Анализ крови на реакцию агглютинации что это
Агглютинация крови — это склеивание и оседание в виде осадка эритроцитов, бактерий и других клеток, которые несут антигены.
Процесс происходит под воздействием агглютининов, которые являются специфическими веществами. В роли этих веществ выступают лектины или антитела.
Возможные виды агглютинации при определении группы крови
Агглютинация бывает специфической и неспецифической. В первом случае реакция происходит с участием трех компонентов:
- антигенов;
- антител;
- электролитов (применяется изотонический раствор).
Используются все возможные виды агглютинации при определении группы крови, однако это не единственный случай.
С какой целью используется?
Реакция агглютинации крови применяется для того, чтобы выявить возбудителя инфекционного заболевания. При этом он оседает, и его легко обнаружить в осадке. Данный процесс используется, как уже упоминалось выше, и при определении группы крови. Именно об этом и пойдет речь дальше.
Каковы особенности?
Эритроциты содержат антигены типа А и В. Они связываются с антителами ά и β соответственно. Группы крови и реакции агглютинации:
- 1, 0 (ά, β) – отсутствуют антигены на поверхности эритроцитов;
- 2, А (β) – присутствует антиген А и антитело β;
- 3, В (ά) – содержится антиген В и антитело ά;
- 4, АВ (00) – присутствуют два антигена, антитела отсутствуют.
Стоит отметить, что антигены уже наблюдаются у эмбриона. Что касается антител, они появляются после рождения, на первом месяце жизни.
От группы крови зависит совместимость людей. В этом и состоит причина отторжения плода организмом матери. Другими словами, у нее присутствуют антитела к антигенам крови будущего ребенка. В этом случае возникает несовместимость. Кроме того, группа крови обязательно учитывается при переливании.
Подготовка
Группы крови и реакции агглютинации — совместимые понятия, которые зачастую используются в медицине.
Перед тестом важно придерживаться определенных инструкций. Следует на время исключить употребление некоторых продуктов и лекарственных препаратов. Это поможет сделать результаты более точными. Рекомендации, которых нужно придерживаться, назначает врач. Дело в том, что у разных лабораторий могут не совпадать диапазоны полученных значений, то есть они немного отличаются.
Условия для проведения теста
Чтобы группа крови была определена точно, важно подобрать правильное оснащение. К таковому относятся:
- физиологический раствор и пипетка;
- стеклянные палочки;
- стандартные изогемагглютинирующие сыворотки;
- сухие фаянсовые тарелки, которые разделены на 4 сектора.
Существуют требования и к условиям проведения теста:
- дневное освещение;
- температура в помещении выше +16 ˚С;
- использование объемов крови и сыворотки в соотношении 1:10;
- достоверные результаты получаются в течение 5 минут.
Выше представлены основные условия и инструменты. Агглютинация крови может проводиться несколькими способами, и каждый из них выдвигает индивидуальные требования.
Методы
Возможные методы определения группы крови с помощью агглютинации:
- стандартный метод;
- перекрестная реакция;
- использование цоликлонов;
- экспресс-методика с применением набора «Эритротест-группокарт».
Стандартный метод
Агглютинация крови проявляется с использованием эритроцитов пациента. Также применяются стандартные сыворотки, которые содержат известные антигены.
На плоскую тарелку размещается по 1 капле четырех сывороток. Затем с помощью стеклянных палочек на нее вносится кровь пациента, подлежащая исследованию. В данном случае удобно использовать глазные пипетки. Следует придерживаться соотношения 1:10. Сыворотка и кровь осторожно перемешивается. В течение пяти минут можно проводить оценку.
Расшифровка результатов теста простым методом
По истечении указанного времени в каплях сыворотки наблюдается просветление. В некоторых можно увидеть, что агглютинация эритроцитов произошла (мелкие хлопья), в других она отсутствует.
Существуют следующие варианты:
- реакции нет во всех пробах сывороток − 1 группа;
- свертывание произошло везде, кроме 2 пробы – 2 группа;
- отсутствие реакции только в 3 пробе – 3 группа;
- агглютинация произошла везде – 4 группа.
