Анализ крови на кошачьи инфекции
Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Основные принципы ПЦР открыл в 1983 году американский химик Кэри Б. Мюллис, за что и был удостоен Нобелевской премии.
ПЦР-анализ состоит из нескольких этапов. Первый этап — пробоподготовка — заключается в обработке исследуемого материала (приготовление суспензии, центрифугирование). На втором этапе проводится выделение наследственного материала — ДНК или РНК — из клеток. При этом после лизиса клеток и разрушения комплекса «ДНК-белок» производится осаждение ДНК или РНК на сорбенте с последующим переходом их в элюирующий буфер. На третьем этапе проводится амплификация, то есть умножение количества специфических участков ДНК. Для этого используются тест-системы, в состав которых входят праймеры — олигонуклеотиды, которые являются специфическими для каждого возбудителя. К разлитой в микропробирки ПЦР-смеси добавляют образцы и контроли, которые помещают в амплификатор или термоциклер — программируемый термостат с высокой скоростью и точностью задаваемой температуры. Процесс амплификации заключает в себе три стадии: денатурация, отжиг и элонгация. При определении в клинических образцах РНК-содержащих вирусов амплификации предшествует стадия обратной транскрипции, при которой РНК переводят в форму ДНК с использованием фермента обратной транскриптазы, или ревертазы. Четвертый этап ПЦР-диагностики заключается в проведении электрофоретической детекции продуктов ПЦР — ампликонов. При этом продукты ПЦР помещают в лунки агарозного геля и подвергают действию постоянного электрического тока, в результате чего отрицательно заряженная молекула ДНК движется к положительному электроду. В состав геля входит бромид этидия, который, образуя устойчивый комплекс с ДНК, делает эти полосы хорошо заметными при просмотре под ультрафиолетовым облучением (рис. 1).
Рис. 1. Стадии ПЦР
Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР-анализа необходимым условием является соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.
Взятие материала для ПЦР-исследования следует проводить в одноразовых неталькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). При взятии соскобов и смывов следует пользоваться одноразовыми стерильными зондами с повышенной адсорбцией (имеющими на конце щеточку), так как они отбирают оптимальное количество материала.
Соскобы и смывы со слизистых оболочек носа, ротовой полости, влагалища, конъюнктивы отбирают в одноразовые пластиковые микропробирки — эппендорфы — объемом 1,5 мл, в которые разлито по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Желательно не использовать зонды с ватными наконечниками. Следует также избегать отламывания кончика зонда в пробирку с физиологическим раствором, так как это затрудняет дальнейшую обработку и повышает риск перекрестной контаминации проб. Для получения необходимого количества материала достаточно вращать зонд в пробирке в течение 1-2 минут, избегая разбрызгивания жидкости. Проба должна быть мутной на вид, а при отстаивании в ней должен образовываться небольшой осадок.
Забор крови проводят одноразовой иглой в одноразовый шприц или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц, кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Возможно использование вакуумных систем («Vacuette») для забора крови. Для исследования можно предоставить сыворотку крови: пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка, затем центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 минут и переносят в количестве не менее 1 мл в стерильные эппендорфы объемом 1,5 мл.
Сперму отбирают в стерильные одноразовые пробирки или флаконы.
Моча. Отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-40 мл в стерильный сухой флакон или пробирку.
Фекалии. Отбирают пробы массой 1-3 грамма из предварительно продезинфицированного и вымытого лотка, одноразовыми лопаточками переносят в стерильный флакон.
Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры или в чистые стеклянные или пластиковые емкости.
Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом. При хранении материала более суток его необходимо заморозить при Т минус 20°С.
Наиболее часто встречающимися заболеваниями у кошек и собак являются конъюнктивит, ринотрахеит, а также энтерит. Для того чтобы выяснить этиологию заболевания, требуется провести качественную лабораторную диагностику.
