Анализ крови на титр антител у кошки

Инфекционный перитонит кошек (ИПК, Feline infectious peritonitis, FIP) — чрезвычайно тяжелая форма течения коронавирусной инфекции, получившая свое название из-за наиболее часто встречающегося клинического проявления: воспаления брюшной полости (перитонита). Возбудитель данной инфекции — РНК-содержащий вирус порядка Nidovirales семейства Coronaviridae рода Coronavirus вида Felinae Coronavirus (FCoV). В эту группу входят также таксономически близкие коронавирусы: вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ВТГС, TGEV) и коронавирус собак (CCV).

Болеют кошки всех возрастов, но наиболее чувствительны к заболеванию молодые животные в возрасте до 2 лет, а также взрослые старше 10 лет. Количество зарегистрированных случаев ИПК не зависит от времени года (не наблюдается сезонности заболевания), соотношение по полу больных животных существенно не отличается (болеют как коты, так и кошки), особой чувствительностью к инфекции обладают кошки британской породы голубого и серого окраса. Не отмечено какой-либо устойчивости к инфекции у беспородных животных.

Клинически болезнь проявляется в двух формах: влажной (инфузионной), сопровождающейся скоплением экссудата в брюшной и/или плевральной полостях, и сухой (неинфузионной), проявляющейся в гранулематозном поражении внутренних, преимущественно паренхиматозных органов и не сопровождающейся накоплением экссудата в полостях тела. Инфузионный ИПК считается классической формой проявления и составляет приблизительно 75% клинических случаев. ИПК может иметь длительный инкубационный период (от одной недели до полугода), во время которого клинические признаки не наблюдаются. Кроме того, существует скрытая форма заболевания, при которой возможно выделение вируса во внешнюю среду.

Передача вируса от больных животных происходит вертикально (трансплацентарно), либо горизонтально (контактно от животного к животному или через предметы ухода).
Первоначально коронавирус попадает в ротовую или носовую полость, где в фарингеальных эпителиальных клетках происходит первичная репликация вируса. Затем вирус проникает в клетки столбчатого эпителия кишечника — основное место его размножения и персистенции. При таком варианте заражения инфекция может протекать бессимптомно или проявляться в виде энтерита, легкого недомогания, диареи, снижения аппетита и не представляет опасности для жизни животного. Кошки с персистирующей коронавирусной инфекцией являются основным источником вируса, выделение которого может происходить со слюной, мочой, но основное количество выделяется с калом.
Однако в некоторых случаях коронавирус приобретает способность поражать моноциты и макрофаги, и тогда инфекционный процесс формируется совершенно по другому пути, приводящему к развитию ИПК. После попадания в макрофаги, вирус разносится по всему организму. Пораженные макрофаги скапливаются под серозной оболочкой стенок кровеносных сосудов, вызывая системный васкулит, что приводит к повышению проницаемости сосудов и скоплению выступающей жидкости (выпота) в полостях тела (инфузионная форма ИПК). В случае незначительного поражения кровеносных сосудов паренхиматозных органов (печени, селезенки, легких, брыжеечных лимфатических узлов, стенок кишечника, поджелудочной железы, увеального глазного тракта) происходит образование отдельных пиогранулем (гранулематозная, сухая форма ИПК). Обе формы заболевания могут привести к смерти животного.

Изменение тропности коронавируса и поражение макрофагов — ключевого компонента в системе иммунной защиты организма — является основной причиной, обуславливающей тяжесть заболевания ИПК. Заражение макрофагов приводит к так называемому антителозависимому усилению инфекции. Поскольку макрофаги, содержащие вирус, не экспрессируют вирусные антигены на поверхности, то специфические антикоронавирусные антитела (АТ) не узнают инфицированные вирусом клетки. В то же время, сывороточные иммунные комплексы АТ с вирусом продолжают распространять вирус в организме и инфицировать макрофаги. Таким образом, наличие АТ не только не защищает, но и, напротив, способствует развитию ИПК.
Сложность серологической диагностики ИПК связана с тем, что большой процент здоровых кошек имеют АТ против коронавирусов: 20–60% среди домашних животных и до 100% у животных из приютов или питомников.
Установлено, что тяжесть клинических проявлений при ИПК имеет прямую корреляцию с величиной титра АТ к возбудителю заболевания. Другими словами, важен не сам факт наличия в сыворотке крови АТ к коронавирусу, а высокий уровень титров с тенденцией к быстрому нарастанию. Однако, необходимо помнить, что некоторые кошки, которые будут иметь клиническое проявление ИПК и не будут иметь АТ к возбудителю.

