Анализ крови на наличие вируса клещевого энцефалита

Клещевой энцефалит – трансмиссивное вирусное заболевание с выраженной сезонностью, зависящей от периода активности иксодовых клещей, и природной очаговостью. Возбудитель – вирус клещевого энцефалита, относящийся к РНК-вирусам рода Flavivirus. В России клещевой энцефалит регистрируется в 46 субъектах, около 70% всех случаев заболевания приходится на Урал и Сибирь. Кроме того, вирус клещевого энцефалита широко распространен в Европе: прибалтийских странах, Чехии, Словакии, Австрии, Германии, Швеции, Норвегии и Финляндии, а также встречается в Казахстане, Монголии, Китае и Японии.

В течение эпидемического сезона в РФ ежегодно регистрируется около 3000 случаев заболевания, средняя летальность при клещевом энцефалите составляет 1,2%. Наиболее тяжелые его формы и летальность около 10% связаны с дальневосточным генотипом вируса, циркулирующем преимущественно на Дальнем Востоке.

Как и многие другие арбовирусные инфекции в 80–90% случаев клещевой энцефалит протекает в инаппарантной форме, в остальных случаях развиваются различные по степени тяжести варианты течения заболевания: лихорадка, вирусные менингит и энцефалит. Также выделяют полиомиелитическую форму заболевания. При неблагоприятном сценарии острая стадия инфекции переходит в прогредиентную (хроническую) форму. В большинстве случаев после очаговой энцефалитической формы развиваются стойкие нарушения деятельности ЦНС.

Показания к обследованию. Лихорадка, головная боль, боль в области мышц шеи и плечевого пояса, тошнота, рвота, гиперемия лица, шеи и верхней части туловища, возможные потеря сознания, бред, психомоторное возбуждение и судорожный приступ при наличии эпидемиологического анамнеза: присасывание клеща, посещение лесной зоны, употребление в пищу сырого козьего молока.

Дифференциальная диагностика

Другие иксодовые клещевые инфекции.
При хронической форме – заболевания ЦНС неинфекционной этиологии.

Материал для исследований

Сыворотка крови – выявление специфических АТ, изоляция вируса в культуре клеток;
плазма крови – выявление РНК вируса;
СМЖ – выявление РНК вируса, изоляция вируса в культуре клеток;
цельная кровь – изоляция вируса в культуре клеток.

Этиологическая лабораторная диагностика включает изоляцию вируса с использованием культуральных методов, обнаружение РНК вируса и его АГ, обнаружение специфических АТ к возбудителю.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Культуральный метод, основанный на изоляции вируса из цельной крови, сыворотки крови, тканей мозга в культуре клеток (СПЭВ, Vero, клещевых клеточных культурах) и с использованием чувствительных лабораторных животных не применяется как рутинный метод в диагностических лабораториях, т. к. требует соблюдения мер биологической безопасности при работе, связанной с накоплением вируса, относящегося ко II группе патогенности.

Обнаружение АГ вируса в анализе на клещевой энцефалит методом ИФА в крови, взятой в инкубационный период, в случае отсутствия переносчика, позволяет провести адекватную профилактику клещевого энцефалита. В период острых клинических проявлений динамическое определение АГ в крови позволяет сделать прогноз о возможном переходе заболевания в хроническую форму, и в случае прогредиентного течения заболевания – дифференцировать клещевой энцефалит от заболеваний нервной системы другой этиологии.

Выявление РНК вируса методом ПЦР обладает высокой диагностической специфичностью, но недостаточной чувствительностью, которая не превышает 50% (относительно обнаружения специфических АТ методом ИФА); исследование проводят только в комплексе с выявлением специфических АТ. Для обнаружения РНК вируса используют пробы крови или СМЖ, взятые в первую неделю острой стадии заболевания или в случае уточнения развития персистенции вируса клещевого энцефалита, при расшифровке летальных исходов исследуют ткани мозга.