Причиной коньюнктивитов или инфекций верхнего респираторного тракта у кошек может быть инфицирование следующими микроорганизмами: герпесвирус типа 1 (FHV1), калицивирус кошек, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococ-cuc aureus, Brohaemolytic streptococcic и Salmonella tephimurium.
Наиболее частой причиной, по данным различных авторов и методов исследования, являются герпес-вирус типа FHY1 (от 10% до 34%) и калицивирус кошек (от 20% до 53%). Chlamydia pcittaci (от 10% до 35%).
Герпесвирусная инфекция, ассоциирована абортами, высокой смертностью новорожденных (инфицирование почти 60% случаев) с признаками интерстициальной пневмонии.
Калицивирус — тяжело протекает у котят, в то же время 25-80% переболевших взрослых животных становятся носителями и являются источником заражения, передавая вирус через слюну.
Панлейкопения — контагиозное вирусное заболевание кошек, характеризующееся резким падением уровня лейкоцитов, гастроэнтеритом, ринитами с конъюнктивитами, высокой смертностью (30-90 % заболевших котят).
Настоящим бичом для питомников является инфекционный перитонит кошек — тяжелое заболевание, возбудителем которого является РНК-содержащий высокопатогенный вирус. Вирус реплицируется в миндалинах и энтероцитах тонкого кишечника, рассеиваясь по организму через макрофаги и моноциты. Коронавирусы с низкой вирулентностью вызывают энтериты средней тяжести, чаще всего у котят после отъема от матери. Высоковирулентный коронавирус может привести к развитию сухого или выпотного перитонита. Перитонит часто сопровождается почечной недостаточностью, печеночными и неврологическими симптомами.
При инфицировании аденовирусами обоих типов и вирусом чумы плотоядных у собак проявляется общий комплекс симптомов: лихорадка, конъюнктивиты и ринотрахеиты, расстройство желудочно-кишечного тракта, поражение нервной системы.
При чуме плотоядных клинические признаки могут включать серозно-слизистые назальные и конъюнктивальные выделения, кашель, одышку, пневмонию, рвоту и понос, а также лихорадку и гиперкератоз.
Аденовирус плотоядных. Возбудитель — ДНК-содержащий аденовирус плотоядных первого типа (вызывает инфекционный гепатит плотоядных) и второго типа (вызывает аденовироз собак). Наблюдаются лихорадка, апатия, анорексия, жажда, рвота и понос, болезненность брюшной стенки при пальпации. Иногда развиваются конъюнктивит, кератит, светобоязнь. Могут быть точечные кровоизлияния на слизистой оболочке и коже. Редко наблюдаются неврологические нарушения.
Все перечисленные заболевания имеют высокий индекс контагиозности и ассоциированы с высокой смертностью среди щенков, от парвовирусного энтерита погибает 10-50% заболевших щенков, при инфицировании не вакцинированных щенков вирусом чумы плотоядных смертность доходит до 100%.
Токсоплазмоз. Возбудитель — простейшее Toxoplasma gondii. Размножение возбудителя происходит у кошек на стенках кишечника. С калом они выделяют во внешнюю среду ооцисты.
Промежуточными хозяевами могут быть кошка, собака, человек. У кошек развитие паразита в кишечнике обычно проходит бессимптомно, изредка вызывая «легкий» понос.
Тканевые цисты могут вызывать анорексию, угнетение, кератиты, желтуху, рвоту, понос и неврологические симптомы в зависимости от пораженных органов. У собак клинические симптомы зависят от пораженных органов: могут наблюдаться неврологические нарушения (тремор, атаксия, паралич) или токсоплазмозный миозит (нарушение походки, атрофия мышц, ригидность), а также миокардит и гепатит.
Хламидиоз и орнитоз. Возбудители у кошек — Chlamydophila felts, у собак — Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, у тех и у других заболевание может вызывать Ch. psittaci. У птиц — Ch. psittaci.