Широкое применение находит иммуноферментный анализ (ИФА) для определения точной величины титра АТ к вирусу ИПК.
Метод основан на взаимодействии иммобилизованного в лунках планшета антигена коронавируса со специфическими антителами из исследуемой пробы сыворотки и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченными пероксидазой хрена специфическими антителами к IgG кошки). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в хромоген-субстратном растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.

Для уточнения диагноза проводят повторные исследования клинического материала с интервалом 2–4 недели. Снижение или увеличение титра АТ напрямую связано с течением инфекционного процесса.
Диагностика инфекционного перитонита должна осуществляться комплексно, с учетом клинических признаков и результатов серологических и других видов исследований.

ПРЕАНАЛИТИКА

Для исследования методом тИФА (твердофазный иммуноферментный анализ) основным биоматериалом является сыворотка крови кошек. Образец стабилен 5 дней при температуре +2С…+8С. Гемолиз и хилез сыворотки (++++) может стать препятствием для проведения исследования.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ (РАСШИФРОВКА АНАЛИЗОВ)

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

РЕЗУЛЬТАТ ИССЛЕДОВАНИЯ

Многие здоровые кошки и кошки с другими болезнями имеют антитела к коронавирусу. Обнаружение только антител к коронавирусу НЕ является диагностическим критерием ИПК. Диагноз Инфекционный перитонит кошек ставится комплексно.

Тест количественный. Результат выдается: «отрицательно» при не обнаружении АТ; при обнаружении АТ результат представлен полученным титром.

Отрицательно:

Антитела в исследуемом образце (сыворотка крови) не обнаружены.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно, так как в редких случаях антитела могут не обнаруживаться

тест-системами

Титры коронавируса у кошек

Титр антител 1:200 или 1:400:

Результат свидетельствует об обнаружении антител в исследуемом. Данный титр следует считать фоновым, свидетельствующем о контакте кошки с энтеральным штаммом коронавируса.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно.

Титр антител 1:800 или 1:1600:

Результат свидетельствует об обнаружении антител в исследуемом образце. Данный титр характеризует инфицирование кошки коронавирусной инфекцией (энтеральная форма или ИПК). Целесообразно провести повторное исследование через 2–4 недели. Нарастание титра антител за этот период в 4 и более раз, свидетельствует о развитии инфекционного процесса.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно.

Титр антител 1:3200 и выше:

Результат 1:3200 и выше свидетельствует об обнаружении антител в исследуемом образце (сыворотка крови). Данный титр позволяет предполагать ИПК при соответствующей клинической картине. При отсутствии клинической картины, целесообразно провести повторное исследование через 2–4 недели. Нарастание титра антител за этот период в 4 и более раз, свидетельствует о развитии инфекционного процесса.
Диагноз ИПК (инфекционный перитонит кошек) ставится комплексно. На основании только данного исследования подтвердить или опровергнуть ИПК невозможно.

Источник

Вирус иммунодефицита кошек (FIV)

Вирус иммунодефицита кошек (Feline Immunodeficiency Virus, FIV) — это оболочечный РНК-содержащий вирус, принадлежащий роду Lentivirus семейства Retroviridae. Вирус поражает домашних и диких кошек повсеместно. Как и вирус иммунодефицита человека, FIV вызывает хроническую персистирующую инфекцию, которая у некоторых кошек становится причиной иммунодефицита.

FIV, как и другие ретровирусы, неустойчив к действию факторов внешней среды (выживает вне организма хозяина в течение нескольких минут) и быстро инактивируется дезинфектантами. FIV в. высокой концентрации содержится в слюне, основным путем передачи инфекции являются укусы больных животных. Имеются сведения о трансплацентарной передаче, передаче при родах, а также с молоком. В экспериментальных условиях эти пути передачи не являются значимыми в случае спонтанной инфекции, а у котят, инфицированных таким образом, может не происходить развития болезни. Данных о передаче инфекции половым путем нет, но FIV обнаруживается в сперме. Возможна передача вируса при переливании крови от инфицированного животного.

