Анализ крови на сифилис методом рпга

Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических («нетрепонемных»), так и специфических («трепонемных») антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифические («нетрепонемные») и специфические («трепонемные»). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к «трепонемным», то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, «нетрепонемного» исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.

Чувствительность РПГА и других «трепонемных» тестов превосходит чувствительность неспецифических («нетрепонемных») тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять «трепонемные» тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой «трепонемный» тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.

При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.

Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5 % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза «сифилис» необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Для чего используется исследование?

Чтобы подтвердить диагноз «сифилис» при положительном результате неспецифического скринингового теста;
для скрининга сифилиса;
для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
для исключения сифилиса у донора крови.

Когда назначается исследование?

При обследовании:

пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием «сухого» рубца (третичный сифилис);
лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
донора крови;
при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.

Источник

Исследование крови на сифилис РПГА методом проводится пациентам для подтверждения инфицирования бледными трепонемами и определения стадии болезни. Прямая реакция пассивной гемагглютинации является одним из самых достоверных методик и относится к специфическим тестам. Чувствительность РПГА достигает 98-100% при соблюдении определенных условий. При выдаче направления на анализ врач должен уведомить пациента о необходимости соблюдения правил. Невыполнение рекомендаций может привести к получению ложных результатов.

Общая характеристика РПГА

РПГА-тест связан с феноменом агглютинации эритроцитов, поверхность которых адсорбирует антиген бледной трепонемы в момент добавления к нему крови сифилитического больного. Организм начинает синтезировать антитела класса М спустя 14 суток после внедрения спирохеты. Иммуноглобулины класса G возникают в крови инфицированного через месяц. В некоторых случаях время образования антител удлиняется до 45 дней, поэтому РПГА-метод при первоначальной форме венерического заболевания менее чувствителен по сравнению с исследованием, осуществляемом на втором и третьем этапах сифилиса.

Тест, в котором применяется гемагглютинация, характеризуется высокой специфичностью (до 98%), что позволяет применять пассивный метод для подтверждения диагноза после использования неспецифического анализа. Степень чувствительности РПГА во вторичной, третичной фазе, а также при скрытой форме сифилиса достигает 100%. Достоверность этого и других трепонемных методик гораздо выше по сравнению с тестом, основанном на микрореакции преципиации, поэтому в настоящее время в лабораториях чаще применяются специфические способы при скрининговых исследованиях.

Часто результаты РПГА-метода остаются положительными даже после завершения терапии инфекционного заболевания. Лишь при проведении лечения на первоначальной стадии анализ становится отрицательным. Тест-система не позволяет дифференцировать раннюю и позднюю форму сифилиса, поскольку положительный результат сохраняется на всю жизнь. Также с помощью РПГА невозможно оценивать степень эффективности терапии.

Исследование с использованием реакции пассивной гемагглютинации рекомендуется пройти не только при наличии признаков инфицирования бледными трепонемами, но и при подготовке к беременности.

Выявление сифилиса на ранней стадии позволяет избежать развития врожденных дефектов у плода и раннего родовспоможения. Анализ может назначаться во время подготовки пациента к плановой операции, а также при желании стать донорами крови.

Методика проведения

В условиях лаборатории к реагентам РПГА специалисты добавляют сыворотку инфицированного человека, что приводит к агглютинации эритроцитов и выпадению их в осадок. Степень склеивания связана с концентрацией белковых образований в крови, поэтому серодиагностика, проводимая этим методом, выявляет не только наличие антител, но и определяет их число.

Результаты исследования представляются в виде титров. При получении положительного анализа можно говорить о наличии в организме пациента бледной трепонемы. В некоторых случаях возможно получение ложноположительной реакции. Значительное завышение показателей означает, что у больного вторичный или скрытый сифилис.

Как подготовиться к сдаче анализа

Для того чтобы тест-система показала верные результаты, пациенту необходимо тщательно подготовится к исследованию:

Последний прием пищи должен быть не позже 20 часов вечера. Накануне сдачи крови желательно употреблять продукты с минимальным количеством жиров. Тяжелая пища может способствовать получению ложноположительного или ложноотрицательного результатов. В этом случае пациенту придется пересдавать кровь на повторное исследование.
Забор крови проводится утром, поскольку многим пациентам сложно обойтись без пищи длительное время.
Перед посещением лаборатории запрещается курить, пить кофе и чаи. Вещество, содержащееся в табачном дыме и попавшее в кровь, может привести к получению ложноположительного или отрицательного результатов.
Врачи не рекомендуют непосредственно перед сдачей анализов физически перегружать организм. Запрещено заниматься силовыми тренировками, избегать стрессовых ситуаций.
За несколько дней до процедуры забора крови необходимо полностью отказаться от алкогольных напитков. Спирт может привести к искажению результатов и получению неверных значений.
Перед сдачей анализов допускается выпить небольшое количество чистой питьевой воды без содержания газов.

