Анализ крови на пцр hdv что это

Полимеразная цепная реакция известна уже 30 лет. Ее широко используют во многих областях, начиная с археологии и заканчивая генетикой.

Именно метод пцр помогает установить отцовство, но наиболее часто его используют для выявления различных инфекционных болезней в организме человека.

Как проводят анализ методом пцр, и что это такое? На эти вопросы мы постараемся детально ответить.

Анализ ПЦР — что это такое?

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии, так и задолго до того, как заболевание может себя проявить.

Метод ПЦР — абсолютно специфичен и выполненный правильно не может дать ложноположительный результат. То есть, если инфекции нет, то анализ никогда не покажет, что она есть. Поэтому сейчас очень часто для утверждения диагноза дополнительно сдают анализ ПЦР, чтобы определить возбудителя и его природу.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в 1983 году разработал Кэри Мюллис (США), за что в 1993 году он удостоен Нобелевской премии в области химии.  

В чем преимущество данного метода?

Диагностика этим методом позволяет найти возбудителя непосредственно в гене, который содержится в исследуемых материалах. Это самый точный анализ на половые инфекции, скрытые инфекции, различные венерические заболевания.

Отличия ПЦР-диагностики от других методов лабораторного исследования заключаются в следующем:

• метод нацелен на выявление самого возбудителя;
• диагностика методом ПЦР отличается универсальностью: для обнаружения возбудителей нескольких;
• заболеваний достаточно только одного биологического образца больного;
• метод обладает высокой чувствительностью и не сопровождается другими перекрестными реакциями.

Кроме этого, преимуществом ПЦР-диагностики является то, что для анализа пригоден любой биологический материал пациента: кровь, выделения из половых органов, моча, сперма.

Какие инфекции позволяет выявить мазок на ПЦР?

В организме может присутствовать большое количество возбудителей инфекций, сюда относятся и «скрытые», которые длительное время никак себя не проявляют.

Анализ мазка на ПЦР позволяет выявить такие инфекции:

• гепатит;
• уреплазмоз половых органов;
• кандидоз (молочница);
• хламидиоз половых путей;
• папиллома вирусная инфекция;
• герпес;
• наличие раковых клеток;
• микоплазмоз;
• бактериальный вагиноз;
• инфекционный мононуклеоз;
• трихомониаз;
• оценить гормональное состояние;
• СПИД (ВИЧ).

Исследуемым материалом для ПЦР обычно являются мокрота, слюна, моча, кровь. Перед проведением анализа необходимо тщательно подготовиться к нему, получив предварительную консультацию у врача.

Кровь для ПЦР обычно сдается натощак. Хорошие результаты показывает проведение анализа, когда материал для исследования взят из цервикального канала или уретры. В этом случае лучше всего провести ПЦР-диагностику не позже, чем через сутки после полового акта.

Разновидности ПЦР

ПЦР используется во многих областях для проведения анализов и в научных экспериментах. Существуют разные методики проведения анализа:

1. ПЦР с обратной транскрипцией (Reverse Transcription PCR, RT-PCR (англ.)) — используется для амплификации, выделения или идентификации известной последовательности из библиотеки РНК.
2. Инвертированная ПЦР (Inverse PCR (англ.)) — используется в том случае, если известен лишь небольшой участок внутри нужной последовательности. Этот метод особенно полезен, когда нужно определить соседние последовательности после вставки ДНК в геном.
3. Вложенная ПЦР (Nested PCR (англ.)) — применяется для уменьшения числа побочных продуктов реакции. Используют две пары праймеров и проводят две последовательные реакции.
4. Асимметричная ПЦР (англ. Asymmetric PCR) — проводится тогда, когда нужно амплифицировать преимущественно одну из цепей исходной ДНК. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа.
5. Количественная ПЦР (Quantitative PCR, Q-PCR (англ.)) или ПЦР в реальном времени — используется для непосредственного наблюдения за измерением количества конкретного ПЦР продукта в каждом цикле реакции.
6. Ступенчатая ПЦР (Touchdown PCR (англ.)) — с помощью этого подхода уменьшают влияние неспецифического связывания праймеров.
7. Групп-специфическая ПЦР (англ. group-specific PCR) — ПЦР для родственных последовательностях внутри одного или между разными видами, используя консервативные праймеры к этим последовательностям.

Если нуклеотидная последовательность матрицы известна частично или неизвестна вовсе, можно использовать вырожденные праймеры, последовательность которых содержит вырожденные позиции, в которых могут располагаться любые основания. Например, последовательность праймера может быть такой: …ATH…, где Н — А, Т или С.

Какие биологические материалы исследуются?