Таким образом, главное — правильно распределить сыворотки. Тогда расшифровать результат не составит труда. Если агглютинация крови проявляется слабо, рекомендуется провести анализ повторно. В случае с мелкими хлопьями их рассматривают под микроскопом.
Перекрестная реакция
Иногда простым способом невозможно точное определение группы крови. Агглютинация в таком случае проводится с помощью метода перекрестной реакции. В отличие от первого варианта теста, важное значение здесь имеют стандартные эритроциты. Кровь пациента набирается в пробирку, центрифугируется, а затем пипеткой откачивается сыворотка для дальнейших исследований.
Она в количестве 2 капель помещается на тарелку, потом в нее добавляются стандартные эритроциты групп А и В. Содержимое размешивается путем покачивания емкости.
Результаты метода перекрестной реакции
Через пять минут пробы готовы к рассмотрению. Варианты такие:
- склеивание произошло в обеих каплях – 1 группа;
- хлопья не наблюдаются ни в одной из проб – 4 группа;
- процесс виден в одном образце – 2 или 3 группа (в зависимости от того, где именно свернулась кровь).
Метод с использованием цоликлонов
Для определения группы крови агглютинация таким способом проводится с применением синтетических заменителей сывороток. Они называются цоликлонами. В них содержатся искусственные заменители ά и β-агглютинов, известных как эритротесты (розового и синего цвета соответственно). Реакция происходит между ними и эритроцитами крови пациента.
Такой метод является самым точным и надежным. В основном он не требует повторного проведения исследования. Оценка результатов осуществляется аналогичным образом, как в случае стандартного метода. Особенность состоит в том, что четвертая группа крови должна обязательно быть подтверждена реакцией со специфическим синтетическим заменителем (анти-АВ). Кроме того, в ней не наблюдается склеивание при добавлении раствора хлорида натрия.
Экспресс-методика с набором «Эритротест-группокарт»
Рассматривая возможные методы анализа при определении группы крови, стоит отметить, что данный способ имеет свои особенности. Они заключаются в том, что результат можно оценить не только в лаборатории, но и в полевых условиях. Для проведения исследования используется специальный набор. Он включает в себя карточку с лунками, на дне которых уже присутствуют высушенные реагенты. Помимо анти-АВ, анти-А и анти-В, применяется анти-D, позволяющий определить резус-фактор.
Этот метод не требует особой подготовки, разрешено использовать кровь, которая взята из пальца, допускается наличие в ней консервантов. Сначала необходимо внести в каждую лунку по капле воды, чтобы растворить ингредиенты. После этого добавляется кровь, слегка размешивается. Через три минуты будет получен результат.
Ложная агглютинация
Иногда данные, полученные после проведения теста, не соответствуют действительности. Такое явление зависит от определенных факторов.
Выделяют три вида ложной реакции:
Псевдоагглютинация. Истинное склеивание не происходит, эритроциты просто складываются в виде монетных столбиков. Если добавить пару капель физиологического раствора, они распадаются. Подобное явление распознается под микроскопом.
Холодная агглютинация крови. Такая реакция наблюдается в том случае, если условия для проведения исследования были неблагоприятными. Когда температура ниже +16 ˚С, может проявляться склеивание.
Панагглютинация. При наличии инфекции в крови результаты тестов могут быть ложными. Такое явление также возможно в случае с онкологическими заболеваниями, при сепсисе.
Агглютинация очень важна в медицине. Она позволяет не только определять группу крови, но и выявлять возбудителя заболеваний, а также наличие инфекций. Главное, придерживаться рекомендаций врача при подготовке к данной процедуре. Что касается медицинского персонала, его задача состоит в создании благоприятных условий и соблюдении всех правил. Только таким образом можно добиться точных результатов при выполнении агглютинации крови.
Источник
Агглютинация эритроцитов – это биохимический процесс агрегации, слипания и выпадения в осадок красных клеток крови, протекающий in vitro или in vivо.
Что такое агглютинация?