Как сдают материал на исследование?

Анализ на сифилис РПГА может проводиться с применением венозной, капиллярной крови, а также спинномозговой жидкости (ликвора), забираемой при подозрении на поражение бледными трепонемами нервной системы (нейросифилис).

Во многих лабораториях для проведения теста используют венозную кровь.

Она набирается в чистые сухие пробирки или вакутайнеры без использования веществ-антикоагулянтов. Биоматериал помещается в термостат на час (T=37), после чего переносится на 60-90 минут в холодное место. Центрифугирование получившегося сгустка совершается в течение ¼ часа при 1000 оборотах в минуту.

После расслаивания образца жидкая часть быстро забирается на исследование, поскольку может наступить распад антител. При необходимости плазма может храниться 5 дней в холодном месте (2-8С). Сильная заморозка допускается только однократно. Хранение такого материала возможно не более 1,5 месяцев. Исследование ликвора проводится в краткие сроки. Перед анализом спинномозговая жидкость не подготавливается.

В стандартных тест-системах (Эколаб) применяются следующие наборы:

пробирка с эритроцитами с содержащимися на поверхностной части антигенами патогенного возбудителя;
флакон, в котором находятся чистые кровяные тельца;
емкость с буферным раствором для разведения крови больного;
сыворотка инфицированного человека, применяемая для контроля;
сыворотка здорового пациента для сравнительного анализа;
пластмассовый планшет, имеющий нумерованные лунки для перемешивания образцов и определения результата.

Набор для проведения исследования содержит определенное число реактивов.

Расшифровка результатов — нормы и отклонения

Сифилитический РПГА-метод предоставляет два вида показателей:

Качественный. Отвечает за наличие в сыворотке белковых телец, появление которых вызвано внедрением в организм патогенного возбудителя.
Количественный. Помогает оценивать степень интенсивности продукции антител и определять характер активности бледной трепонемы.

В первую очередь лаборанты выявляют качественный результат. При обнаружении иммуноглобулинов устанавливается их число.

Анализ может показывать:

4+ – результаты положительные;
3+ – положительные;
2+ – слабоположительные;
1+ – результат сомнителен;
– – инфицирования нет.

При получении сомнительного результата рекомендуется провести повторное исследование через 14 дней после первого анализа.

Для первичной формы сифилиса характерны сниженные показатели (менее 1:320). При вторичном венерическом заболевании выявляются повышенные значения титров (более 1:320). При скрытом течении инфекции показатели также занижены.

Отрицательный РПГА-тест означает, что пациент не инфицирован бледными трепонемами либо заболевание находится в инкубационном периоде, который составляет 7-14 дней. В некоторых случаях такой результат получается из-за ошибки лаборанта при взятии биологического материала для проведения исследования.

Причиной получения ложноположительного результата становятся:

Беременность.
Аутоиммунные процессы.
Гепатиты.
Бактериальные эндокардиты.
Состояния после вакцинаций.

Исследования с применением РПГА-метода не позволяют проводить дифференциацию сифилиса и других трепонематозов, ранней и поздней формы венерического заболевания. Результаты необходимо оценивать в совокупности с другими показателями, полученными с использованием лабораторных, инструментальных методов.

Цена вопроса

Стоимость исследования крови с применением реакции пассивной гемагглютинации составляет в среднем 5,6$. При этом в частных лабораторных центрах за взятия венозной крови для проведения анализа берется 2,8$. В государственных клиниках исследование проводится бесплатно по направлению врача-венеролога.

Где сдать анализ

Услуги по осуществлению анализов с помощью РПГА-тестов предлагают разные диагностические центры.

В лабораторной службе Хеликс результаты можно получить через 2 дня после сдачи биологического материала. Инвитро предлагает свои услуги по исследованию крови на сифилис методом РПГА. Срок исполнения в этом центре — 1 рабочий день. В медицинской лаборатории Гемотест также можно сдать кровь на анализ с применением РПГА. Результаты выдаются через сутки после забора биологического материала.