Материалом для ПЦР-исследования, в котором можно выявить чужеродную ДНК бактерии или ДНК или РНК вируса могут служить различные биологические среды и жидкости человека:

1. Моча. Может использоваться при инфекционном поражении мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин (у мужчин использование в качестве материала мочи заменяет эпителиальный соскоб).
2. Мокрота. Применяется для диагностики туберкулеза и реже для диагностики респираторных форм хламидиоза и микоплазмоза. Мокроту в количестве 15-20 мл собирают в стерильный (одноразовый) флакон.
3. Биологические жидкости. Сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям.
4. Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. Обычно используются для диагностики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), таких как гонорея, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, герпетическая и другие инфекции, поражающие слизистые оболочки.
5. Биоптаты. Чаще всего используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки для выявления хеликобактерной инфекции.
6. Кровь, плазма, сыворотка. Используются для ПЦР анализа вирусов гепатитов B, C, D, G, герпеса, ЦМВ, ВИЧ, исследования генов человека.

Как подготовиться к сдаче анализа?

Достоверность результата ПЦР напрямую зависит от правильности сдачи материала на обследование. Материал не должен быть загрязнен, иначе результат исследования не будет объективен. К наиболее важным рекомендациям перед сдачей анализа ПЦР относятся следующие требования:

1. Моча сдается утром в стерильный контейнер.
2. Анализ крови на инфекции необходимо сдавать на голодный желудок в утреннее время.
3. Не стоит проявлять половую активность за сутки до проведения анализа.

Результат анализа будет готов через 1,5-2 суток после проведения рассматриваемой процедуры. Встречаются такие ситуации, когда результат может быть подготовлен в тот же день.

Расшифровка анализа ПРЦ

Процесс интерпретации представленного исследования отличается своей простотой. Результаты пцр анализа можно получить через 1,5-2х суток после сдачи материала. В некоторых случаях результат готов в первый же день, и вот что они могут означать:

• Отрицательный результат показывает, что в диагностируемом материале отсутствует искомый инфекционный возбудитель.
• Пцр положительный обозначает, что в организме человека присутствует ДНК или РНК возбудителя.

В некоторых случаях производят количественное определение микроорганизмов. Это особенно актуально при заболеваниях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Так как данные бактерии проявляют свое негативное воздействие лишь при избыточном количестве.

Также количественный анализ ПЦР важен для выбора терапевтической тактики и с целью контроля над лечением таких вирусных инфекций, как ВИЧ и вирусы гепатита.

Насколько точна ПЦР диагностика инфекций?

Метод ПЦР отличается высокой точностью, специфичностью и чувствительностью. Это означает, что данный анализ способен:

• точно определить наличие или отсутствие инфекции;
• точно указать, что именно это за инфекция (специфичность);
• обнаружить инфекцию даже при очень низком содержании ДНК микробов в биологическом материале,
• который был подвергнут исследованию (чувствительность).

ПЦР анализ: цена и сроки

Цена конкретного анализа будет зависеть от того, на какую инфекцию вы будете проверяться. Примерные цены и сроки:

1. ИППП: 300-500 руб, сроки – 1 день;
2. Вирус Эпштейна-Барра, вирус папилломы человека, герпеса, цитомегаловирус: 300-500 руб, сроки – 1 день;
3. Гепатит A, B, C, D, G: качественный анализ 650 руб, количественный анализ 2000 руб. Сроки – до 5 дней;
4. Антитела к вирусу гепатита С, суммарные ( Anti-HCV ) – 420 руб;
5. Антитела к вирусу гепатита C, IgM ( Anti-HCV IgM ) – 420 руб;
6. Хеликобактер пилори (Helicobacter pylori): 300-400 руб, сроки – 1 день;
7. ВИЧ (антитела и антигены) – 380 руб;
8. РНК ВИЧ, качественно – 3 500 руб;
9. РНК ВИЧ, количественно – 11 000 руб.

Чтобы сэкономить средства, можно выбирать фиксированный пакет анализов. Такую услугу предоставляет большинство клиник где можно сдать анализ методом ПРЦ (инвитро, онклиник и т.д).

Исследование для выявления возбудителя гепатита D (HDV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце крови.

Синонимы русские

Вирус гепатита D, качественное определение РНК, вирус дельта-гепатита, дельта-инфекция.

Синонимы английские

Hepatitis D Virus, RNA, Blood, HDV, Hepatitis Delta Virus (Delta Agent), PCR.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита D – «дефектный» вирус, содержащий кольцевидную одноцепочечную нить РНК и способный к репликации только в присутствии вируса гепатита В. HDV строит свою оболочку из HBs-антигена и без HВV не может полноценно размножаться. По приблизительным подсчетам, около 5 % больных вирусным гепатитом В также инфицировано вирусом гепатита D.

Существует 3 основных генотипа вируса, которые отличаются тяжестью течения заболевания и характерны для определенных географических регионов. Первый генотип наиболее распространен во всем мире, второй выявляется в Восточной Азии, а третий – в Южной Америке.

Вирус устойчив к кислой среде и к высоким температурам, но разрушается под действием щёлочи.