Термин «Агглютинация» согласно переводу с латинского «agglutinatio» означает «приклеивание». В биологических системах или лабораторном анализе это склеивание и агрегация органических частиц (бактерий, сперматозоидов, клеток крови), имеющих на своей поверхности антигены-агглютиногены при взаимодействии со специфическими антителами-агглютининами. Сформировавшийся при этом агломерат называется агглютинатом.
Даже в норме в крови человека могут присутствовать антитела и антигены, не вызывающие склеивания. Это компоненты системы антигенов АВО, которые соответствуют группе крови, антитела, появляющиеся в качестве иммунного ответа при попадании в организм определенных бактерий или других возбудителей инфекционных заболеваниях (дизентерия, брюшной тиф).
Реакция агглютинации по механизму бывает прямой (активной) и непрямой (пассивной). Эффект прямой агглютинации проявляется в организме или пробе, когда структурные мембранные антигены эритроцитов начинают взаимодействовать с собственными антителами плазмы или компонентами бактериальных клеток.
Прямая агглютинация применяется при клинических исследованиях, определении группы крови или наличия резус-фактора. Эффект пассивного склеивания повсеместно применяется для постановки диагноза при инфекционных заболеваниях (бактериальных, вирусных).
Почему происходит агглютинация эритроцитов?
Агглютинация эритроцитарной массы становится следствием биохимического взаимодействия молекул-антигенов, локализованных в структуре мембраны кровяной клетки, с антителами, находящимися в плазме. От этого снижается естественный отрицательный заряд эритроцитов, происходит их сближение. Молекулы агглютинина, несоответствующего группе крови, могут образовывать «мостики» между эритроцитами. Как результат, формируется тромб, развивается гемолитическая болезнь, вплоть до летального исхода.
Склеивание эритроцитов (реакция гемагглютинации – РГА) обусловлено разными факторами, которые зависят от характера агглютинирующего агента на поверхности форменного элемента или в плазме:
- Холодовые агглютинины. Могут быть обнаружены в крови при болезнях, вызванных вирусами и бактериями, некоторыми новообразованиями и переохлаждениями, вызывая симптомы внутрисосудистого гемолиза. В низком титре холодовые агглютинины могут обнаружится и у здоровых людей, не вызывая заметных гемолитических проявлений. По химической природе это, как правило, белки-иммуноглобулины (чаще всего IgM). Активируются они при снижении температуры ниже 37°С, например, при попадании крови в верхние или нижние конечности или другие участки тела, склонные к переохлаждению. Холодовые агглютинины в зависимости от типа могут проявлять активность и локализоваться по-разному: действовать в широком или узком температурном диапазоне, при восстановлении температуры оставаться фиксированными на поверхности эритроцита или находиться в плазме.
- Эритроцитарные антигены. Сегодня выделено более 400 систем антигенов, комбинация которых индивидуальна для человека. Большинство из них обладает слабыми антигенными свойствами и не вызывает ощутимую агглютинацию эритроцитов. Наиболее критичны при переливании крови системы АВО и резус-принадлежности, несовместимость по которым может вызвать слипание кровяных клеток с последующим гемотранфузионным шоком.
- Гемагглютиногены, определяющие группу крови. В структуре эритроцитарных мембран есть специфические маркеры-антигены гликопротеидной природы (агглютиногены А и В), а в плазме специфические иммуноглобулиновые вещества-антитела (агглютинины альфа и бета). Одна из четырех возможных комбинаций сочетания этих антигенов и антител определяет группу крови, которая заложена генетически и не может измениться на протяжении жизни. В организме человека не могут одновременно находиться одноименные агглютиногены и агглютинины, иначе происходит склеивание эритроцитов с последующим гемолизом. Это одна из генетически выработанных реакций организма, направленная на сохранение антигенной индивидуальности и базисный принцип переливания крови.
Группа крови | Агглютиноген | Агллютинин |
0 (I) | Отсутствует | αβ |
A (II) | А | α |
B (III) | В | β |
AB (IV) | АВ | отсутствует |
- Антигены системы резус. Резус-антигены (Rh) по химической природе являются липопротеидами. Антигены Rh-системы представлены несколькими видами (C, E, D), самым сильным из них является D-тип. Людей, имеющих такой антиген, называют резус-положительными, остальных, соответственно, резус-отрицательными. Плазма при норме не содержит антител к резус-антигенам. Они появляются из-за нарушения правил переливания крови и в случае резус-конфликта при беременности.
