Анализ крови на резус принадлежности и антитела

Метод определения
магнитизация эритроцитов, метод гель-фильтрации с использованием моноклональных антител. Автоматические анализаторы QWALYS (Diagast), IH-1000 (Bio-Rad).

Исследуемый материал
Цельная кровь (с ЭДТА)

Тест предназначен для определения резус-принадлежности потенциальных реципиентов (обследование перед госпитализацией) и беременных или планирующих беременность женщин.

Резус (Rh) – одна из важнейших систем эритроцитарных антигенов (наряду с системой АВ0), клинически значимая не только для безопасного переливания крови, но и при ведении беременности (при оценке возможности возникновения резус-конфликта и риска развития гемолитической болезни плода и новорожденного).

Антиген RhD является наиболее иммуногенным* из антигенов системы резус, его наличие на поверхности эритроцитов обуславливает положительную резус-принадлежность. Наличие этого структурного белка мембраны эритроцитов является генетически наследуемым признаком. В составе антигена RhD выделяют структурные единицы – эпитопы (в настоящий момент определены 36 структурных единиц).

Резус-отрицательные пациенты развивают иммунный ответ, сопровождаемый выработкой антирезусных антител, при переливании им резус-положительной крови. Наличие анти-резус антител ведет к разрушению эритроцитов, несущих резус-антиген, и к тяжелым пост-гемотрансфузионным реакциям при повторных переливаниях резус-положительной крови резус-отрицательным реципиентам.

Аналогичный иммунный ответ может развивать резус-отрицательная женщина при беременности резус-положительным плодом. Несмотря на то, что обычно при беременности кровь плода не смешивается с кровью матери, в некоторых ситуациях (не первая по счету беременность, патологические состояния, связанные с изменением проницаемости плаценты, сенсибилизация после предшествующего переливания резус-положительной крови) иммунная система матери вырабатывает антитела к антигенам эритроцитов плода. Антитела разрушают резус-положительные эритроциты, что приводит к различным клиническим проявлениям (ранней потере плода, хроническому невынашиванию беременности) и к гемолитической болезни плода и новорожденных**.

У беременных женщин, имеющих резус-положительную принадлежность, проблем совместимости по резус-фактору с ребенком не возникает.

*Иммуногенность ‒ потенциальная способность антигена вызывать иммунный ответ (образование антител) у лиц, не имеющих этого антигена.

**Гемолитическая болезнь плода и новорожденных ‒ патологическое состояние плода или новорожденного, сопровождаемое гемолитической желтухой, анемией, нарушением рефлексов. Обусловлено иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам и связано с разрушением эритроцитов плода под действием антиэритроцитарных антител, поступающих через плаценту из крови матери в кровь ребенка. В большинстве случаев гемолитическая болезнь новорожденных обусловлена конфликтом по D-антигену. Но следует учесть, что возникновение данной патологии может быть обусловлено реакциями по АВ0-антигенам, а также несовместимостью по другим антигенам системы резус (С, Е, с, d, e) или М-, N-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам (см. тест №15RH Rh (C, E, c, e), Kell – фенотипирование).

Оценка резус-принадлежности при беременности или подготовке к беременности, а также контроль наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител, включая антитела к RhD-антигену (см. тест № 140 Аллоиммунные антитела), важны для правильного ведения беременности резус-отрицательных женщин. Риск развития гемолитической болезни плода и новорожденного при повторных беременностях можно предотвратить своевременным введением Rh-иммуноглобулина.

Наследование резус-фактора

Генотип индивида состоит из двух гаплотипов, полученных по наследству: один от отца, другой от матери. Каждый гаплотип может обуславливать наличие антигенной детерминаты (D) или ее отсутствие (d). Доминантным является наличие антигенной детерминанты, следовательно:

Генотип	Резус-принадлежность
DD	Rh-положительный
Dd	Rh-положительный
dd	Rh-отрицательный

Таким образом, у родителей с положительной резус-принадлежностью могут рождаться дети с отрицательной резус-принадлежностью:

В случае когда резус-принадлежность будущего ребенка требует определения, необходимо использовать генеалогический или генетический метод (см. тест №7207 Определение генотипа резус-фактора).

