Анализ крови на клещевой энцефалит и боррелиоз методом пцр

Что страшнее, жить в неведении и подозревать, или сдать анализы, и развеять сомнения? Несомненно, анализ крови на боррелиоз специфичен, но для людей, проживающих в эндемичных данному заболеванию районах жизненно необходим! Клещевой боррелиоз (болезнь Лайма) или клещевой энцефалит серьезное заболевание, требующего незамедлительного лечения. А как лечить, если не знаешь что?

Как понять, что необходима диагностика?

Как и у любой болезни у боррелиоза имеется ряд симптомов, согласно которым можно сделать вывод о необходимости провести анализ на боррелиоз. Несомненно, факт посещения леса в эндемичном районе не является основанием для визита к врачу, а вот факт снятия с тела клеща либо его укус вполне. Кроме того, бывает так, что человек не чувствует укуса и он может пройти незаметно. В такой ситуации необходимо обращать внимание на наличие симптомов, и бить тревогу необходимо как можно раньше.

Мигрирующая эритема на теле ребенка

Основные симптомы:

мигрирующая эритема (покраснение в месте укуса);

повышение температуры до 40°;

головные боли;

тошнота;

нарушение памяти;

координационные изменения.

Обычно, данные проявления начинают приносить человеку беспокойства через несколько дней после укуса клеща, а непосредственно увеличение вредоносной инфекции в организме начинается через 1,5-2 недели. По этой причине анализ крови на энцефалит и боррелиоз в первые 10 дней после укуса не будет информативным.

В лучшем случае в крови будет обнаружено крайне малое содержание боррелий и анализ придется пересдавать повторно через 2 недели.

Боррелий – род бактерий семейства спирохет, представители данного рода являются возбудителями боррелиоза.

Что сдавать, где и почем?

Как правило, такая процедура, как анализ на энцефалит или боррелиоз подразумевает под собой взятие крови из вены. Обычно большая часть потенциальных больных спокойно переносит подобную процедуру. После взятия крови больному на место забора накладывают спиртовой тампон, который необходимо держать на месте прокола до полной остановки крови (в среднем 3-5 минут).

Помимо забора крови у человека, врачам, для постановки диагноза требуется изучение непосредственно самого клеща. Данная процедура проводится в специализированных учреждениях, но обычно сложность вызывает доставка клеща на анализ, после того как он был обнаружен и снят с человека, так как укушенный человек забывает о том, что клещ может быть полезным при изучении.

Сдать анализ на энцефалит можно в любой поликлинике, но желательно, чтобы учреждение помимо энцефалита определяло и наличие боррелиоза, так как зачастую клещ является носителем двух заболеваний.

Цена на проведение такого исследования колеблется в районе 500-1500 рублей и напрямую зависит от времени готовности результатов, и клиники. Если анализ берется сразу на два заболевания, то цена может достигать 2 тыс. рублей.

Анализы на боррелиоз не имеют жестких требований в подготовке, но существует несколько рекомендаций, выполнение которых позволит повысить точность результата.

Так, потенциальному больному не рекомендуется употребление пищи за 8-9 часов до процедуры. Так как кровь сдается натощак, крайний прием пищи должен быть вечером. Алкоголь желательно не употреблять за сутки до сдачи крови, а вот курить можно, но за полчаса до забора материала желательно воздержаться от этой пагубной привычки.

Кроме того, для определения наличия заболевания анализа крови может быть недостаточно. В таком случае возможен анализ по методу ПЦР (забор спинномозговой жидкости). Однако у него имеются противопоказания и не всем пациентам допустимо его делать.

Процедура забора спинномозговой жидкости проста, но достаточно болезненна. Получение жидкости происходит в стерильном помещении, так как попадание малейшей инфекции в спинной мозг будет иметь плачевные последствия для человека.

Данный анализ будет боле информативен, так как биоматериал помещается в специальную емкость, где происходит выращивание инфекции (если она имеется).

Когда результат и что он означает?

Как правило, анализ на энцефалит и боррелиоз подготавливается в течение суток, и до вечера пациент получает заключение с результатами, но ведь их еще необходимо расшифровать, что может сделать любой инфекционист.

Но ничего сложного в обилии цифр нет, поэтому предварительную расшифровку можно сделать самостоятельно.

Анализы на боррелиоз могут иметь в заключении несколько вариантов, а именно несколько значений содержания антител IgM и IgG.