- Вирусная и бактериальная агглютинация эритроцитов. Агрегация эритроцитарной массы при определенных вирусных или бактериальных заболеваниях может проявляться из-за непосредственного взаимодействия вируса или бактерии с поверхностными структурными молекулами эритроцитов либо из-за реакции с титром иммунизированной сыворотки эритроцитов, специально сенсибилизированных нужным антигеном (in vitro). Агглютинация кровяных клеток происходит после адсорбции вируса на поверхности эритроцита. У большинства вирусов гемагглютинин является структурным компонентом вириона.
Лабораторные методики, основанные на реакциях агглютинации
Реакции агглютинации имеют диагностическое значение. Это серологические методики выявления и исследования антител или антигенов, присутствующих в титре сыворотки пациентов на основе иммунологических реакций, идентификации маркеров-антигенов бактерий и вирусов, определения антигенной структуры микробного возбудителя.
Реакции непрямой или пассивной гемагглютинации (РПГА или РНГА) – основа методик идентификации определенных антигенов или антител в крови пациента. Этот метод применяют для установления возбудителя инфекционного заболевания, качественного и количественного определения гонадотропного гормона при подозрении беременности. Из оборудования используют предметные стекла, стерильные пробирки, пластиковые планшетки с лунками-ячейками.
Основным реактивом выступает так называемый эритроцитарный диагностикум (ЭД), который может быть изготовлен по двум принципам:
- антигенный ЭД (применяют чаще),
- антительный ЭД.
В зависимости от типа диагностикума на поверхности эритроцитарной клетки адсорбируют идентифицируемый антиген или антитело, которые при последующей реакции с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови пациента провоцируют слипание форменных элементов и формирование фестоноподобного осадка, равномерно покрывающего дно пробирки или ячейки. Если проба окажется отрицательной, то осадок на дне пробирки будет иного вида.
Для РПГА изготавливают диагностикум на основе клеток крови человека или животных (кролик, баран, крыса, лошадь), которые для консервации обрабатывают формальдегидом или другими реактивами. Сами эритроциты для увеличения их адсорбционной способности сенсибилизируют специальными препаратами (танин, хлористый хром, риванол).
Обратный процесс – реакция торможения гемагглютинации
Некоторые вирусы (гриппа, краснухи, кори, аденовирусы, чумы крупного рогатого скота) могут провоцировать агглютинирование форменных элементов. На реакциях, останавливающих этот процесс, базируются методики диагностики таких вирусных заболеваний. Противовирусные антитела предварительно иммунизированной сыворотки противодействуют вирусам, отчего они в результате теряют свою способность вызывать слипание эритроцитов.
Антиглобулиновый тест – реакция Кумбса
Пробу Кумбса выполняют для идентификации неполных антител, что локализуются в структуре мембраны эритроцита и вызывают агглютинацию при добавлении специальной антиглобулиновый сыворотки. Различают прямую и непрямую реакцию Кумбса. Прямой антиглобулиновый тест выполняют, если есть подозрения о присутствии таких неполных антител на поверхности эритроцита.
Непрямая проба Кумбса выполняется с предварительной сенсибилизацией эритроцита подходящим антителом и последующим введением антиглобулинового компонента. Выполняют при диагностике гемолитической болезни аутоиммунного течения или у новорожденных, для установления резус-конфликта между матерью (Rh-отрицательной) и ребёнком (Rh-положительным).
Непрямая реакция Кумбса широко используется трансфузиологами, так как дает возможность с высокой точностью определить совместимость донорского материала с кровью реципиента по эритроцитарным антигенам.
Загрузка…
Источник
Агглютинация крови является сложным преобразованием, в результате которого эритроциты могут склеиваться между собой. Такой процесс способен привести человека к летальному исходу из-за того, что формируется тромб, а кровеносные сосуды, в свою очередь, закупориваются. Это необходимо понимать при выборе донора для пациента, который нуждается в переливании крови. Подробнее о том, что такое агглютинация и как образуются тромбы, расскажем ниже.