Проблемы в определении резус-принадлежности

Большая часть резус-положительных лиц экспрессируют достаточное количество антигенных детерминант, содержащих все эпитопы. В этом случае при определении резус-принадлежности, вне зависимости от используемых тест-систем, проблем не возникает, и резус-принадлежность четко определяется как положительная. Однако у ряда лиц (не более 1% в европейской популяции) при определении резус-принадлежности могут возникать сложности по следующим причинам:

Количество антигенных детерминант снижено в 3-10 раз, но структурно они не изменены. Такой вариант антигена называется слабым, D weak. Степень снижения количества детерминант разная, поэтому реакция агглютинации у таких пациентов может проходить с разной степенью выраженности.
Количество антигенных детерминант может быть обычным, но они структурно изменены. На детерминантах антигена D отсутствуют некоторые эпитопы (одновременно может отсутствовать до 5 эпитопов). Такой вариант антигена называется неполным, вариантным или частичным, D partial. У человека выявлено более 10 таких форм антигена D. Наиболее часто встречаемым является вариант антигена DVI (встречаемость не более 0,1% в европейской популяции).
Вариант резус-антигена D el характерен для азиатской популяции, встречаемость составляет до 30%. Проявляется очень низкой экспрессией антигена D на поверхности эритроцитов. Чаще всего обычными методами определяется как резус-отрицательный. С клинической точки зрения эти варианты важно отличать, особенно у женщин детородного возраста и при планировании переливания крови. При «неполном» варианте (D partial) возможно формирование антител к «полному» D антигену при переливании резус-положительной крови или гемокомпонентов. При «слабом» варианте (D weak) образование резус-антител маловероятно. Подход к выполнению исследования и к интерпретации результатов резус-принадлежности потенциальных реципиентов и потенциальных доноров отличается.

Вариант антигена	Интерпретация для реципиента	Интерпретация для донора
D weak	Резус-принадлежность положительная, но при гемотрансфузии рекомендуется использовать резус-отрицательные эритроциты	Резус-принадлежность положительная
D partial (в том числе DVI)	Резус-принадлежность отрицательная	Резус-принадлежность положительная
D el	Резус-принадлежность отрицательная	Резус-принадлежность положительная

Обратите внимание, что лаборатория ИНВИТРО исследует биоматериал только потенциальных реципиентов. Обследование потенциальных и действующих доноров требует применения принципиально других тест-систем и производится только на станциях переливания крови.

Литература

Минеева П.В. Группы крови человека. Основы иммуногематологии. — СПб. 2004:188.
Оловникова Н.И., Николаева Т.Л., Митерев Г. Ю. Иммуногематологическое обследование больных перед трансфузией донорских эритроцитов: пути оптимизации и улучшения качества тестирования. Справочник заведующего КДЛ. — М: Изд. МЦФЭР. 2014;6:33-46.
Rizzo C. et al. Weak D and partial D: our experience in daily activity. Blood Transfusion. 2012;10:235-236.
Westhoff С.М. The Structure and Function of the Rh antigen Complex. Seminars in Hematology. 2007;44(1):42-50.

Источник

Крайне важное значение для клинической практики имеет определение антигенов эритроцитов – идентификация группы крови и резус-фактора. Группа крови человека определяется наличием на поверхности эритроцита антигенов и является индивидуальным признаком. Эритроцитарные поверхностные антигены эритроцитов определяет фенотип эритроцитов или группу крови человека.

В настоящее время известно более 200 антигенов эритроцитов, поэтому группа крови может отличаться в зависимости от количества используемых антисывороток для идентификации антигенов на поверхности эритроцитов. Эритроцитарные антигены, идентифицированные в популяции в 1% случаев, считаются редкими.

Основной системой идентификации групп крови является система АВО, в которой группа крови характеризуется наличием на поверхности эритроцитов антигенов А, В, АВ или их отсутствием (О), т.е. четыре группы крови. В некоторых руководствах встречается дополнительная маркировка групп крови: О (I); А(II); В (III) и АВ (IV).