Определение специфических АТ IgM и IgG в сыворотке крови и/или в СМЖ выполняют преимущественно методом ИФА. Также для изучения в динамике титров нарастания гемагглютинирующих АТ в остром периоде заболевания используют метод РТГА. АТ IgM к вирусу клещевого энцефалита появляются с 3–4-го дня от начала заболевания, АТ IgG – в среднем на 10–14-й дни. Определенные сложности при лабораторном подтверждении диагноза, основанном на выявлении специфических АТ IgM и динамическом изменении титра АТ IgG в «парных сыворотках», возникают в случае заболевания вакцинированных лиц. Как правило, при этом можно наблюдать в основном нарастание АТ IgG. В этом случае целесообразно использовать методы прямого обнаружения возбудителя: изоляция вируса, обнаружение РНК вируса или его АГ.

Реакция нейтрализации (РН) является наиболее специфичной реакцией для обнаружения АТ. Ограничением для использования этого метода является необходимость работы с живым вирусом и соблюдения соответственных мер биологической безопасности.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение РНК вируса клещевого энцефалита в крови и СМЖ пациента является основанием для предварительной постановки диагноза, выявление нарастания титров АТ к вирусу клещевого энцефалита в образцах крови, взятых в динамике (парные сыворотки), служит подтверждением этиологии заболевания.

Источник

Клещевой энцефалит (ВКЭ), антиген
Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ), определение РНК

Синонимы русские

Иксодовый клещ; клещевой энцефалит; вирус клещевого энцефалита; системный клещевой боррелиоз (болезнь Лайма), клещевой менингополиневрит, клещевой боррелиоз, иксодовый боррелиоз, хроническая мигрирующая эритема, эритемный спирохетоз, синдром Банноварта.

Синонимы английские

Ixodes tick; tick-borne encephalitis; tick-borne encephalitis virus; tick-borne borreliosis (Lyme borreliosis); Borrelia burgdorferi.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ: Клещевой энцефалит (ВКЭ), антиген
Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ), определение РНК

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Клеща.

Общая информация об исследовании:

Клещевой энцефалит – это вирусное природно-очаговое трансмиссивное заболевание, характеризующееся преимущественным поражением центральной нервной системы. Возбудителем заболевания является РНК-содержащий вирус, относящийся к роду Flavivirus семейства Togaviridae, группы Arboviruses. Инфекция носит сезонный (весенне-летний) характер и передается преимущественно с укусом клещей, при раздавливании внедрившегося насекомого, также возможен алиментарный путь передачи через инфицированное сырое молоко коров и коз. Основным резервуаром и переносчиком вируса являются клещи Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus. Дополнительным резервуаром вируса являются грызуны, дикие животные и птицы. Заражение клеща происходит при укусе и кровососании инфицированных животных. При этом вирус проникает в органы и ткани клеща, преимущественно в слюнной аппарат, кишечник, половой аппарат, и сохраняется в течение всего периода жизни насекомых. Возбудитель клещевого энцефалита подразделяется на три подвида: дальневосточный, центрально-европейский и сибирский.

Инкубационный период заболевания длится от 3 до 21 дней, в среднем 10-14 дней. Клинические проявления носят разнообразный характер. Начальная фаза заболевания характеризуется лихорадкой, головной болью, миалгиями, возможно присоединение тошноты, рвоты, светобоязни. Далее развивается фаза неврологических расстройств, при которой происходит поражение центральной и периферической нервных систем. В зависимости от выраженности неврологических расстройств выделяют следующие формы заболевания: лихорадочную, менингеальную, менингоэнцефалитическую, менингоэнцефалополиомиелитическую и полирадикулоневритическую, двухволновый менингоэнцефалит. По степени тяжести инфекция может протекать в легкой, средней или тяжелой форме, что влияет на длительность заболевания, выраженность клинической симптоматики и варианты исхода болезни. В завершающую фазу заболевания может отмечаться выздоровление с угасанием неврологической симптоматики, хронизация патологического процесса или гибель больных. Возможно длительное латентное вирусоносительство, персистенция или хроническая форма инфекции.