У кошек заболевание проявляется в основном в форме гнойных и негнойных конъюнктивитов и кератитов, также могут наблюдаться ринит, пневмония, вагинит, аборты и бесплодие. У котят встречается неонатальныи хламидиозный конъюнктивит. У собак симптомы разнообразны и проявляются воспалительными заболеваниями конъюнктивы, половых органов, гастритами, артритами, абортами и бесплодием. Есть данные о роли хламидий в патогенезе атеросклероза у собак.
Микоплазмоз. Возбудители — микроорганизмы рода Mycoplasma. Протекает с признаками бронхопневмонии, кератоконъюктевитов и кератитов.
Вирусный иммунодефицит кошек. Иммунодефицит кошек — тяжелое заболевание, вызываемое вирусом из семейства Retrovoridae, рода Lentivirus. Вирус поражает иммунную и нервную системы. Обладает тропизмом к Т-лимфоцитам. В результате иммунодепрессии организм становится беззащитным против бактерий, грибов, вирусов и погибает от вторичной инфекции.
Клинические признаки развиваются медленно, и заболевание чаще регистрируется среди кошек 6-10 лет.
И.М. Донник, член-корреспондент РАСХН, д.б.н., профессор, Н.А. Пелевина, м.н.с, О.Г. Бодрова, м.н.с,
ГНУ Уральский государственный научно-исследовательский ветеринарный нститут РАСХН
Источник
Инфекции у кошек встречаются достаточно часто и представлены бактериальными микроорганизмами, патогенными грибками, вирусами, микоплазмами или риккетсиями. Некоторые заболевания инфекционного характера представляют опасность не только для питомца, но и для человека.
Лечение любого из заболеваний, вызванного патогенными микроорганизмами или вирусами, должно назначаться сразу после появления характерных симптомов. В противном случае драгоценное время будет упущено, а осложнения в организме животного приводят к нарушениям всех жизненно-важных органов.
Вирусные инфекции у кошек
Вирусные инфекции у кошек приводят к серьезным заболеваниям, нередко становясь причиной летального исхода. Заболеть инфекцией питомец может не только от больного животного, но и от вирусоносителей, животных без явных признаков заболевания, но являющихся переносчиками вируса, выделяя его в окружающую среду посредством каловых масс, урины, истечениями из носоглотки и гнойников.
В эпизоотологии насчитывается большое количество различных вирусных микроорганизмов, но наиболее распространенными среди семейства кошачьих, являются следующие:
Бешенство. Острая вирусная болезнь, протекающая с большими осложнениями, поражает нервную систему и в подавляющем большинстве случаев становиться причиной гибели животного. Вирус бешенства относиться к семейству Миксовирусов и является зооантропозоонозом (заражение происходит как у всех теплокровных животных, а также человека). Основной источник бешенства – дикие животные (лисы, волки, шакалы), а также бездомные кошки и собаки. Во время укуса бешенного животного происходит проникновение вируса вместе со слюной в кожные покровы. Инкубационный период составляет от 3 до 6 недель, а у маленьких котят не более 5 дней. Примечательно, что у животного за 8 дней до начала проявления характерной симптоматики, вирус бешенства можно обнаружить в слюне. Возможность заражение от кошек человека исключать не стоит, даже при атипичной форме течения (животное не проявляет агрессию, а наоборот, становиться слишком ласковым).
Кальцивироз. Инфекционное вирусное заболевание, протекающее остро, характеризуется лихорадочными состояниями и поражением респираторного тракта. У животных с сильной иммунной защитой после перенесенной кальцивирусной инфекции формируется стойкий иммунитет. Возбудителем заболевания является представитель семейства Caliciviridae, устойчивый к воздействию температур. Источник заражения – больные животные, выделяющие патогенные микроорганизмы в окружающую среду вместе с фекалиями, секретом из носовых полостей и ротовой полости. Период от проникновения возбудителя в организм до начала проявления первых характерных признаков составляет от 2 до 5 дней. Калицивирусная инфекция кошек протекает со схожей симптоматикой с ринотрахеитом, но отличительной чертой является образование язвенных поражений на языке, мягком небе, наружной части мочки носа. Нередко сопровождается развитием острых ринитов, воспалениями легких и поражением бронхиального дерева.