Метод РПГА является высокоточным и позволяет определить наличие трепонемной инфекции на любом этапе венерического заболевания. Анализы назначаются для подтверждения заражения пациента, ранее обследованного с помощью неспецифических тестов.

Результаты могут быть ложными при определенных заболеваниях, связанных с аутоиммунными процессами, поражением печени, сердечной мышцы.

При получении сомнительного анализа врачи рекомендуют пройти повторное исследование через 2 недели.

Источник

Несмотря на то что РПГА анализ крови применяется уже более 10 лет, это тестирование до сих пор не утрачивает актуальности. При помощи процедуры можно выявить разные патологические процессы, но чаще направление на анализ выдается при подозрении на сифилис и инфекционные заболевания органов желудочно-кишечного тракта. При выдаче направления на исследование нужно разобраться в том, как сдавать кровь и насколько точным является тестирование.

Особенности анализа

Из 10 человек расшифровку анализа крови РПГА знают не более половины. Под этой аббревиатурой подразумевается реакция пассивной гемагглютинации. Методика применяется для выявления внутренних патологических процессов, но особенно она эффективна при подозрении на сифилис.

Это обусловлено тем, что тест точно определяет антитела бледной трепонемы – микроорганизма, провоцирующего развитие сифилиса. При попадании в здоровый организм этого возбудителя иммунная система начинает активно вырабатывать антитела против него. Если тестирование показало присутствие возбудителя, пациенту нужно незамедлительно сдать дополнительные анализы на сифилис.

Условно тестирование можно разделить на 2 типа:

специфическое;
неспецифическое.

Классификация варьируется от типа антител, которые были выявлены в сыворотке крови. Главное преимущество анализа крови на РПГА заключается в том, что при помощи него можно выявить заболевание, вне зависимости от того, на каком этапе оно находится.

Преимущества РПГА

Тест РПГА проводят во всем мире не только из-за высокой точности и достоверности, но и из-за следующих достоинств:

процедура отличается простотой. Все, что необходимо сделать пациенту, – сдать кровь;
отсутствие необходимости использования специального дорогостоящего оборудования;
быстрая расшифровка. Обычно результат оглашается уже через сутки после сдачи биоматериала.

Показания к тестированию

В целях профилактики медики рекомендуют сдавать кровь на РПГА каждый год. Абсолютными показаниями к проведению такого тестирования являются:

проявление симптомов сифилиса. Основные признаки этого заболевания – возникновение эрозий и язв на кожном покрове (в особенности в области половых органов), увеличение лимфоузлов, частичное поредение волосяного покрова;
появление симптомов алопеции разных видов (патологическое облысение);
незащищенный половой контакт с предполагаемым носителем болезни.

Диагностика сифилиса

Также тестирование в обязательном порядке назначается людям, которые хотят сдавать кровь как доноры. Кроме вышеперечисленных ситуаций, подобный анализ назначается при оформлении медкнижки и при определении человека в стационар. Также медик может выписать направление на РПГА анализ при подозрении на дифтерию, дизентерию или сальмонеллу.

Что показывает анализ

В большинстве случаев положительный результат РПГА указывает на сифилис врожденной или приобретенной формы. Также при помощи тестирования можно обнаружить следующие патологии:

вирус иммунодефицита человека;
гепатит;
возвратный брюшной тиф;
туберкулез легких;
дифтерия;
коклюш;
воспалительные поражения слизистых оболочек ротовой полости и гениталий;
формирование новообразований злокачественного происхождения;
мононуклеоз инфекционной природы;
диффузные поражения соединительных тканей;
венерические заболевания.

Чтобы тестирование показало достоверный результат, сдавать биоматериал нужно, соблюдая все врачебные рекомендации. В противном случае возбудитель может быть не обнаружен.

Многих интересует вопрос, почему при подозрении на сифилис назначается именно анализ РПГА. Популярность такого тестирования в диагностике этой опасной болезни обусловлена его достоверностью. Медики уверяют, что анализ показывает правильный результат в 99% случаев.

При отсутствии антител бледной трепонемы реакция агглютинации не произойдет, что говорит о том, что человек здоров.

Стоит учитывать, что чувствительность такого теста очень высока, поэтому обнаружить возбудитель сифилиса удастся даже на скрытых стадиях заболевания.

Сдачу образца на такое тестирование назначают и при подозрении на другие болезни, например, коклюш или иерсиниоз. Востребованность анализа обусловлена тем, что по сравнению с другими серологическими тестированиями он более чувствителен, что увеличивает вероятность получения достоверного результата.