В частности, отрицательные антитела IgM и IgG свидетельствуют об отсутствии инфекции в организме. Положительный IgG и отрицательный IgM говорит о наличии заболевания в хронической стадии, как правило, лечение не требуется.

Отрицательный IgG и положительный IgM говорит об острой стадии болезни, а положительные антитела IgM и IgG об обострении. В данных случаях лечение необходимо.

Таким образом, анализы на боррелиоз и энцефалит являются важной составляющей успешного лечения, тот факт, что их цена достаточно демократична делает их доступность максимальной, что в свою очередь снижает риск развития болезни у небогатых слоев населения.

Источник

Информация об исследовании

Исследование иксодового клеща методом ПЦР на наличие генетического материала возбудителей боррелиоза (болезни Лайма), вирусного клещевого энцефалита, моноцитарного эрлихиоза, гранулоцитарного анаплазмоза. Формат представления результатов качественный.

Возбудитель клещевого энцефалита – РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae. Заражение происходит трансмиссивным путем при укусе клеща, инфицированного вирусом. В редких случаях возможно заражение алиментарным путем: при употреблении в пищу не прошедших термическую обработку продуктов из молока коров или коз, инфицированных вирусом. Возбудитель не передается от человека человеку.

Инфекция поражает клетки нервной ткани, в том числе оболочку головного мозга, серое и белое вещество, спинной мозг, а также клетки других тканей. Этим обусловлено множество форм клинического проявления заболевания. Начинается болезнь, как правило, остро со стремительным нарастанием выраженности симптомов:

чувство озноба из-за высокой температуры (38–39 оС);
сильная слабость, сонливость, заторможенность;
боли в мышцах шеи, спины, поясничной области, рук и ног;
подергивания или дрожь конечностей;
возможно чувство онемения конечности без потери двигательной функции;
ригидность затылочных мышц (невозможность согнуть голову и достать подбородком до груди).

Наиболее тяжелые формы клещевого энцефалита могут начинаться появлением бреда, внезапной потерей сознания, генерализованным судорожным синдромом, как при эпилепсии.

Выявление возбудителя клещевого вирусного энцефалита в клеще позволит своевременно провести экстренную профилактику инфекции. Применение противоэнцефалитной сыворотки показано в срок не позднее 96 часов от момента укуса. При этом инкубационный период инфекции, как правило, составляет 7–12 дней от момента присасывания клеща, но может длиться до 35 дней.
Перечень административных территорий субъектов Российской Федерации, эндемичных по клещевому вирусному энцефалиту в 2019 г.:

https://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/71803714/

Возбудитель болезни Лайма – спиралевидная бактерия (спирохета) рода Borrelia. Большая часть случаев заражения происходит трансмиссивным путем при укусе клеща, инфицированного боррелиями. Также возможен алиментарный путь, при употреблении молока инфицированных животных (молочных продуктов), не прошедших термическую обработку. В редких случаях возможно заражение из-за втирания в кожу фекалий инфицированного клеща при расчесах места укуса. Боррелии могут передаваться от инфицированной матери плоду через плаценту.

Лайм-боррелиоз – это самая распространенная болезнь на Европейском континенте, передаваемая иксодовыми клещами. Болезнь Лайма может длительное время протекать бессимптомно. Первые жалобы на недомогание могут появиться спустя месяцы или годы после заражения. Боррелии способны поражать различные органы и системы органов: суставы, миокард, органы центральной нервной системы и др. Этим обусловлена неспецифичность симптомов. К наиболее частым относят жалобы на боли в суставах.

Характерное для боррелиоза клиническое проявление – блуждающая эритема. Это покраснение на коже вокруг места укуса клеща, которое со временем расширяется и выглядит как кольцевидное красное пятно, в центре которого кожный покров сохраняет естественный цвет. Блуждающая эритема появляется в первые дни после укуса, однако ее отсутствие не исключает факта заражения боррелиями.

Возбудитель гранулоцитарного анаплазмоза человека – бактерия Anaplasma phagocytophilum, которая поражает гранулоциты – белые клетки крови. Заражение происходит трансмиссивным путем при укусе клеща, инфицированного анаплазмами. Инфицированность клещей анаплазмозом в европейской части России достигает 13,4%.

Клинические проявления неспецифичны и зависят от возраста человека, а также сопутствующих заболеваний. Как правило, это лихорадка, слабость, потливость, головная боль, боль в мышцах и суставах. Реже – кашель, тошнота и рвота, диарея. У инфицированных отмечают увеличение крупных лимфатических узлов, поражение почек, увеличение печени и селезенки. Возможно также воспаление оболочек головного и спинного мозга.