Средний возраст животных, в котором чаще всего диагностируется инфекция, составляет от шести до восьми лет (от 80 до 90% кошек). Коты бывают серопозитивными в 4,7 раза чаще, чем кошки. Содержание животных в помещении является фактором, снижающим вероятность передачи, но не исключает ее полностью.

Основной мишенью для FIV являются CD4+ T-клетки. Однако вирус также поражает CD8+ T-клетки, B-клетки, макрофаги, дендритные клетки, клетки микроглии и астроциты. Влияние вируса на иммунную систему комплексное, до конца не изучено и включает как иммуносупрессию, так и активацию иммунитета.

Существуют три фазы болезни: острая (первичная), субклиническая и терминальная, хотя у спонтанно инфицированных кошек могут наблюдаться не все фазы. После инокуляции происходит репликация вируса в лимфоидной ткани. Через две недели после инфицирования отмечается виремия с высокой концентрацией вируса. Пиковые значения фиксируются через 8–12 недель после инфицирования. При этом наблюдается снижение концентрации CD4+ и CD8+ T-клеток в периферической крови. Для некоторых кошек в острой фазе болезни характерны летаргия, лихорадка, анорексия, диарея, стоматит и/или лимфаденопатия.

В субклинической фазе болезни происходит восстановление уровня CD4+ T-клеток, а концентрация вируса в плазме крови снижается до очень низкого уровня. Субклиническая инфекция у кошек может сохраняться в течение нескольких лет и даже на протяжении всей жизни. Эта фаза болезни не аналогична латентной инфекции, поскольку размножение вируса происходит в незначительном объеме. Наблюдается снижение показателя соотношения CD4+ : CD8+ T-клеток; у некоторых кошек отмечается гиперглобулинемия, вызванная гиперактивацией B-клеток. Скорость прогрессирования субклинической фазы определяется такими факторами, как штамм вируса, наличие коинфекций другими патогенами, функциональным состоянием иммунной системы хозяина. У некоторых животных данные изменения в итоге приводят к развитию терминальной фазы заболевания, которая характеризуется клиническими симптомами оппортунистических инфекций, неоплазией, миелосупрессией и неврологическими симптомами. Эта фаза болезни чаще всего диагностируется у спонтанно инфицированных кошек. Однако у многих инфицированных животных никогда не происходит развития клинических симптомов даже при низком уровне CD4+ T-клеток. Терминальная фаза инфекции FIV обычно сопровождается умеренным или тяжелым периодонтитом, лимфоплазмоцитарным стоматитом, гингивитом или одонтокластическими резорбтивными поражениями, которые могут быть вызваны опортунистическими бактериальными или вирусными инфекциями.

У многих кошек инфекция FIV диагностируется при проведении скрининга. Скрининг осуществляется с использованием методов, позволяющих обнаружить антитела к FIV, ввиду их доступности, чувствительности и быстроте проведения анализа.

При получении положительных результатов роль FIV в. развитии тех или иных симптомов может быть неочевидной. Однако вирус может быть причиной лимфомы, тяжелого стоматита, инфекций, вызванных другими патогенами (например, микоплазмами).

Для диагностики FIV доступны серологические методы исследования, направленные на обнаружение антител к вирусу иммунодефицита (иммунохроматографический анализ ‒ ИХА, Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ‒ ELISA). Также используется и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для выявления FIV-ассоциированных заболеваний FIV-инфицированным кошкам рекомендуется проводить дополнительные обследования (общий и биохимический анализ крови, анализ мочи и фекалий, тестирование на FeLV, ПЦР для исключения гемотропных микоплазм).

Для диагностики инфекции FIV был разработан ряд тест-систем ПЦР (в реальном времени с обратной транскрипцией), с помощью которых обнаруживаются вирусная РНК, провирусная ДНК или РНК и провирусная ДНК в образцах периферической крови. Наиболее широкое применение нашла ПЦР, выявляющая провирусную ДНК в режиме реального времени. В сравнении с серологическими методами исследования чувствительность ПЦР может быть ниже (< 80%) ввиду очень низкой вирусной нагрузки, а также из-за невозможности обнаружения вирусов некоторых штаммов, что связано с вариабельностью вирусного генома. Учитывая вышесказанное, для диагностики FIV результат ПЦР-исследования (отрицательный или положительный) необходимо сопоставлять с результатами серологических исследований (ELISA, ИХА), особенно у клинически здоровых животных. У серонегативных кошек с положительным результатом исследования методом ПЦР может иметь место терминальная фаза болезни при невозможности выработки антител.