Панлейкопения или парвовирусная инфекция у кошек. Заболевание, чаще именуемое инфекционным гастроэнтеритом или же чумкой. Высококонтагиозный недуг, сопровождающийся лихорадочными состояниями у кошек, функциональными расстройствами пищеварительного тракта (поносом, извержением желудочного содержимого), недостаточностью миокарда и сосудов. В подавляющем большинстве клинических случаев становиться причиной гибели как молодых, так и взрослых кошек. Возбудитель – парвовирус, которому присуща некая сезонность во вспышках заболевания. Не смотря на то, что инфекция поражает всех кошек, наиболее восприимчивыми являются молодые животные и котята, по причине не достаточно развитой иммунной защиты организма. В роли источника вирусного заболевания выступают больные кошки и переболевшие недавно. Вместе с экскрементами и извержениями желудочного содержимого, парвовирус выделяется в окружающую среду. Период инкубации составляет от 2 до 10 дней. Характерными признаками инфекционного гастроэнтерита являются апатия животного, резкое ухудшение в состояние, поднятие температуры (лихорадочные состояния), рвота и понос. С течением заболевания в каловых массах и желудочном содержимом появляются слизь и прожилки крови.
Вирусный ринотрахеит. Заболевание вызванное вирусом из семейства Herpesviridae. Распространенная вирусная инфекция, поражающая кошек не зависимо от породы и возраста. Характерными особенностями течения инфекции являются – поражение носоглотки, верхних дыхательных путей и глаз. Источник заражения – больные и переболевшие кошки, являющиеся носителем вируса на протяжении 9 месяцев после выздоровления. Выделение патогенного микроорганизма в окружающую среду происходит с любыми секретами организма (истечения из половых органов, носо и ротоглотки, спермой и фекалиями). Герпесвирусная инфекция без особого труда проникает в молоко кормящей кошки, что приводит к инфицированию новорожденных котят.
Инфекционный кошачий перитонит. Бич кошачьих питомников и владельцев нескольких животных. Реже риску инфицирования подвергаются кошки, являющиеся единственными представителями семейства кошачьих. Кишечная инфекция у кошек вызвана вирусом, относящимся к семейству Коронавирусов. Опасность инфекционного кошачьего перитонита заключается в том, что заблаговременно выявить вид коронавируса, приводящего к тяжелым последствия достаточно сложно. В подавляющем большинстве коронавируные инфекции вызывают расстройство пищеварения у котят (редко когда животное погибает). Но вирус инфекционного перитонита является смертельно опасным. Период от проникновения чужеродных микроорганизмов в организм животного, до начала проявления характерной симптоматики, составляет от 2 до 3 недель. Выделение возбудителя происходит через фекалии, мочу, кровь, истечения из глаз, ротовой и носовой полости.
Ротавирусная инфекция у кошек. Инфекция спровоцированная РНК-содержащим вирусом из семейства Ротавирусов. Способен поражать пищеварительный тракт, особенно проявляя тропизм к тканевым структурам тонкого кишечника. Период инкубации составляет от 20 часов до 4 суток. Чаще заболеванию подвергаются маленькие котята, и летальный исход наблюдается также у котят, хотя и достаточно редко (в случае если малыш необычайно слаб). Взрослые кошки болеют порядка 7 дней. Характерными симптомами ротавирусной инфекции у кошек являются – болезненность в области органов брюшной полости, лихорадочные состояния и частые извержения желудочного содержимого, профузный понос со слизью, а в некоторых случаях и кровью. При отсутствии своевременного лечения животное может страдать от обезвоживания организма.