Инкубационный период в среднем составляет 14 дней. Болезнь протекает в тяжелой форме у пожилых людей и лиц с ослабленным иммунитетом.

Возбудители моноцитарного эрлихиоза – бактерии, относящиеся к роду Ehrlichia. Они попадают в организм человека со слюной клеща, проникают в кровоток и начинают размножаться в моноцитах (одной из разновидностей белых клеток крови) и в эпителиальных клетках, выстилающих внутреннюю поверхность кровеносных сосудов. Позже поражаются клетки других органов и тканей.

Симптомы эрлихиоза неспецифичны и схожи с симптомами гранулоцитарного анаплазмоза. При тяжелом течении болезни отмечают поражение кожи, печени, почек, центральной нервной системы, костного мозга.

Подготовка к исследованию

Как можно быстрее удалите присосавшегося клеща с помощью нитки, пинцета или специального приспособления.

Поместите клеща с кусочком влажной ваты в герметично закрывающуюся емкость из пластика или стекла. Контейнер с живым клещом рекомендуется держать в холодильнике при +2…+8°С, допускается хранение в любом другом прохладном месте.

Исследование мертвых (поврежденных) клещей возможно только при условии хранения контейнера в холодильнике при температуре +2…+8°С не более 5 суток.

Использованная литература

Клещевой вирусный энцефалит у взрослых. Клинические рекомендации Национального научного общества инфекционистов, 2014 г.
https://www.rospotrebnadzor.ru/about/info/predpr/news_predpr.php?ELEMENT_ID=14010&sphrase_id…
Болезнь лайма у взрослых. Клинические рекомендации Министерства Здравоохранения Российской Федерации, 2016 г.
Климова Ю.А. и соавт. Гранулоцитарный анаплазмоз человека// Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина, 2018 г.
Злобин В.И. Клещевые трансмиссивные инфекции // В.И. Злобин, Н.В. Рудаков, И.В. Малов. – Новосибирск: Наука, 2015. – 224 с.

Источник

Клещевой энцефалит – трансмиссивное вирусное заболевание с выраженной сезонностью, зависящей от периода активности иксодовых клещей, и природной очаговостью. Возбудитель – вирус клещевого энцефалита, относящийся к РНК-вирусам рода Flavivirus. В России клещевой энцефалит регистрируется в 46 субъектах, около 70% всех случаев заболевания приходится на Урал и Сибирь. Кроме того, вирус клещевого энцефалита широко распространен в Европе: прибалтийских странах, Чехии, Словакии, Австрии, Германии, Швеции, Норвегии и Финляндии, а также встречается в Казахстане, Монголии, Китае и Японии.

В течение эпидемического сезона в РФ ежегодно регистрируется около 3000 случаев заболевания, средняя летальность при клещевом энцефалите составляет 1,2%. Наиболее тяжелые его формы и летальность около 10% связаны с дальневосточным генотипом вируса, циркулирующем преимущественно на Дальнем Востоке.

Как и многие другие арбовирусные инфекции в 80–90% случаев клещевой энцефалит протекает в инаппарантной форме, в остальных случаях развиваются различные по степени тяжести варианты течения заболевания: лихорадка, вирусные менингит и энцефалит. Также выделяют полиомиелитическую форму заболевания. При неблагоприятном сценарии острая стадия инфекции переходит в прогредиентную (хроническую) форму. В большинстве случаев после очаговой энцефалитической формы развиваются стойкие нарушения деятельности ЦНС.

Показания к обследованию. Лихорадка, головная боль, боль в области мышц шеи и плечевого пояса, тошнота, рвота, гиперемия лица, шеи и верхней части туловища, возможные потеря сознания, бред, психомоторное возбуждение и судорожный приступ при наличии эпидемиологического анамнеза: присасывание клеща, посещение лесной зоны, употребление в пищу сырого козьего молока.

Дифференциальная диагностика

Другие иксодовые клещевые инфекции.
При хронической форме – заболевания ЦНС неинфекционной этиологии.

Материал для исследований

Сыворотка крови – выявление специфических АТ, изоляция вируса в культуре клеток;
плазма крови – выявление РНК вируса;
СМЖ – выявление РНК вируса, изоляция вируса в культуре клеток;
цельная кровь – изоляция вируса в культуре клеток.