Системный клещевой боррелиоз, или болезнь Лайма, – природно-очаговое трансмиссивное заболевание, возбудителем которого является грамотрицательная бактерия Borrelia burgdorferi семейства Spirochaetaceae. Заражение человека может происходить после укусов иксодовых клещей, инокуляции боррелий со слюной клеща, при раздавливании внедрившегося насекомого, также возможна трансплацентарная передача возбудителя от матери к плоду. Основным «резервуаром» и переносчиком вируса являются клещи Ixodes persulcatus, Ixodes ricinus, Ixodes scapularis. Чаще всего заражение происходит в весенне-летний период активности клещей.

Инкубационный период заболевания может длиться от 3 до 32 дней, по данным некоторых авторов до 60 дней. Клещевой боррелиоз имеет разнообразные клинические проявления. В первую фазу заболевания, фазу локальной инфекции, отмечаются лихорадка, интоксикация, головные боли, распространенная «мигрирующая» эритема на месте контакта клеща с кожей больного, регионарный лимфаденит. В фазу гематогенного и лимфогенного диссеминирования боррелий отмечается поражение органов и систем с развитием разнообразной клинической картины заболевания. Отмечается поражение опорно-двигательной, нервной, сердечно-сосудистой систем, глаз, печени, почек, кожи. При этом развивается клиническая картина невритов, радикулитов, энцефалитов, артритов, конъюнктивитов, миокардитов, появляется сыпь вне места укуса клеща. При прогрессировании заболевания, его осложнении и несвоевременном применении лечения могут развиться следующие процессы: неврологические нарушения в виде менингита, менингоэнцефалита, энцефалита и энцефаломиелита, тяжелые поражения сердца, рецидивирующие и/или хронические артриты. Возможно развитие непрерывного или рецидивирующего течения болезни, хронических форм поражения нервной системы.

В связи с тем что основным «резервуаром» и переносчиком клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза являются иксодовые клещи, в лабораторной диагностике и выявлении возбудителей данных заболеваний используется непосредственное исследование клещей. Возможно обследование экземпляров клещей из природных очагов их распространения в целях выявления наличия возбудителей, определения процента инфицированных клещей на обследуемых территориях, количественного содержания вируса в случае клещевого энцефалита. Необходимым является исследование отдельных экземпляров клещей при их укусе человека, инокуляции вируса или боррелий со слюной клеща, при раздавливании внедрившегося насекомого. Это важно для определения возможного инфицирования клеща, своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактике и проведении целенаправленного патогенетического лечения.

К современным методам диагностики возбудителей относятся методы твердофазного иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Они позволяют определить антиген возбудителя даже в минимальном объеме исследуемого биоматериала, характеризуются быстротой получения результата и обладают высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности. Особенностью ПЦР-метода является возможность выявления генетического материала даже при малом его содержании в исследуемом биологическом материале. Данные методы позволяют в кратчайшие сроки определить наличие или отсутствие инфицированности клещей вирусом клещевого энцефалита и/или возбудителем клещевого боррелиоза. Но при отрицательных результатах исследований и сохранении подозрения на заболевания, а также при развитии клинической симптоматики рекомендуется исследование крови пациентов. При этом возможно определение антител классов IgM и/или IgG к антигенам возбудителей, а также выявление генетического материала возбудителей методом ПЦР.

Для чего используется исследование?

Для комплексной лабораторной диагностики клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
для определения инфицированности исследуемых клещей;
для определения содержания антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза в исследуемых клещах;
для определения возможного инфицирования клеща в целях своевременной диагностики заболеваний, экстренной специфической профилактики и проведении целенаправленного патогенетического лечения;
для определения наличия и процента инфицированности клещей на исследуемой территории в природных очагах и в сезон распространения насекомых.

Когда назначается исследование?

При обследовании клеща после его укуса человека, раздавливания внедрившегося насекомого, извлечения клеща, в том числе в специализированном стационаре;
при обследовании клеща в целях диагностики антигенов и генетического материала возбудителей клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
при обследовании клещей в целях определения наличия и процента инфицированности клещей на исследуемой территории в природных очагах и в сезон распространения насекомых.