Агглютинация: термины
Агглютинация — это явление, на фоне которого бактерии либо эритроциты и другие объекты начинают склеиваться на клеточном уровне. После этого они выпадают в осадок, представляющий собой взвесь однородной консистенции. Такой процесс может происходить под влиянием специальных антител, содержащихся в сыворотке, которая вырабатывается благодаря иммунной защите организма.
Вещество, взывающее подобное явление, называется агглютинином. В свою очередь, осадок, состоящий из склеенных клеток, называют агглютинатом.
Причины агглютинации крови
В сыворотке крови у здоровых людей в ряде случаев можно обнаружить агглютинины. Это является реакцией на некоторые виды микробов. Например, нечто подобное может формироваться из-за брюшнотифозных, дизентерийных и других бактерий.
В детском возрасте агглютинины невозможно обнаружить в организме, но лишь в том случае, если ребенок здоров.
Ученые считают, что, скорее всего, такое явление начинает возникать в старшем возрасте, когда организм подвергается процессу иммунизации, и защитная система реагирует на всевозможные грибки, бактерии и микробы. Иммунитет запоминает опасные микроскопические организмы, создавая антитела для каждого вида инфекции.
Нечто подобное происходит тогда, когда бактерии, например, попадают в организм сквозь стенки органов пищеварения и, в особенности, через кишечник. Кроме того, вероятны и другие пути развития такого процесса.
Элементы, способные вызывать формирование агглютининов в организме человека, когда они поступают парентеральным способом, называют агглютиногенами. Вот основные причины рассматриваемого процесса:
- Травмы яичек, при которых могут повредиться семенные каналы.
- Чаще всего это вирусные инфекции. Они имеют свойства закрепляться на мембране сперматозоидов. Этим они, конечно, сильно травмируют иммунную систему, а она в свою очередь склонна вырабатывать антитела.
- Следующей причиной могут быть различные воспалительные заболевания, такие как простатит, орхит, везикулит.
- Определенные хирургические операции на половых органах, которые выполнены не совсем удачно, тоже могут служить развитию такого заболевания.
- Гормональные проблемы в организме мужчины.
- Хронические заболевания, которые могут послужить развитию такого заболевания.
- Употребление наркотических средств, алкоголя, применение лекарств. Все это может послужить плохому качеству спермы.
Типы агглютинации
Микробы сами по себе выступают достаточно сложными комплексными молекулами, имеющими белковую основу. Некоторые такие структуры могут быть сходными с различными видами микробов. Но они должны относиться к единому филогенетическому типу.
Учитывая это, одна и та же сыворотка агглютинирующего вида, способная вступать в реакцию лишь с одним типом микроорганизмов, может влиять и на остальные бактерии, относящиеся к той же категории. Такая реакция будет происходить со слабой выраженностью, но она тоже может возникнуть из-за схожести объектов. Данный процесс врачи и ученые называют агглютинацией группового типа.
Некоторые бактерии способны производить процесс агглютинации самостоятельно. Данное явление известно в медицине также под названием аутоагглютинации.
Это явление само по себе является уникальным и выполняется самопроизвольно. Бактерии способны выполнять его в специально предназначенном физиологическом растворе либо в нормальной сыворотке.
В том случае если иммунная сыворотка не обладает антителами, реагирующими на групповые компоненты, и сохраняет их лишь по отношению к определенным антигенам разных видов, то такой материал называют монорецепторным.
Для чего нужна реакция агглютинации?
На реакцию агглютинации крови следует обращать внимание в следующих случаях:
- Когда требуется выявить антитела в сыворотке крови у больных пациентов, если они страдают от инфекционных заболеваний.
- Когда требуется определить возбудителей патологии, которые могут быть обнаружены у зараженного пациента.
- В ситуациях, при которых медицинским специалистам необходимо установить группы крови с применением антител моноклонального вида, чья деятельность направлена против эритроцитов-аллоантигенов.