Этиологическая лабораторная диагностика включает изоляцию вируса с использованием культуральных методов, обнаружение РНК вируса и его АГ, обнаружение специфических АТ к возбудителю.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Культуральный метод, основанный на изоляции вируса из цельной крови, сыворотки крови, тканей мозга в культуре клеток (СПЭВ, Vero, клещевых клеточных культурах) и с использованием чувствительных лабораторных животных не применяется как рутинный метод в диагностических лабораториях, т. к. требует соблюдения мер биологической безопасности при работе, связанной с накоплением вируса, относящегося ко II группе патогенности.

Обнаружение АГ вируса в анализе на клещевой энцефалит методом ИФА в крови, взятой в инкубационный период, в случае отсутствия переносчика, позволяет провести адекватную профилактику клещевого энцефалита. В период острых клинических проявлений динамическое определение АГ в крови позволяет сделать прогноз о возможном переходе заболевания в хроническую форму, и в случае прогредиентного течения заболевания – дифференцировать клещевой энцефалит от заболеваний нервной системы другой этиологии.

Выявление РНК вируса методом ПЦР обладает высокой диагностической специфичностью, но недостаточной чувствительностью, которая не превышает 50% (относительно обнаружения специфических АТ методом ИФА); исследование проводят только в комплексе с выявлением специфических АТ. Для обнаружения РНК вируса используют пробы крови или СМЖ, взятые в первую неделю острой стадии заболевания или в случае уточнения развития персистенции вируса клещевого энцефалита, при расшифровке летальных исходов исследуют ткани мозга.

Определение специфических АТ IgM и IgG в сыворотке крови и/или в СМЖ выполняют преимущественно методом ИФА. Также для изучения в динамике титров нарастания гемагглютинирующих АТ в остром периоде заболевания используют метод РТГА. АТ IgM к вирусу клещевого энцефалита появляются с 3–4-го дня от начала заболевания, АТ IgG – в среднем на 10–14-й дни. Определенные сложности при лабораторном подтверждении диагноза, основанном на выявлении специфических АТ IgM и динамическом изменении титра АТ IgG в «парных сыворотках», возникают в случае заболевания вакцинированных лиц. Как правило, при этом можно наблюдать в основном нарастание АТ IgG. В этом случае целесообразно использовать методы прямого обнаружения возбудителя: изоляция вируса, обнаружение РНК вируса или его АГ.

Реакция нейтрализации (РН) является наиболее специфичной реакцией для обнаружения АТ. Ограничением для использования этого метода является необходимость работы с живым вирусом и соблюдения соответственных мер биологической безопасности.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований. Обнаружение РНК вируса клещевого энцефалита в крови и СМЖ пациента является основанием для предварительной постановки диагноза, выявление нарастания титров АТ к вирусу клещевого энцефалита в образцах крови, взятых в динамике (парные сыворотки), служит подтверждением этиологии заболевания.

Источник

[40-176]
ПЦР-диагностика «клещевых» инфекций

1870 руб.

Комплексное исследование крови, в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) выявляют возбудителей боррелиоза (Borrelia burgdorferi), моноцитарного эрлихиоза человека (Ehrlichia chaffeensis) и анаплазмоза человека (Anaplasma phagocytophilum).

Синонимы русские

ПЦР-диагностика боррелиоза, эрлихиоза и анаплазмоза.

Синонимы английские

Tick-borne diseases, polymerase chain reaction, PCR, Lyme disease, Human ehrlichiosis, Human anaplasmosis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевые инфекции представляют серьезную проблему для здоровья человека. Наибольшее значение имеют следующие клещевые инфекции:

болезнь Лайма (клещевой боррелиоз), возбудителем заболевания является спирохета Borrelia burgdorferi;
анаплазмоз, ранее известный как гранулоцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Anaplasma phagocytophilum.

В обоих случаях переносчиком инфекции являются иксодовые клещи Ixodess capularis, I. ricinus, I. pacificus и I. persulcatus. В России наибольшее значение имеют виды I. ricinus и I. persulcatus.

моноцитарный эрлихиоз, возбудителем заболевания является α-протеобактерия Ehrlichia chaffeensis. Переносчик инфекции – иксодовые клещи Amblyomma americanum.

Клещевые инфекции обладают рядом общих свойств:

Клиническая картина клещевых инфекций имеет много общих черт и неспецифична. Как правило, заболевание манифестирует в виде гриппоподобного синдрома с лихорадкой, головной болью, миалгией и артралгией. Дифференцировать клещевые инфекции между собой и с другими острыми инфекционными на основании только лишь клинической картины заболевания невозможно.
Некоторые иксодовые клещи инфицированы сразу двумя (реже тремя) патогенами (коинфекция) и могут приводить к развитию у одного и того же человека сочетанной инфекции. Чаще описаны случаи сочетанного боррелиоза и анаплазмоза.