Преаналитика

Для исследования основным биоматериалом является сыворотка крови. Рекомендовано соблюдение голодной диеты в течение минимум 6 часов. Образец стабилен 5 суток при температуре +2С…+8С.

Интерпретация

У кошек с положительным результатом исследования методом ПЦР на наличие провирусной ДНК и отрицательным результатом на наличие растворимого антигена имеет место регрессирующая инфекция. Такие кошки не являются источником инфекции, однако возобновление выделения вируса может наблюдаться у них после стресса или иммуносупрессии, передача вируса возможна при переливании крови от таких животных. У кошек с регрессирующей инфекцией провирусная ДНК обычно присутствует в гораздо меньшей концентрации, чем у кошек с прогрессирующей формой. Использование для исследования образцов костного мозга вместо образцов цельной крови позволяет повысить чувствительность обнаружения провирусной ДНК.

Интерпретация результатов исследования методом ПЦР должна проводиться с осторожностью. Ретровирусы характеризуются высокой интенсивностью мутаций, наличие вариаций последовательностей может привести к получению ложноотрицательных результатов. Ввиду того, что в вакцине против FeLV используется инактивированный или рекомбинантный вирус, получение ложноположительных результатов у вакцинированных животных невозможно.

Результат исследования

Тест качественный. Результат выдается в терминах «Антитела к вирусу иммунодефицита (FIV) обнаружены», «Антитела к вирусу иммунодефицита (FIV) не обнаружены».

Вирусная лейкемия кошек (FeLV)

Описание

Вирусная лейкемия кошек вызывается FeLV (Feline Leukemia Virus) — оболочечным РНК-содержащим вирусом рода Gammaretrovirus, принадлежащим семейству Retroviridae. Инфекция FeLV является одной из ведущих причин смерти кошек, вызывая иммуносупрессию, патологии костного мозга и развитие опухолей гематопоэтической ткани.

Инфекция FeLV прогрессирует быстрее, чем FIV, и является более патогенной, поэтому кошки с прогрессирующими инфекциями обычно погибают вследствие осложнений. В отличие от FIV, у многих кошек на ранней стадии инфекции FeLV наблюдается регресс до начальной стадии латентного вирусоносительства («регрессирующая инфекция»).
Передача FeLV-A происходит преимущественно при контакте со слюной больного животного, например, при вылизывании, взаимном груминге и совместном использовании мисок для корма и воды. Также возможна передача при укусах (в том числе блошиных), переливании крови от больных животных, с молоком.

Вирус неустойчив к действию факторов внешней среды и быстро инактивируется дезинфектантами, мылом и при высушивании. Общая распространенность инфекции FeLV снизилась за последнее время благодаря широкому внедрению в практику специальных методов исследования и вакцинации. Риск развития инфекции повышен у животных, имеющих доступ на улицу, контактирующих с другими кошками, интактных котов, отличающихся агрессивностью, а также кошек с коинфекцией FIV.

Болезнь чаще отмечается у взрослых кошек, чем у молодых животных в возрасте до шести месяцев. Средний возраст инфицированных животных составляет три года, что меньше, чем для FIV.

Варианты исхода инфекции FeLV могут быть разнообразными и зависят от штамма и дозы вируса, путей передачи инфекции, факторов, влияющих на функцию иммунной системы хозяина (возраста, генетики, наличия коинфекций, стресса, применения иммуносупрессивных препаратов).

Вирус проникает в организм ороназальным путем, репликация происходит в лимфоидной ткани ротовой полости, поражая моноциты и лимфоциты. Затем инфекционный агент попадает в циркуляторное русло. В этот период у некоторых кошек могут развиваться симптомы системной патологии, такие как лихорадка, летаргия и/или лимфаденопатия. Небольшое число пораженных лимфоцитов проникает в костный мозг, где вирус быстро инфицирует делящиеся клетки-предшественницы гемопоэза, а затем — лимфоидные и эпителиальные клетки различных органов. Поражение костного мозга считается критическим этапом патогенеза инфекции FeLV. После инфицирования эпителиальных клеток слюнных желез вирус в больших количествах выводится со слюной; небольшие количества вируса могут выводиться с мочой и фекалиями.

