Анализ крови на совместимость донора и реципиента

Определение резус-принадлежности с помощью универсальной антирезусной сыворотки

Реакция агглютинации на плоскости

Определение резус-принадлежности с помощью цоликлона анти-D супер

Началом цоликлона анти-D супер являются монокло-нальные человеческие антитела анти-D.

Цоликлон анти-D супер может быть использован для вы­явления D антигена в любых вариантах прямой реакцией агг­лютинации: на плоскости, в пробирке, в микроплате.

Можно определить в нативной крови, стабилизированной консервантом, в крови, взятой из пальца.

На пластинку (чашку Петри) нанести большую каплю (0,1мл) цоликлона анти-D, а рядом поместить маленькую кап­лю исследуемой крови и смешать. Реакция агглютинации на­чинает развиваться через 10 — 15 с. Четко выраженная агглю­тинация наступает через 30-60 с. Результаты реакции можно оценивать через 3 мин. Пластинку покачивают 20 — 30 с, что позволяет развиться более полной крупнолепестковой агглю­тинации.

Капля антирезусной универсальной сыворотки наносится на дно пробирки, добавляется 1 капля исследуемой крови или эритроцитов. Пробирку встряхивают и реакция агглютинации наступает через минуту, но оценку проводят через 3 мин. Для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и пе­ремешивают путем встряхивания 1-2 раза. Наличие агглюти­нации указывает на резус-положительную кровь, отсутствие -на резус-отрицательную.

Определив группу крови и резус-принадлежность, прово­дят пробы на индивидуальную совместимость и резус-совместимость, биологическую пробу. Затем начинают пере­ливание.

1. Проба на индивидуальную совместимость по группам крови.

Берут одну — две капли сыворотки крови больного, полу­ченной центрифугированием или отстаиванием. Добавляют меньшую каплю крови донора. Кровь донора перемешивают с сывороткой больного и покачивают в течение 5 мин. Отсут­ствие агглютинации свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента. Появление агглютинации указывает на их несовместимость.

2. Проба на резус-совместимость с использованием 33% -ного полиглюкина в пробирке без подогрева.

На дно пробирки вносят 2 капли сыворотки больного, за­тем 1 каплю донорской крови и каплю 33%-ного полиглюкина. Содержимое пробирки перемешивают путем встряхивания, затем пробирку наклоняют, чтобы содержимое растекалось по стенкам. Через 5 мин в пробирку добавляют 2 — 3 мл физрас­твора и снова перемешивают. Оценка — наличие агглютинации указывает на то, что кровь донора несовместима с кровью больного; если агглютинации нет — кровь совместима по ре­зус-фактору.

3. Дополнительный метод определения резус-совместимости.

На чашку Петри наносят 2 капли сыворотки реципиента. К сыворотке добавляют каплю крови донора и тщательно пе­ремешивают. Чашку ставят на водяную баню при температуре 45-47° на 10 мин. Если агглютинация наступает, то кровь несо­вместима по резус-фактору.

4. Биологическая проба.

Струйно переливают 10 — 15 мл крови (эритроцитарной массы, ее взвеси или плазмы). Затем в течение 3 мин наблю­дают за состоянием больного. При отсутствии клинических проявлений несовместимости (учащение пульса, одышка, за­трудненное дыхание, гиперемия лица и т.д.) вводят еще 10-15 мл крови и наблюдают 3 мин. Эту процедуру проводят 3 раза. Отсутствие реакции после трехкратной пробы является осно­ванием для продолжения трансфузии. В случае возникновения реакции — озноб, боли в пояснице, учащение пульса, бледность или цианоз — переливание следует немедленно прекратить.

Таким образом, для переливания крови необходимо:

1) определить у больного и донора группу крови, резус-фактор;

2) провести пробы на индивидуальную, групповую со­вместимость, резус-совместимость, биологическую совмести­мость.

Проба на индивидуальную совместимость позволяет убедиться в том, что у реципиента нет антител, направленных против эритроцитов донора и таким образом предотвратить трансфузию эритроцитов, несовместимых с кровью больного.

Проба на совместимость, выполняемая на плоскости при комнатной температуре, имеет целью выявить у реципиента полные групповые агглютинины системы АВ0, MNSs, Lewis и др. Проба на совместимость с применением 10% желатина, 33% полиглюкина, непрямая проба Кумбса предназначена для выявления у реципиента неполных групповых антител. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином предусматривает выявление и тех и других антител, в том числе групповых гемолизинов.

Наиболее чувствительной и рекомендуемой является двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином, затем комбинация двух проб — пробы на плоскости при комнатной температуре и непрямой пробы Кумбса. Вместо непрямой пробы Кумбса может быть применена реакция конглютинации с 10% желатином или реакция конглютинации с 33% полиглюкином. Последняя проба уступает по чувствительности первым двум, однако занимает меньше времени.

Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином

Первый этап. В маркированную пробирку вносят 2 объема (200 мкл) сыворотки реципиента и 1 объем (100 мкл) 2% взвеси трижды отмытых эритроцитов донора, суспендированных в физиологической растворе или LISS (раствор низкой ионной силы). Содержимое пробирки перемешивают и центрифугируют при 2500 об/мин (около 600g) в течение 30 с. Затем оценивают наличие гемолиза в надосадочной жидкости, после чего осадок эритроцитов ресуспендируют, слегка постукивая кончиком пальца по дну пробирки, и определяют наличие агглютинации эритроцитов. При отсутствии выраженного гемолиза и/или агглютинации переходят к выполнению второго этапа пробы с использованием антиглобулиновой сыворотки.

Второй этап. Пробирку помещают в термостат при температуре 37°С на 30 мин, после чего снова оценивают наличие гемолиза и/или агглютинации эритроцитов. Затем эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором, добавляют 2 объема (200 мкл) антиглобулиновой сыворотки для пробы Кумбса и перемешивают. Пробирки центрифугируют в течение 30 с, осадок эритроцитов ресуспензируют и оценивают наличие агглютинации.

Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Выраженный гемолиз и/или агглютинация эритроцитов указывает на присутствие в сыворотке реципиента групповых гемолизинов и/или агглютининов, направленных против эритроцитов донора, и свидетельствует о несовместимости крови реципиента и донора. Отсутствие гемолиза и/или агглютинации эритроцитов свидетельствует о совместимости крови реципиента и донора.

Проба на совместимость на плоскости

при комнатной температуре

На пластинку наносят 2 — 3 капли сыворотки реципиента и добавляют небольшое количество эритроцитов с таким расчетом, чтобы соотношение эритроцитов и сыворотки было 1:10 (для удобства рекомендуется сначала выпустить через иглу несколько капель эритроцитов из контейнера на край пластинки, затем оттуда стеклянной палочкой перенести маленькую каплю эритроцитов в сыворотку). Далее эритроциты перемешивают с сывороткой, пластинку слегка покачивают в течение 5 мин, наблюдая за ходом реакции. По истечении указанного времени в реагирующую смесь можно добавить 1 — 2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов.

Учет результатов. Наличие агглютинации эритроцитов означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита. Если по истечении 5 мин агглютинация эритроцитов отсутствует, то это означает, что кровь донора совместима с кровью реципиента по групповым агглютиногенам.

Непрямая проба Кумбса

В пробирку вносят одну каплю (0,02 мл) осадка трижды отмытых эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, и добавляют 4 капли (0,2 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают на 45 мин в термостат при температуре +37°С. По истечении указанного времени эритроциты вновь трижды отмывают и готовят 5% взвесь в физиологическом растворе. Далее 1 каплю (0,05 мл) взвеси эритроцитов на фарфоровую пластинку, добавляют 1 каплю (0,05 мл) антиглобулиновой сыворотки и перемешивают стеклянной палочкой. Пластинку периодически покачивают в течение 5 мин.

Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

Проба на совместимость с применением 10% желатина

В пробирку вносят 1 небольшую каплю (0,02 — 0,03) мл эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 мин или термостат на 30 мин при температуре +46 — 48°С. По истечении указанного времени в пробирки добавляют 5 — 8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 1 — 2-кратного переворачивания пробирок.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

Проба на совместимость с применением 33% полиглюкина

В пробирку вносят 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента 1 каплю (0,05) мл эритроцитов донора и добавляют 1 каплю (0,1 мл) 33% полиглюкина. Пробирку наклоняют до горизонтального положения, слегка потряхивая, затем медленно вращают таким образом, чтобы содержимое ее растеклось по стенкам тонким слоем. Такое растекание содержимого пробирки по стенкам делает реакцию более выраженной. Контакт эритроцитов с сывороткой больного при вращении пробирки следует продолжать не менее 3 мин. Через 3 — 5 мин в пробирку добавляют 2 — 3 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 2 — 3-х кратного перевертывания пробирки, не взбалтывая.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

ДЕВЯТИКАПЕЛЬНАЯ ПРОБА, И ЕЕ ЗНАЧЕНИЕ

Девятикапельная проба предложенная П.М. Максимовым в настоящее время не включена в Приказ МЗ РФ №363 от 25 ноября 2002 г. Тем не менее она имеет определенные достоинства и удобства. На одной плоскости одним лицом одновременно проверяется группа крови донора и реципиента, их индивидуальная совместимость и агглютинирующая способность сыворотки реципиента.

Проба выполняется на одной плоскости, разделенной на девять полей (таблица 6).

Девятикапельная проба. Таблица 6

В первых трех (1-3) квадратах определяется группа крови донора двумя сериями стандартных сывороток. Во вторых трех (4-6) квадратах определяется группа крови реципиента двумя сериями стандартных сывороток. В 7-8 квадратах проводится проба на индивидуальную совместимость (сыворотка крови реципиента и эритроциты донора). В 8 квадрат добавляется физиологический раствор с целью исключения неспецифической агглютинации. В 9 квадрате сыворотка реципиента смешивается с заведомо несовместимой кровью. Это позволяет оценить агглютинирующую способность сыворотки реципиента.

Оценивается проба по трем параметрам:

1. группа крови донора и реципиента должны совпадать;

2. в 7 и 8 каплях не должно быть агглютинации;

3. в 9 капле должна быть агглютинация (исключение реципиент AB (IV)).

Проба сохраняется до конца переливания, как свидетельство правильно выполненной и достоверной изосерологической реакции.