Учитывая эти особенности, при подозрении на клещевую инфекцию необходимо комплексное лабораторное исследование, включающее анализы на все значимые возбудители клещевых инфекций.

Для лабораторной диагностики клещевых инфекций могут применяться несколько методов, в том числе серологические тесты, анализ окрашенного мазка крови, бактериологический посев, иммуногистохимический анализ и методы молекулярной диагностики. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это один из методов молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в крови) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Исследование обладает целым рядом преимуществ по сравнению с другими методами идентификации клещевых инфекций:

Быстрота получения результата. ПЦР – это один из самых быстрых на сегодняшний день методов идентификации возбудителя. Благодаря этому, метод ПЦР считается самым опитмальным способом диагностики острой инфекции.
Высокая чувствительность метода. Другой «быстрый» метод диагностики эрлихиоза – это окраска мазков крови по Гимзе. Обнаружение в мазках крови так называемых морул (скоплений микроорганизмов внутри лейкоцитов) – это характерный признак эрлихиоза и анаплазмоза. Морулы, однако, удается выявить не всегда: лишь в 3 % случаев моноцитарного эрлихиоза и 25-75 % случаев анаплазмоза. Чувствительность же ПЦР анализа достигает 85 % в отношении E. chaffeensis и 90 % в отношении A. phagocytophilum, что позволяет считать ПЦР самым точным среди быстрых методов диагностики клещевых инфекций.
Высокая специфичность (60-85 %). Специфичность метода особенно важна для дифференциальной диагностики клещевых инфекций. Известно, что, например, серологические тесты на клещевые инфекции часто дают ложноположительный результат из-за наличия перекрестных реакций, обусловленных общими антигенными свойствами указанных микроорганизмов. Так как в ПЦР используются специфические для каждого из микроорганизмов праймеры, вероятность ложноположительного результата гораздо ниже.

Следует отметить ограничения метода ПЦР:

Так как в реакции определяется ДНК как живых, так и погибших микроорганизмов, метод ПЦР не предназначен для оценки эффективности лечения: результат будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени после начала эффективного лечения.
Чувствительность ПЦР в меньшей степени, чем других методов идентификации возбудителя, зависит от приема антибиотиков. Наиболее точный результат, однако, будет получен при взятии образца биоматериала до начала лечения антибактериальными препаратами.

В диагностике клещевых инфекций также могут помочь дополнительные лабораторные исследования. Так, характерной чертой эрлихиозов является панцитопения и умеренное повышение печеночных трансаминаз. При тяжелом течении заболевания могу наблюдаться гипонатриемия, гипокальциемия, гипомагниемия, повышение креатинина и мочевины и признаки ДВС-синдрома.

Следует отметить, что иксодовые клещи также являются переносчиками вируса клещевого энцефалита. При необходимости это комплексное ПЦР-исследование может быть дополнено исследованием на вирус клещевого энцефалита.

Для чего используется исследование?

Для диагностики боррелиоза, моноцитарного эрлихиоза и анаплазмоза.

Когда назначается исследование?

При наличии у пациента гриппоподобного синдрома (лихорадки, головной боли, миалгии и артралгии) в сочетании с указанием на укус клеща;
при обнаружении у пациента с лихорадкой «лабораторных» признаков клещевых инфекций: панцитопения, повышение уровня печеночных трансаминаз.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

боррелиоз (Borrelia burgdorferi), моноцитарный эрлихиоз человека (Ehrlichia chaffeensis) и/или анаплазмоз человека (Anaplasma phagocytophilum).

Отрицательный результат:

норма.

Важные замечания

Исследование не предназначено для оценки эффективности лечения заболевания.

Также рекомендуется

[02-029] Клинический анализ крови с лейкоцитарной формулой и СОЭ

[06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)

[06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)

[07-092] Вирус клещевого энцефалита, IgM

[07-095] Вирус клещевого энцефалита, антиген (в ликворе)

Инфекционист, терапевт, врач общей практики.

Литература

Ismail N, Bloch KC, McBride JW. Human ehrlichiosis and anaplasmosis. Clin Lab Med. 2010 Mar;30(1):261-92.
Swanson SJ, Neitzel D, Reed KD, Belongia EA. Coinfections acquired from ixodes ticks. Clin Microbiol Rev. 2006 Oct;19(4):708-27.

Источник