У некоторых кошек репликация вируса подавляется иммунной системой в течение нескольких недель после инфицирования, затем происходит поражение костного мозга. У таких животных развивается регрессирующая инфекция, при которой провирусная ДНК обнаруживается в геноме клеток хозяина, но размножения и выделения вируса не происходит. Развитие регрессирующей инфекции возможно после периода виремии, также допустимо отсутствие вирусемии. Регрессирующая инфекция может персистировать в течение всей жизни животного и активироваться при иммуносупресии, например, в период беременности или при использовании иммуносупрессивных препаратов. Впоследствии у некоторых кошек с регрессирующей инфекцией могут развиться FeLV-негативные новообразования. При абортивной инфекции виремия не наблюдается, вирус не обнаруживается лабораторными методами. Инфицирование кошек абортивной инфекцией происходит небольшими дозами вируса, поэтому, несмотря на отсутствие виремии, у них отмечается наличие антител к вирусу. Развитие прогрессирующей инфекции у животных происходит после включения в патологический процесс костного мозга, а интенсивность разрушения клеток инфекционным агентом ограничивает способность иммунной системы хозяина подавлять репликацию вируса.

Инфекция FeLV часто диагностируется во время скрининговых обследований клинически здоровых кошек. Скрининг проводится с использованием ИФА или иммунохроматографических методов обнаружения антигена FeLV в. сыворотке крови ввиду их высокой чувствительности, специфичности, быстроте выполнения и доступности.

Несмотря на то, что у многих кошек, у которых обнаруживают антиген, клинические признаки отсутствуют, необходимо проведение клинического и биохимического исследований крови, исследования мочи для выявления нарушений, которые могут указывать на наличие патологий, вызванных инфекцией FeLV. Слабо выраженные изменения состава крови, такие как эритроцитарный макроцитоз или моноцитопения, могут иметь место при отсутствии выраженных клинических симптомов и указывать на неблагоприятный исход болезни в долгосрочной перспективе.

К дополнительным тестам, рекомендованным к проведению у кошек с анемией, относятся определение количества ретикулоцитов, проба Кумбса и ПЦР на наличие гемоплазм. Для животных с панцитопенией и персистирующими нерегенеративными анемиями рекомендовано исследование аспирата костного мозга и кор-биоптата.

Существует ряд тест-систем ПЦР для обнаружения нуклеиновой кислоты FeLV. В настоящее время основными показаниями к проведению ПЦР являются: 1) скрининг потенциальных доноров крови наряду с тестированием на наличие антигена; 2) выявление регрессирующей инфекции при подозрении на наличие FeLV как причины неоплазии при получении отрицательных результатов тестирования на наличие антигена.

С помощью ПЦР (в реальном времени с обратной транскрипцией) возможно обнаружение РНК FeLV или провирусной ДНК. При проведении скрининга или диагностики FeLV необходимо избегать применения ПЦР без тестирования на наличие антигена. Врач-клиницист должен знать, используется обнаружение провирусной ДНК, вирусной РНК или обеих нуклеиновых кислот ввиду того, что клиническая значимость положительного результата на наличие вирусной РНК отличается от таковой для провирусной ДНК (которая позволяет предположить наличие непродуктивной инфекции у кошек с отрицательными результатами теста на антиген). После инфицирования возможно получение положительных результатов исследования методом ПЦР в реальном времени в течение нескольких недель до того, как могут быть получены положительные результаты теста на антиген и выделение вируса. Таким образом, ПЦР является более чувствительным методом, чем тест на наличие растворимого антигена. Высокая концентрация вирусной РНК в крови и слюне обычно наблюдается при прогрессирующей инфекции, а низкая — при регрессирующей.

Для определения провирусной ДНК методом ПЦР используются образцы крови, лейкотромбоцитарного слоя, костного мозга или иных тканей кошек, негативных на антиген FeLV.

Преаналитика

Для исследования методом тИФА (твердофазный иммуноферментный анализ) основным биоматериалом является сыворотка крови. Рекомендовано соблюдение голодной диеты в течение минимум 6 часов. Образец стабилен 5 суток при температуре +2С…+8С.

Интерпретация

Результат исследования

Тест качественный. Результат выдается в терминах «Антиген вируса лейкемии (FeLV) обнаружен», «Антиген вируса лейкемии (FeLV) не обнаружен».

Источник