего панэнцефалита Людо ван Богарта, нейросифилиса, реже для острого рассеянного энцефаломиелита (ОРЭМ). При РС паттерн распределения олигоклональных IgG достаточно стабильный, а количество фракций IgG с течением времени только возрастает (расширение спектра эпитопов) в независимости от лечения.
Тип III — Олигоклональные фракции IgG в ликворе, отчасти присутствующие в сыворотке крови. Также указывает на интратекальный синтез IgG. Часто выявляют при ОРЭМ, хронических нейроинфекциях, РС.
Тип IV — Идентичные олигоклональные фракции IgG в ликворе и в сыворотке крови, указывающие на хронический системный дизиммунный процесс с повышенной проницаемостью ГЭБ. Признак может быть ассоциирован с ОВДП, ОРЭМ, системной красной волчанкой, антифосфолипидным синдромом, хроническим инфекционным воспалением ЦНС.
Тип V — Моноклональные фракции IgG в ликворе и сыворотке крови указывает на дис- или парапротеинемическую моноклональную гаммапатию. Моноклональные IgG характеризуются наличием множества фракции Ig c равномерным распределением в пространстве с сохранением градиента концентрации при ИЭФ, что связано с особенностями синтеза парапротеина (посттрансляционные модификации, например, гликозилирование, несколько изменяющие изоэлектрическую точку фокусирования моноклональных Ig). Моноклональные IgG — специфичный признак миеломной болезни, моноклональной гаммапатии неопределенного значения, ассоциирован с некоторыми формами ХВДП и с заболеваниями спектра оптиконевромиелита.
При этом олигоклональные IgG выявляются даже при нормальной их концентрации в ликворе, то есть это исключительно качественный способ диагностики патологического процесса (см. рисунок).
Рисунок. Образец результата гель-электрофореза с изоэлектрофокусированием ликвора (дорожка № 1) и сыворотки крови (дорожка № 2) больной рассеянным склерозом, проведенного в условиях РКДЦ ДЗ МЗ РТ. На дорожке № 1 выявлены фракции (отмечены >) олигоклональных Ig G в ликворе, отсутствующие в сыворотке крови, что свидетельствует об их интратекальном синтезе. Дорожка № 3 приведена в качестве контроля и демонстрирует наличие моноклональных Ig G в сыворотке крови у больного хронической воспалительной демиелинизирующей полирадикулоневропатией, ассоциированной с М-гаммапатией. Собственные наблюдения Гранатова Е.В.
Олигоклональные группы в ликворе обнаруживаются у 98% больных, страдающих рассеянным склерозом 10 и более лет [Gelfand J.M., 2014]. Данное исследование относят к «золотому» стандарту лабораторного метода подтверждения рассеянного склероза и представляет большую ценность для ранней постановки диагноза или проведения дифференциальной диагностики с другими клинически и параклинически схоже протекающими заболеваниями. Следует отметить, что наличие интратекальных олигоклональных IgG не являет строго характерным для рассеянного склероза. Так данный процесс может быть выявлен при некоторых других хронических воспалениях ЦНС: нейросифилисе, подостром склерозирующем панэнцефалите и т.п. Тем не менее, в связи с редкостью других причин в настоящее время, специфичность положительного результата исследования остается крайне высокой именно для рассеянного склероза [Ахмедова Г.М., Аверьянова Л.А., Хабиров Ф.А., Хайбуллин Т.И., Гранатов Е.В., Бабичева Н.Н., Рахматуллина Э.Ф., 2013].
Диагностические критерии
Источник