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

инфицированность исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита;
инфицированность исследуемого клеща возбудителем системного клещевого боррелиоза;
инфицированность исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита и системного клещевого боррелиоза.

Причины отрицательного результата:

отсутствие инфицированности исследуемого клеща вирусом клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза;
содержание возбудителя в исследуемом материале ниже уровня детекции;
ложноотрицательные результаты.

Важные замечания

При подозрении на наличие клещевого энцефалита и/или системного клещевого боррелиоза, но при отрицательных результатах исследования рекомендуется исследование крови пациентов. При этом возможно определение антител классов IgM и/или IgG к антигенам возбудителей, а также выявление генетического материала возбудителей методом ПЦР.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, вирусолог, паразитолог, эпидемиолог.

[02-029] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

[07-092] Вирус клещевого энцефалита, IgM

[07-093] Вирус клещевого энцефалита, IgG

[07-095] Вирус клещевого энцефалита, антиген (в ликворе)

[06-060] Белок общий в ликворе

[06-061] Глюкоза в ликворе

[07-062] Borrelia burgdorferi, IgM, титр

[07-064] Borrelia burgdorferi, IgG, титр

[09-039] Borrelia burgdorferi s.l., ДНК [ПЦР]

[40-174] Серологическая диагностика клещевого боррелиоза и энцефалита

Литература

1. Wang G, Liveris D, Brei B, Wu H, Falco RC, Fish D, Schwartz I. Real-time PCR for simultaneous detection and quantification of Borrelia burgdorferi in field-collected Ixodes scapularis ticks from the Northeastern United States / Appl Environ Microbiol. 2003 Aug;69(8):4561-5.

2. Pancewicz SA, Garlicki AM, Moniuszko-Malinowska A, Zajkowska J, Kondrusik M, Grygorczuk S, Czupryna P, Dunaj J Diagnosis and treatment of tick-borne diseases recommendations of the Polish Society of Epidemiology and Infectious Diseases. Polish Society of Epidemiology and Infectious Diseases / Przegl Epidemiol. // 2015;69(2):309-16, 421-8.

3. Вирусологическое исследование отдельных экземпляров иксодовых клещей с использованием методов микроанализа. Методические рекомендации.

4. Ткачев С. Е., Ливанова Н. Н., Ливанов С. Г.Исследование генетического разнообразия вируса клещевого энцефалита сибирского генетического типа, выявленного в клещах Ixodes persulcatus на Северном Урале в 2006 году / Сибирский научный медицинский журнал, № 4 (126) – 2007.

5. Покровский В.И., Творогова М.Г., Шипулин Г.А. Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Справочник / М. : БИНОМ. – 2013.

6. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / М.: Медицина. – 2005. – 696 с.

Источник

Анализ на клещевой энцефалит, боррелиоз сдают через 14 дней после укуса. Перед этим рекомендуется исследовать самого клеща. При обнаружении инфекции принимают экстренные меры – при энцефалите вводят человеческий иммуноглобулин, при боррелиозе назначают антибиотики.

Клещевой энцефалит и боррелиоз – что это

Источником заболевания выступают животные, часто грызуны. Переносят инфекцию иксодовые клещи. Возбудителем клещевого энцефалита являются вирусы, боррелиоза или болезни Лайма – микроорганизмы боррелии. Инкубационный период от 7 дней до 50. В среднем первые симптомы заболевания появляются спустя 14 суток после укуса.

Клещевой энцефалит

Вирус находится в крови клеща, поэтому повышается риск заражения при неправильном извлечении паразита. Патологические клетки локализуются на месте укуса, вызывают воспаление, покраснение, припухлость. Постепенно попадают в системный кровоток, начинают питаться кровяными клетками, чем снижают гемоглобин, ослабляют защитные функции организма.