Протозойные инфекции
Инфекционные заболевания у кошек могут быть вызваны простейшими микроорганизмами, относящимися к царству одноклеточных эукариотов. Протозойные одноклеточные не могут самостоятельно обеспечивать свою жизнедеятельность посредством выработки веществ органического характера. Поэтому для выживания они поглощают органику, выработанную другими животными организмами. Наиболее распространенными протозойными инфекциями семейства кошачьих являются:
Пироплазмоз. Гемопротозойная инфекция, проявление которой характеризуется повышением температурных показателей тела, желтушностью видимых слизистых оболочек и выделением гемоглобина в моче. Возбудитель заболевания – простейшие, паразитирующие в красных кровяных тельцах (эритроцитах). Переносчик инфекции – иксодовый клещ, активность которого отмечается в период с весны по осень. Проникая в кровяное русло при укусе клеща, бабезии размножаются в эритроцитах, постепенно вызывая их разрыв. Пироплазмоз у кошек является достаточно редким заболеванием.
Кокцидиоз. Паразитарные простейшие, относящиеся к роду Cystoisospora, повреждающие слизистые оболочки кишечного тракта. При заражении кокцидиозом у кошки отмечается болезненность в области петель кишечника, отечность, анорексия, расстройство стула (понос с кровью). Заражение животного происходит алиментарным путем при попадании зараженных частиц фекалий или же воды в корма.
Токсоплазмоз. Инфекционное заболевание, вызванное кокцидиями Toxoplasma gondii. Представляет собой внутриклеточного паразита, поражающего в основном представителей семейства кошачьих. Отмечается два цикла развития токсоплазм – в оболочках пищеварительного тракта, а после выхода цист вместе с каловыми массами, а также в тканевых структурах внутренних органов (мышцах, миокарде, нервных волокнах с повреждениями центральной нервной системы). Признаками развития токсоплазмоза у кошек является дисфункция нервной системы, сопровождающаяся параличами, отказ от приема пищи, расстройства стула. У беременных самок кокцидии данного рода способны провоцировать аборты. Опасность представляет токсоплазмоз не только для кошек, но и других животных, а также человека.
Лямблиоз. Инфекция вызвана простейшими, которые при проникновении в кровяное русло вызывают повреждения ворсинок эпителия в тонком кишечнике, нарушая процессы абсорбции и деятельность ферментов. В результате нарушений у кошки проявляются воспалительные процессы (энтероколиты) и нарушается общая моторика пищеварительной системы. Характерные симптомы лямблиоза – отказ от приема пищи, сильное истощение, повышение температуры тела, длительная диарея, сопровождающаяся примесями слизи и крови, а также неприятным запахом.
Микоплазмоз. Заболевание инфекционного характера, вызванное одноклеточными микроорганизмами, поражающими дыхательную систему. В результате заражения микоплазмозом происходит воспаление слизистой оболочки носа. Научно доказано, что при бронхитах и воспалениях легких, микоплазмы принимают активное участке в процессе разрушения клеточных структур слизистой оболочки респираторной системы. Заражение происходит воздушно-капельным путем.
Хламидиоз. Заразное заболевание, проявляющееся у кошек воспалением роговицы и конъюнктивитом. В редких случаях при низких защитных силах организма, хламидиоз перетекает в воспаление легких. Поражают хламидии не только дыхательную систему, но и половые органы. Важно отметить, что кошки с инфицированными половыми путями хламидиозом, могут стать бесплодными в результате тотального нарушения структур слизистой оболочки влагалища. Новорожденные котята могут погибнуть при инфицировании данной протозойной инфекцией. При инфицировании хламидиозом взрослых животных, отмечаются отеки слизистой носовых ходов и глаз, возможно развитие отека легких, но это случается крайне редко. Заражение хламидиозом происходит при поедании домашним питомцем мышей и крыс, являющихся переносчиками инфекции.