Опасности при переливании
Агглютинация — это процесс, в рамках которого происходит склеивание эритроцитов в единые массы. Это крайне опасное явление, которое может вызвать летальный исход. Агглютинация эритроцитов весьма важна для определения групп крови, когда требуется переливание. Переливание — важное действие, которое способно сохранить жизнь человеку в том случае, если он потерял много жидкости либо страдает опасной патологией.
Ученые установили, что человеку не подходит кровь животного. Переливать кровь от одного человека другому можно лишь в тех ситуациях, когда она имеет отношение к одной и той же группе. В противной ситуации может наступить агглютинация крови, так как эритроциты вещества, которое было введено пациенту, могут начать склеиваться. В результате будут получаться кровяные комочки, что непременно приведет к формированию тромбов и общему загустению биоматериала в сосудах.
При этом существует риск того, что кровеносные сосуды могут оказаться закупорены, далее начнется гемолиз, и пациент, которому сделали переливание, начнет умирать. Становится понятным, как образуются тромбы.
Кто может быть донором?
Крайне важно понимать, что именно процесс агглютинации наступает перед гемолизом. При переливании агглютинация крови — это важнейший индикатор того, начнет ли происходить гемолиз. Таким образом, этот критерий служит основным показателем.
Переливание разрешено лишь тогда, когда абсолютно все характеристики по крови в сосудах у донора, а также реципиента надлежащим образом изучены. Донором при этом является лицо, которое отдает часть своей крови, а реципиентом — человек, которому требуется ее переливание.
Агглютинация и группа крови
У людей, как правило, кровь делят на четыре типа, которые считают основными. Базовым критерием для данной классификации является как раз реакция на агглютинацию.
Каждый человек рождается с определенной группой биоматериала, и в течение жизни тип данной жидкости остается неизменным. Таким образом, кровь не может меняться в зависимости от перенесенных травм или заболеваний.
Тип крови может быть одинаковым с родственниками в семье, так как он передается по наследству. Наличие двух видов крови объясняется тем, что в плазме человека присутствуют агглютинины, то есть вещества, способные склеивать. А непосредственно в эритроцитах можно найти агглютиногены — компоненты, которые могут склеиваться.
У некоторых животных, например у свиней, тоже есть четыре вида крови. А у коров их всего три типа. Агглютинины также могут быть обнаружены после исследования крови у собак.
Характеристики групп
Выделяют два основных типа агглютиногенов — категории «А» и «В». Им соответствуют два вида агглютининов, которые определяются как «α» и «β». Агглютинация крови может происходить лишь в тех ситуациях, когда «α» соответствует и совпадает с «А», то же самое относится и к «В» и «β».
Первую группу крови еще называют нулевой – «0, α, β». В данном виде биологического материала отсутствуют агглютиногены, а непосредственно в плазме можно найти лишь оба агглютинина.
Вторую группу крови обозначают как «А, β». В эритроцитах можно найти лишь «А», а в плазму включено только «β».
В третьей группе, которую обозначают, как «В, α», находят лишь «В» в эритроцитах, а «α» содержится непосредственно в плазме.
Четвертую группу биологического материала обозначают как «А, В, 0». Эритроциты этого вида крови включают в свой состав и «А», и «В», а вот в плазме вообще нет каких-либо агглютининов.
Немного о совместимости
Непосредственно кровяные тельца, которыми выступают эритроциты, относят к первому, то есть нулевому виду, они не могут склеиваться, какие бы сыворотки для них не были применены. По этой причине данный вид биологического материала можно применять для людей с различными группами крови.
Таким образом, нулевая категория крови считается универсальной для всех людей. А людей с четвертым видом крови считают универсальными реципиентами, так как чужеродные эритроциты не могут быть склеены.
Плазма доноров не может вызвать процесс агглютинации крови у пациента, которому делают переливание, так как ее количество мало по объему. По этой причине она очень быстро разбавляется материалом реципиента. Помимо этого, происходит мгновенное разрушение белков, которые могут располагаться в чужеродной плазме.
Интересно отметить, что агглютиногены можно найти и в тромбоцитах, и в лейкоцитах. Всего насчитывается около семидесяти видов.
Источник