Анализ крови на менингококковую инфекцию

Возбудителем менингококковой инфекции является Neisseria meningitidis (менингококк). Менингококк колонизирует заднюю стенку носоглотки человека и в зависимости от вирулентности штамма и резистентности зараженного лица вызывает инфекционный процесс с широким спектром клинических проявлений: бессимптомное носительство, назофарингит и генерализованную форму – менингококцемию и/ или менингит. Менингококковая инфекция поражает лиц всех возрастов, но чаще (70%) болеют дети. Показатель летальности составляет в среднем 10%, что определяет высокую социальную значимость заболевания. Капсульные штаммы менингококка в зависимости от химического строения капсульного полисахарида делятся на ряд серологических групп: А, В, С, X, Y, Z, W-135, 29-E, H, I, K, L. Более чем 90% случаев генерализованных форм менингококковой инфекции обусловлены штаммами серогрупп А, В и С, значительно реже – штаммами серогрупп X, Y и W-135, остальные серогруппы не представляют эпидемиологического интереса. Определение серогруппы – важнейшая процедура для выбора адекватного вакцинного препарата. Все менингококки экспрессируют на своей поверхности один из аллельных вариантов белков наружной мембраны 2 или 3 класса (PorB). Большинство менингококков экспрессируют белки 1 класса (PorA). Антигенная структура белка PorB определяет серотип штамма, белка PorA – серосубтип. На основании химической структуры капсульного липополисахарида определяют иммунотип. Антигенная характеристика может включать и некоторые другие АГ: Ора и Орс (белки наружной мембраны 5 класса), пили, поверхностный белок FetA.

Показания к обследованию

• Диагностические исследования проводят в условиях стационара при подозрении на гнойный менингит и/или генерализованную форму менингококковой инфекции;
• исследования по эпидемическим показаниям проводят в очаге генерализованной формы менингококковой инфекции среди контактировавших с больным и имеющих клинические проявления назофарингита.

Материал для исследования

• Кровь – микроскопическое исследование, культуральное исследование;
• СМЖ – микроскопическое исследование, культуральное исследование, выявление ДНК, выявление АГ;
• мазки из ротоглотки и носа – культуральное исследование;
• сыворотка крови – выявление АГ, определение специфических АТ

Дифференциальная диагностика

• Возбудители гнойных менингитов другой этиологии: Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenza, Staphylococcus aureus и др.;
• при исследовании носоглотки – пигментирующие нейссерии Neisseria subflava, Neisseria flavescens, Neisseria mucosa, Neisseria sicca, Neisseria lactamica.

Лабораторная диагностика генерализованной формы менингококковой инфекции включает микроскопию биологического материала, посев биологического материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение специфических генетических фрагментов менингококка и его АГ, обнаружение специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторных исследований и особенности интерпретации их результатов. При микроскопии нативного ликвора или препарата крови «толстая капля» (окраска водно-спиртовым раствором метиленовой сини) на голубом фоне обнаруживают морфологически четкие окрашенные в темно-синий цвет кокки, диплококки, напоминающие кофейные зерна или семена бобов, прилегающие друг к другу вогнутыми сторонами, иногда выявляется капсула. Микробные клетки могут располагаться как вне- так и внутрилейкоцитарно. Интенсивность обсеменения СМЖ микробными клетками колеблется в значительных пределах и зависит от стадии развития инфекционного процесса в момент взятия материала. Если осуществлялось лечение антибиотиками, типичная морфология микробных клеток теряется. Исследование рекомендуется проводить в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар).

Посев СМЖ и крови на питательные среды при дальнейшей инкубации в течение 24 ч при 37 оС в атмосфере с 5–10% СО2 и повышенной влажностью позволяет выявить характерные тинкториальные свойства патогена. Исследование рекомендуется проводить в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар) до начала интенсивной антибактериальной терапии.

При определении сахаролитической активности проводят учет результатов посева чистой культуры на плотные питательные среды с углеводами. Метод дает возможность дифференцировать различные виды нейссерий и некоторые другие виды микроорганизмов (таблица 16). Иногда наблюдается вариабельность сахаролитической активности у различных штаммов одного и того же вида.

Уточнение биохимических свойств менингококков проводят с использованием наборов реагентов для расширенного изучения ферментативной и метаболической их активности, что в течение 2-х часов позволяет определить видовую принадлежность возбудителя.

Определение серогруппы менингококков проводят в реакции агглютинации на стекле с набором агглютинирующих серогрупповых антисывороток (серогруппы А,В,С,X,Y,Z,W-135,29E). Реакцию проводят только с чистой культурой менингококков, прошедшей все этапы идентификации. Менингококки серогрупп А, В и С наиболее часто являются причиной возникновения генерализованных форм менингококковой инфекции, реакцию агглютинации проводят в первую очередь с антисыворотками к менингококкам этих серогрупп. Отсутствие реакции с одной из основных серогрупповых АТ, указывает на необходимость продолжения проведения аналогичных исследований с другими специфическими антисыворотками (X, Y, Z, W-135, 29E). Только в том случае, если подтвержденный всеми тестами штамм менингококка не показал положительного результата в реакции агглютинации с полным набором агглютинирующих антисывороток, его следует отнести к категории неаггютинирующегося штамма (НА).

Для обнаружения АГ в СМЖ и/или сыворотке крови используют реакцию латекс- агглютинации. Исследование нативного ликвора (экспресс-метод) проводится при наличии в нем признаков гнойного воспаления и/или при микроскопическом обнаружении возбудителей. Использование реакции позволяет в кратчайшие сроки (15–20 мин) выявить специфические АГ менингококков самых распространенных серогрупп (А, В, С, У, W-135). Рекомендуется проводить исследование в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар).

Для выявления ДНК патогена используется СМЖ и/или свежая чистая культура Neisseria meningitidis, выросших на чашки Петри. Обнаружение специфических генетических фрагментов микроорганизма выполняют с использованием ПЦР. Метод обладает высокой диагностической чувствительностью и специфичностью, позволяет выявлять в клиническом образце микроорганизмы, содержащиеся в единичных количествах или в нежизнеспособном состоянии, характеризуется высокой воспроизводимостью и сжатыми сроками выполнения исследования (в течение нескольких часов).

Показаниями к проведению исследований для выявления ДНК при диагностике бактериальных менингитов являются:

• отрицательные результаты диагностики иными методами, особенно в случае исследования образцов СМЖ после проведения массивной антибиотикотерапии или на поздних сроках болезни;
• необходимость получения срочного ответа об этиологии возбудителя;
• исследование образцов материала, доставленных в замороженном состоянии или фиксированных этанолом.

Детекция специфических АТ в сыворотке крови при диагностике менингококковой инфекции проводят с использованием РНГА. Рекомендуется проводить исследование дважды: в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар) и на 12–14 день заболевания. Диагноз считается подтвержденным при нарастании титров АТ в четыре и более раза в пределах указанного периода.

Применение РНГА для исследования в «парных сыворотках» выявляет динамику нарастания титров специфических АТ к менингококку в крови и позволяет определить принадлежность возбудителя к наиболее распространенным серогруппам менингококков (А и С). Выявление АТ дает возможность провести ретроспективную лабораторную диагностику генерализованных форм менингококковой инфекции, так как окончательный ответ получают только через 12–14 дней после начала заболевания. Преимущественными возможностями исследования является лабораторное подтверждение менингококкцемии, при которой использование других методов лабораторной диагностики, как правило, мало эффективно.