Выявление в 1901 г. эритроцитарных антигенов положило начало изучению допустимости смешивания эритроцитов разных групп, т.е. совместимости гемотрансфузий. В крови (сыворотке) каждого индивидуума циркулируют антитела (называемые так же агглютинины), активные в отношении чужеродных антигенов. Взаимодействие антиген-антитело приводит к агглютинации (слипанию) и разрушению эритроцитов. В крови индивидуумов с группой крови А циркулируют антитела против антигенов В. Индивидуумы с группой крови В имеют антитела, против антигенов А. При группе крови О в сыворотке определяются антитела анти-А, анти-В, тогда как при группе крови АВ ни антитела А, ни антитела В в сыворотке не определяются.

Таким образом, индивидуумы с группой крови АВ являются универсальными реципиентами иногрупной крови.

Индивидуумы с группой крови О, эритроциты которых не имеют на поверхности ни А, ни В антигенов, являются универсальными донорами.

Антитела к эритроцитарным антигенам А или В являются генетически детерминированными, в соответствии с группой крови эритроцитов, тогда как антитела к другим поверхностным антигенам эритроцитов являются приобретенными. Пациенты, получающие трансфузии, со временем накапливают антитела, что может осложнять подбор требуемой группы крови. Для таких пациентов важно выполнять типирование группы крови с оценкой возможно большего спектра антител сыворотки.

Группа крови оценка совместимости

Для оценки совместимости групп крови и возможности трансфузий необходимо исследование реакции антител сыворотки донора и эритроцитов реципиента, а также эритроцитов донора и антител сыворотки реципиента.

При совместимости групп крови смешивание эритроцитов и сыворотки не приводит к изменению состава и окраски реакционной капли.

При несовместимости групп смешивание эритроцитов донора и сыворотки пациента вызывает реакцию агглютинации – образование в капле неоднородностей в виде слипшихся эритроцитов, точечно насыщающих поле реакции.

Резус-фактором (Rh) называют антиген D, который может располагаться на поверхности эритроцитов. Наличие или отсутствие этого антигена на поверхности эритроцитов индивидуума определяет такую характеристику группы крови, как резус положительная или резус отрицательная (Rh+ или Rh–). Примерно 85% популяции людей имеют резус-положительную группу крови (Rh+).

В отличие от антител к антигенам АВ, антитела к антигену D не присутствуют в крови. При контакте крови резус-положительной группы с резус-отрицательной, происходит сенсибилизация и синтез анти-резусных антител. Такая реакция развивается, например, при беременности Rh– матери Rh+ плодом. Выход фетальных клеток во время родов в кровоток матери активизирует синтез антирезусных антител. В случае пересечения антирезусными антителами плацентарного барьера и попадания в кровь плода, развивается гемолитическая желтуха новорожденного, обусловленная разрушением эритроцитов.

Определение резус фактора необходимо для каждого индивидуума в дополнение к определению группы крови. Отмечено, что выраженность структуры эритроцитарного антигена различна у здоровых людей и тем более у иммуноскомпроментированных больных, беременных женщин.

В настоящее время определение групп крови, резус фактора, продукции антиэритроцитарных антител выполняется в автоматическом режиме стандартизированными методами, позволяющими одномоментно проводить как типирование групп крови, определение продукции антител, так и совместимости возможных трансфузий. Визуальное отображение полученной карты для каждого пациента может быть востребовано в течение всей жизни пациента, она хранится в базе данных лаборатории.

Показания к исследованию: Любое стационарное лечение, беременность.

Условия взятия и хранения образца

Для исследования используется венозную кровь, взятую с ЭДТА или без консервантов. Взятие крови производится натощак, или не менее чем через 8 ч после последнего приема пищи. Образец крови может храниться при температуре от 4–8 °С не более 24 ч.

Результаты исследованияГруппа крови системы АВО:

0 (I) – первая группа;
A (II) – вторая группа;
B (III) – третья группа;
AB (IV) – четвертая группа крови.

При выявлении подтипов (слабых вариантов) групповых антигенов результат выдается с соответствующим комментарием, например, «выявлен ослабленный вариант А2, необходим индивидуальный подбор компонентов крови».

Резус принадлежность

Rh (+) положительная;
Rh (–) отрицательная.

При выявлении слабых и вариантных подтипов антигена D выдается комментарий: «выявлен слабый резус-антиген, рекомендуется при необходимости выполнять трансфузию резус-отрицательных компонентов крови».