Как проводится процедура

Для осуществления анализа подходит только венозная кровь. Чтобы тестирование показало точный результат, пациенту требуется подготовиться к нему и придерживаться следующих рекомендаций:

кровь сдают исключительно на голодный желудок, поэтому есть можно не позднее, чем за 10 часов до процедуры. Единственное, что допускается – выпить утром стакан воды;
за 3 часа до забора крови нельзя курить;
если пациенту назначен прием лекарственных средств на постоянной основе, об этом нужно оповестить врача, который будет проводить расшифровку анализа.

В большинстве случаев расшифровка результата занимает не более суток, но иногда длится до 4 дней. Срок может незначительно меняться в зависимости от лаборатории и типа используемого оборудования.

Расшифровка результата

Анализ проводится путем добавления к образцу специального реактива. При наличии в крови бледной трепонемы происходит реакция агглютинации, и эритроциты выпадают в осадок. По числу склеенных эритроцитов можно делать выводы о том, сколько антител присутствует в образце.

Результаты тестирования оцениваются по 4-балльной системе, по размеру сформировавшейся пленки. При появлении реакции агглютинации эритроциты остаются на поверхности лунки, образуя собой «зонтик». При отрицательном результате они опускаются вниз и скапливаются на дне в центре лунки.

Результат тестирования расшифровывается таким образом:

«-» – отрицательный результат. При нем красные кровяные тельца опускаются на дно, образуя компактный осадок;
«1+» – неоднозначная реакция. Эритроциты формируют неплотный осадок с нечеткими краями и просветом в середине;
«2+» – слабоположительная реакция. Внизу лунки появляется пленочка, образуя плотное кольцо с выраженным просветлением в центре;
«3+» – положительная реакция. Красные кровяные тельца почти целиком застилают лунку, при этом вокруг осадка образуется четкое кольцо;
«4+» – положительная реакция. При РПГА 4+ эритроциты формируют зонтик и равномерно застилают лунку.

Вот как могут выглядеть результаты теста РПГА

Положительный результат

Если тестирование дало положительную ответную реакцию, это говорит о присутствии в организме возбудителя болезни. В этом случае пациенту назначают дополнительные лабораторные и инструментальные анализы, отталкиваясь от которых можно будет подтвердить или опровергнуть наличие заболевания.

При положительном результате сдать анализ РПГА необходимо провести человеку, с которым инфицированный вступал в половой контакт. Стоит учитывать, что примерно в 5% случаев анализ РПГА дает ложноположительный результат. Чаще всего это связано с игнорированием правил подготовки.

Также ложноположительная реакция может проявиться в следующих случаях:

формирование онкологических новообразований;
гепатит разных форм;
ВИЧ.

В редких случаях ложноположительная реакция является признаком беременности. Отличительная особенность ложноположительного ответа – он сопровождается низким титром. Также стоит учитывать, что анализ может быть положительным, если пациент уже был болен сифилисом, но прошел успешное лечение.

Отрицательный результат

Отрицательная реакция РПГА говорит о том, что:

возбудитель сифилиса отсутствует в организме;
с момента инфицирования прошло менее 3-х недель. На столь раннем этапе иммунная система не начинает выработку антител;
неправильное проведение забора крови.

Если врач подозревал сифилис у пациента, но тестирование показало отрицательный результат. Через некоторое время рекомендуется сдать анализ повторно, чтобы убедиться в отсутствии патогенных микроорганизмов в сыворотке крови.

Насколько достоверен анализ

В ходе клинических исследований было выявлено, если забор крови осуществлялся должным образом и пациент соблюдал все правила по подготовке к процедуре, анализ не покажет ложный результат.

Если РПГА показало положительную реакцию, вероятность того, что человек является носителем сифилиса, составляет более 97%. Что касается ложноположительного ответа, то он может проявиться, если тестирование осуществлялось во время инфекционного заболевания или другого патологического состояния.

Заключение

Сегодня реакция пассивной агглютинации является преимущественной и по результативности превосходит все остальные тестирования. Несмотря на то что методика чаще всего применяется для обнаружения антител бледной трепонемы, при помощи нее можно выявить и другие заболевания инфекционного происхождения. Важно помнить, что результат тестирования зависит не только от методики проведения теста, но и от того, насколько правильно пациент подготовится к процедуре.

Источник