К концу второй недели вирус поражает клетки головного, спинного мозга, сосуды, появляются первые симптомы болезни. Клиническая картина схожа с гриппом – высокая температура, ломота в мышцах, боль в горле, ринит, лихорадка, а также тошнота, рвота. Через 7 суток состояние нормализуется. В это время либо иммунитет уничтожает вирус, либо позволяет ему прогрессировать. Дальнейшее развитие клещевого энцефалита приводит к судорогам, разрушению костной, мышечной ткани, слабоумию, инвалидности, смерти.

Основными препаратами для лечения болезни являются противовирусные средства. Если после укуса прошло не более 96 часов, вводят человеческий иммуноглобулин. Благоприятность исхода зависит от силы иммунитета, качества препаратов, своевременности терапии.

Важно!
Антитела к клещевому энцефалиту вырабатываются через 14 суток, поэтому раньше этого времени сдавать кровь на анализ нет смысла.

Клещевой энцефалит

Боррелиоз или болезнь Лайма

Бактериальная инфекция начинает развиваться после укуса клеща, зараженного боррелиями. Микроорганизмы передаются через слюну. Вероятность инфицирования повышается при длительном присасывании паразита более суток.

Изначально патологические микроорганизмы локализуются на месте укуса. Появляется покраснение, припухлость, незначительный зуд. Пятно стремительно увеличивается в размерах, доходит до 60 см в диаметре. Инкубационный период в среднем длится 14 суток. По истечению этого времени происходит гибель первых бактерий. В процессе они выделяют сильный токсин, провоцирующий симптомы болезни.

Клиническая картина бывает разной. Преобладают признаки интоксикации – температура, головная боль, лихорадка, тошнота, рвота, ломота в теле. А также присутствует светобоязнь, спазм лицевого нерва, смятение сознания, нарушение речи. В течение недели состояние нормализуется, происходит одно из двух – болезнь завершается при сильном иммунитете либо прогрессирует.

Следующий приступ боррелиоза появляется через месяц. Бактерии поражают нервную систему, головной мозг, мышцы, внутренние органы. Тяжелые формы заболевания приводят к слабоумию, инвалидности, смерти.

Важно!
Основными медикаментами являются антибиотики. При своевременном назначении боррелиоз быстро вылечивается, не вызывая осложнений. Диагностировать заболевание можно после появления первых симптомов. Сдать кровь на предварительное обследование можно через 14 суток после укуса.

Лабораторная диагностика боррелиоза

Бактерии присутствуют в пораженных тканях, жидкостях – кровь, края эритремы, ликвор. Эффективность манипуляций составляет 50%. Для получения достоверного результата используется дифференциальная диагностика с учетом лабораторных исследований, клинической картины, факта укуса клещом.

Лабораторная диагностика боррелиоза

Наиболее простой, показательный метод – серологический. Определяет наличие антител к спирохете. Материалом для исследования выступает кровь, спинномозговая, суставная жидкость.

Основные диагностические методы болезни Лайма:

Хемилюминесцентный иммуноанализ. Исследуют сыворотку венозной крови на наличие антител IgG, IgM к возбудителю инфекции. Точность анализа при проведении не ранее 14 суток с момента укуса составляет 95%. Удельный вес ложноположительных результатов не больше 5%. Для подтверждения результатов назначают дополнительно иные методы диагностики.
Иммуноблот (вестерн-блот). Повышает точность диагностики, но дает отрицательный результат у тех, кто заболел повторно, уже имеет антитела к боррелиям. Для анализа берут венозную кровь. О наличии свежей инфекции судят по показателю OspC p25. Чтобы подтвердить результат, повторить анализ следует через 3-6 недель.
ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Биоматериалом является суставная, спинномозговая жидкость. Забор осуществляют в стационаре под наблюдением врача. Метод целесообразен на стадиях, когда серологические исследования малоинформативны. ПЦР определяет ДНК живых, неактивных бактерий, служит дополнением к основным диагностическим методам.
ПЦР-исследование клеща. Обнаруживает фрагменты ДНК возбудителей болезней. В лабораторию отправляют в специальном контейнере либо стеклянной баночке, на дно которой кладут влажную ватку. Паукообразное доставляют живым, мертвым либо фрагмент тела.