Источник

Метод определения
Метод агглютинации + гель-фильтрации (карточки).

Инкубация стандартных типированных эритроцитов с исследуемой сывороткой и фильтрация путём центрифугирования смеси через гель, импрегнированный полиспецифическим антиглобилиновым реагентом. Агглютинированные эритроциты выявляются на поверхности геля или в его толще.

В методе используются суспензии эритроцитов доноров группы 0(1), типированные по антигенам эритроцитов RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1(K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK(Jk a), JK2(Jk b), LU1(Lu a), LU2(LU b), LE1(LE a), LE2(LE b), MNS1(M), MNS2(N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).

Исследуемый материал
Цельная кровь (с ЭДТА)

Антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь резус-фактору, свидетельствующие о сенсибилизации организма к этим антигенам. Резус-антитела относятся к так называемым аллоиммунным антителам.

Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (к резус-фактору или другим эритроцитарным антигенам) появляются в крови при особых условиях — после переливания иммунологически несовместимой донорской крови или при беременности, когда эритроциты плода, несущие иммунологически чужеродные для матери отцовские антигены, проникают через плаценту в кровь женщины. У неиммунных резус-отрицательных людей антител к резус-фактору нет.

В системе резус различают 5 основных антигенов, основным (наиболее иммуногенным) является антиген D (Rh), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Помимо антигенов системы резус есть ещё ряд клинически важных эритроцитарных антигенов, к которым может возникать сенсибилизация, вызывающая осложнения при переливании крови.

Метод скринингового исследования крови на присутствие аллоиммунных антиэритроцитарных антител, использующийся в Независимой лаборатории ИНВИТРО, позволяет, помимо антител к резус-фактору RH1(D), выявить в исследуемой сыворотке аллоиммунные антитела и к другим эритроцитарным антигенам. Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d — рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные — только генотип dd).

Во время беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом возможно развитие иммунологического конфликта матери и плода по резус-фактору. Резус-конфликт может привести к выкидышу или развитию гемолитической болезни плода и новорожденных. Поэтому определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребёнка. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод — резус-положителен. В случае, если у матери резус-антиген положительный, а у плода отрицательный, конфликт по резус-фактору не развивается. Частота развития резус-несовместимости составляет 1 случай на 200 — 250 родов.

Гемолитическая болезнь плода и новорождённых — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО- (групповым) антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус- (С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в её организме специфических антител. Проникновению антигенов в материнский кровоток способствуют инфекционные факторы, повышающие проницаемость плаценты, мелкие травмы, кровоизлияния и другие повреждения плаценты. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.

Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учёта резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей. Во время первой беременности резус-положительным плодом у беременной с Rh «-» риск развития резус-конфликта составляет 10 — 15%. Происходит первая встреча организма матери с чужеродным антигеном, накопление антител происходит постепенно, начиная, приблизительно с 7 — 8 недели беременности. Риск несовместимости возрастает с каждой последующей беременностью резус-положительным плодом, независимо от того, чем она закончилась (искусственным абортом, выкидышем или родами, операцией при внематочной беременности), при кровотечениях во время первой беременности, при ручном отделении плаценты, а также если роды проводятся путём кесарева сечения или сопровождаются значительной кровопотерей при переливании резус-положительной крови (в том случае, если они проводились даже в детском возрасте).

Если последующая беременность развивается с резус-отрицательным плодом, несовместимость не развивается. Всех беременных женщин с Rh «-» ставят на специальный учёт в женской консультации и проводят динамический контроль над уровнем резус-антител. В первый раз анализ на антитела надо сдать с 8-й до 20-й недели беременности, затем периодически проверять титр антител: 1 раз в месяц до 30-й недели беременности, дважды в месяц до 36-й недели и 1 раз в неделю до 36-й недели. Прерывание беременности на сроке менее 6 — 7 недель может не привести к формированию у матери Rh-антител. В этом случае при последующей беременности, если у плода будет положительный резус-фактор, вероятность развития иммунологической несовместимости вновь будет равна 10 — 15 %. Проведение тестирования на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела важно также при общей предоперационной подготовке, особенно для людей, которым ранее уже проводилось переливание крови.

Источник