В целях профилактики протозойными инфекциями, необходимо сдавать анализы кошки, для опровержения или же подтверждения заболевания. Важно также проводить своевременные обработки от накожных паразитов (блох, клещей и власоедов), что позволяет снизить риски развития патологических состояний. Не стоит забывать и о гигиене жилища, в котором находиться животное (мыть и чистить кошачьи туалеты, миски для корма и воды, а также стирать с дезинфицирующими растворами лежанки).
Патологии бактериального происхождения
Второе место после вирусных инфекций по степени опасности занимают бактериальные заболевания. Единственным главным отличием является то, что против вирусных инфекций не существует специфического лечения, кроме вакцинаций. Бактериальные заболевания лечатся антибиотикотерапией. Но опасность от патогенной микрофлоры не меньше, чем при вирусной инфекции. Основными заболеваниями бактериальной природы у кошек являются:
Гемобартонеллез. Бактериальный недуг, именуемый также инфекционная анемия. Встречается исключительно у представителей семейства кошачьих. Возбудитель заболевания – гемобартонелла фелис, атакующая красные кровяные тельца в организме, паразитируя на их поверхности. В результате повреждения эритроцитов, происходит резкое падение гемоглобина в крови. У больного питомца отмечается желтушность видимых слизистых оболочек, появление крови в урине. Симптоматика гемобартонеллеза выражается в сильной вялости животного, отказа от приема пищи. В некоторых случаях отмечают повышение температуры тела, почечная и печеночная недостаточность, нарушение работы сердца и селезенки.
Лептоспироз. Инфекция редко поражает домашних кошек, но так как заболевание является острым природно-очаговым и опасным даже для человека, риск заражения кошки достаточно велик. В подавляющем большинстве болеют молодые и слабые животные, получившие заражение лептоспирами из сырого мяса или же при повреждении целостности кожного покрова при драках с другими животными. Также заражение может произойти при поедании кошкой грызунов, являющихся переносчиками и своеобразными резервуарами для лептоспир. Болезнь Вейля сопровождается слабостью питомца, снижением аппетита и поражением пищеварительного тракта.
Сальмонеллез. Распространенная бактериальная инфекция, спровоцированная микроорганизмами рода Salmonella. Заражение домашнего животного происходит алиментарным путем при поедании необработанных термически зараженных продуктов, а также мяса диких пернатых. Сальмонеллез характеризуется такими симптомами как воспаление желудка и отделов кишечника, профузный понос (иногда с кровью и слизью), резкое истощение животного, повышение температуры тела. При инфекции для кошек применяют антибиотики, подобранные индивидуально после проведения лабораторных анализов и бактериальных посевов, подтверждающих сальмонеллез.
Стафилококкоз. Недуг спровоцированный патогенными бактериями рода Staphylococcus. Возникать может как самостоятельное заболевание, но также может и сопутствовать при вирусных поражениях, осложняя течение патологии. Существует ряд стафилококков, являющихся условно-патогенными и населяют кожные покровы животного постоянно. При резком снижении иммунитета, инфекция активируется, начинается повышенный рост и размножении стафилококков, вызывая серьезные осложнения. Симптомы стафилококковой инфекции зависят от места локализации патогенной микрофлоры и состояния здоровья животного. Может проявляться как кишечная инфекция, пиодермия, абсцесс или флегмона.
Огромную роль в предотвращении вирусной, протозойной или бактериальной инфекции у кошек, играет своевременная профилактика. Большинство инфекций поражают слабых и истощенных животных с недостаточным уровнем иммунной защиты. Поэтому, прежде всего, необходимо обеспечить кошку всеми необходимыми питательными элементами, витаминными и минеральными комплексами. Также важно проводить своевременные вакцинации согласно календарю прививок качественными препаратами. Не стоит забывать и о противопаразитарной обработке.
Источник