На заметку!
Диагностика по анализу крови, другому материалу продолжается несколько дней. Специально готовиться к процедуре не надо. Необходимо просто прийти в клинику в назначенное время.

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита

Материалом для исследования является венозная кровь. Ликвор при клещевом энцефалите становится показательным через 14 суток после укуса клеща.

Диагностика клещевого энцефалита

Установить диагноз можно с помощью 2 методов:

Иммуноанализ. ИФА на клещевой энцефалит выявляет наличие антител к вирусу – IgG , IgM. Первыми на присутствие патологических клеток реагируют иммуноглобулины М, которые указывают на недавнее инфицирование. Со временем формируется группа G, что присутствует в организме годами. Получить достоверный результат можно уже на четвертый день болезни.
ПЦР-исследование клеща. Основная задача – определить наличие либо отсутствие вируса. При положительном результате принимают экстренные меры по введению иммуноглобулина, назначают противовирусные препараты.

На заметку!
Иммунологический анализ рассматривается в сочетании с анализом клинической картины. Антиген клещевого энцефалита способен присутствовать в крови всю жизнь, не вызывая яркой симптоматики.

Стоимость лабораторной диагностики

Анализ крови на клещевой энцефалит и боррелиоз сдают в государственных, частных лабораториях. Процедура в большинстве случаев платная. Исследовать клеща в течение суток можно за 300 – 1000 руб. Анализ на энцефалит и боррелиоз по крови, суставной, спинномозговой жидкости – от 400 до 3500 руб. Дополнительно нужно заплатить за консультацию специалиста.

В сети лабораторий Инвитро, распространенных по всей стране, диапазон цен указан следующий:

Антитела класса IgG – 440 руб.
Антитела класса IgM – 630 руб.
Лабораторное исследование клеща для выявления РНК/ДНК возбудителей инфекций, передаваемых иксодовыми клещами: клещевого энцефалита, боррелиоза (болезни Лайма), анаплазмоза, эрлихиоза – 3200 руб.

Сдать кровь на анализ

В Москве бюджетные лаборатории для анализа клеща, крови:

ФБУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора». Режим работы 9.00 до 16.30 ежедневно по рабочим дням. Москва, Варшавское шоссе, д. 19 а., тел. +7 (495)-952-40-98, (ПЦР, 4 инфекции). Лабораторное исследование иксодовых клещей.
ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Московской области». Приём клещей с 9.00 до 16.30 в рабочие дни. Московская область, г. Мытищи, ул. Семашко, д. 2., Лаборатория особо опасных инфекций. Тел. +7 (495) 582-96-55. Анализ на 4 инфекции методом ПЦР. Режим работы: понедельник-пятница с 09:00 до 15:00; сб., вс. – нерабочие дни. Одновременное исследование клеща, крови на 4 инфекции стоит 1055 руб., на выявление антител IgG, IgM — 345р (одного класса к одной инфекции). Анализ проводят 1-3 дня.
ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве». Тел.: +7 (495) 687-40-47. Режим работы 9.00 до 15.30 ежедневно по рабочим дням (перерыв на обед с 13.00 до 13.30). г. Москва, Графский переулок, д. 4, корпус 2 (вход со двора, мимо шлагбаума). Анализ проводят методом ПЦР на 4 инфекции — КЭ, БЛ, МЭЧ, ГАЧ, цена 1640 рублей. Также г. Москва, Варшавское шоссе, 19 А. Тел.: +7 (495) 952-40-98. Режим работы: понедельник-четверг с 9:30 до 15:00, 9 этаж кабинет 925 (перерыв на обед с 12:00 до 13:00). Информация по результатам предоставляется с 15:00 до 17:30. В лаборатории проводятся исследования крови на антитела к клещевому энцефалиту, боррелиозу, анаплазмозу, эрлихиозу.

Средняя цена ампулы иммуноглобулина (1 мл) составляет 650 руб. Бесплатных анализов по Москве нет, но информация постоянно обновляется на официальном сайте Роспотребнадзора.

Источник