Источник инфекции – больной острым или хроническим гепатитом D или носитель вируса. Основной путь заражения – парентеральный, как и при вирусном гепатите В. Редкими, но вероятными путями распространения инфекции являются половой и вертикальный (от матери ребенку). В группу риска по инфицированию вирусом входят инъекционные наркоманы, реципиенты донорских органов и пациенты, находящиеся на гемодиализе или которым часто переливают компоненты крови. Заболевание развивается только при остром или хроническом вирусном гепатите В или носительстве HBsAg, то есть при вирусном гепатите D всегда существует микст-инфекция.

При коинфекции (одновременном заражении вирусами гепатитов В и D) заболевание отличается более коротким инкубационным периодом длительностью 3-7 недель. Гепатит начинается, как правило, остро, с повышением температуры тела, тошнотой, потерей аппетита и желтухой. Коинфекция сопровождается двумя периодами повышения биохимических маркеров поражения печени (трансаминаз). Первое связано с цитолитическим действием вируса гепатита В, второе – через несколько недель – обусловлено вирусом гепатита D. Для 90 % пациентов коинфекция заканчивается выздоровлением.

При инфицировании вирусом гепатита D при наличии вирусного гепатита В возникает так называемая суперинфекция. Полное выздоровление при этом регистрируется только у 5-10 %.

Отличить коинфекцию от суперинфекции не всегда легко. Обычно ориентируются на особенности течения заболевания и присутствие anti-HBc класса IgM при коинфекции и антител класса IgG при суперинфекции.

Инфицирование вирусным гепатитом D снижает вероятность благоприятного ответа на противовирусную терапию, у 5 % быстро прогрессирующее поражение печени даже заканчивается летальным исходом. Хронический гепатит и цирроз в свою очередь увеличивают риск развития гепатоцеллюлярной карциномы, хотя непосредственная связь дельта-гепатита с раком печени не доказана. С усилением выраженных цирротических изменений в печени вирус размножается всё менее активно.

У реципиентов донорской печени, инфицированной вирусом гепатита D, бывает латентная форма инфекции. При отсутствии вирусного гепатита В или его подавлении иммунопрофилактическими методами размножение вирусных частиц происходит только в пределах пораженных гепатоцитов без распространения инфекции в другие участки печени. РНК вируса в крови при этом не выявляется.

Молекулярно-генетический метод определения генетического материала вируса в крови отличается высокой специфичностью и чувствительностью. РНК вируса методом ПЦР можно обнаружить в крови через несколько дней после инфицирования, в то время как антитела к вирусу гепатита D появляются только через несколько недель.

Для чего используется исследование?

• Для дифференциальной диагностики гепатитов.
• Для выявления вирусного гепатита D и микст-гепатитов.
• Для контроля за эффективностью лечения.
• Для составления прогноза течения и исхода заболевания.

Когда назначается исследование?

• При волнообразном течении вирусного гепатита В.
• При быстро прогрессирующем поражении печени (фульминантном гепатите) и обострении заболевания у пациента с вирусным гепатитом В.
• При хронических заболеваниях печени (хронический вирусный гепатит В, цирроз).
• При обследовании лиц, контактировавших с инфицированными дельта-гепатитом.
• При мониторинге лечения.
• При контроле за течением микст-гепатитов (вероятно одновременное инфицирование вирусами B, D и C).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата

• Вирусный гепатит D.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие вируса гепатита D.
• Ранний период инфицирования.
• Носительство (без размножения вируса) или выздоровление.

Что может влиять на результат?

Загрязнение биоматериала.

Важные замечания

• Тест на вирус гепатита D назначается после выявления вирусного гепатита В (HBs-антигена).
• Размножение вируса гепатита D подавляет размножение вируса гепатита В в клетках печени (феномен вирусной интерференции). Вследствие этого многие серологические маркеры могут быть не обнаружены в крови обследуемого или их концентрация может быть снижена.

Также рекомендуется

• anti-HDV, антитела
• HBsAg
• anti-HBc, IgM
• anti-HBc, антитела
• anti-HBe, антитела 
• anti-HBs, антитела
• HBеAg
• HBV, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
• Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
• Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
• Фосфатаза щелочная общая
• Альбумин в сыворотке
• Билирубин общий
• Холестерол общий
• Тромбиновое время
• Фибриноген

Кто назначает исследавание?

Инфекционист, гепатолог.

Литература

• Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 650-654.
• Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. — М.: ООО МИА, 2006. – 325-327 с.
• Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
• Isa K. Mushahwar. Viral hepatitis: molecular biology, diagnosis, epidemiology, and control. Gulf Professional Publishing, 2004 — 264 
• Thomas C. Howard, Lemon Stanley, Zuckerman J. Arie. Viral Hepatitis. Blackwell Publishing Ltd, 2005: 50-65; 571- 599.