Анализ крови на azf делеции

Метод исследования: ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Диагноз бесплодия у семейной пары ставится при условии отсутствия зачатия в течение 1 года регулярной половой жизни без контрацепции. Около 25 семейных пар из 100 не достигают беременности в течение 1 года, среди них 15 супружеских пар лечатся по поводу бесплодия, а около 5 семейных пар так и остаются бесплодными. Примерно 40% случаев приходится на мужское бесплодие, 40%— на женское, ещё 20% — на смешанное.

Среди основных причин мужского бесплодия выделяют:

• врожденные или приобретенные аномалии мочеполовых органов (например, дефекты строения семенников, перекручивание яичек, травмы полового органа);
• воспаление, инфекции мочеполовой системы (прежде всего, ИППП);
• повышение температуры в мошонке (например, вследствие варикозного расширения вен яичка);
• гормональные нарушения (например, дефицит тестостерона);
• нарушения иммунной системы (например, антиспермальные антитела в эякуляте);
• генетические нарушения.

Генетические факторы обуславливают, по крайней мере, 30—50% всех случаев тяжелых форм бесплодия у мужчин.

Среди генетических причин мужского беслодия выделяют:

1. хромосомные аномалии (например, синдром Клайнфельтера)
2. микроделеции (небольшие потери участка) Y-хромосомы, захватывающие регион, названный «фактор азооспермии» (AZF).
3. и другие (более редкие)

Делеции AZF-локуса связаны с различной степенью нарушения образования сперматозоидов от умеренного снижения до практически полного отсутствия половых клеток в семенных канальцах – синдром клеток Сертоли (СКС). При нарушении сперматогенеза (согласно определению ВОЗ) различают: олигоспермию (концентрация сперматозоидов < 20 млн/мл), азооспермию (отсутствие сперматозоидов в эякуляте), когда концентрация сперматозоидов не превышает 5 млн/мл говорят об олигоспермии тяжелой степени.

Микроделеции локуса (участка) Y хромосомы обнаруживаются в 10-15 % случаев при азооспермии и в 5–10 % случаев при олигозооспермии тяжелой степени. Выявление микроделеций AZF-локуса позволяет оценить вероятность обнаружения сперматозоидов при биопсии яичка, что необходимо для выбора правильной тактики лечения. В определенных случаях, возможно преодоление бесплодия с помощью вспомогательных репродуктивных технологий, а в других (более редких) случаях, выполнение экстракорпоральных методов оплодотворения будет иметь неблагоприятный прогноз. Кроме того, выявление микроделеций AZF-локуса позволяет оценить, есть ли риск, при успешной попытке зачатия, рождения у пациента сыновей с подобным диагнозом.

Молекулярно-генетический анализ микроделеций Y-хромосомы позволяет установить причину бесплодия и имеет большое значение при целесообразности применения методов по преодолению бесплодия.

Внимание! Перед проведениям данного анализа рекомендовано исследование: Спермограмма (код услуги 110401). Данные спермограммы необходимы для заполнения анкеты в направительном бланке.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

• В комплексе диагностических методов при обследовании бесплодной пары;
• При планировании вспомогательных репродуктивных технологий в рамках комплексного клинико-генетического обследования;
• Для решения вопроса о выборе адекватных способов преодоления бесплодия;
• Азооспермия/ олигозооспермия тяжелой степени (< 5 млн сперматозоидов/мл эякулята);
• Для оценки вероятности выделения сперматозоидов для вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО/ИКСИ);
• Для оценки риска нарушений фертильности у сыновей мужчин с выявленными делециями AZF.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Для каждой мутации (делеции), если делеция не обнаружена, в бланке ответа в графе «Результат» вносят «Не обнаружено», в случае детекции делеции – «Обнаружено». В графе «Референсные значения» напротив этого параметра стоит значение «Не обнаружено».

Пример результата исследования. Мужское бесплодие. Генетическая диагностика азооспермии.

Внимание!

• При необходимости по результатам исследований оформляется заключение врачом-генетиком (код услуги 181037).
• Заключение врача-генетика проводится только для услуг, выполняемых в лаборатории CMD.
• Врач-генетик описывает результат в течение 10 календарных дней после готовности генетического исследования
• Заключение врача-генетика включает объяснение значения выявленного генотипа, возможные патогенетические механизмы, связанные с развитием тех или иных состояний, индивидуальные риски развития патологических состояний и рекомендации по предотвращению, диагностике и возможным подходам ведения пациента (по согласованию с лечащим врачом).

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации» от 21 ноября 2011 года, должны производиться врачом соответствующей специализации.

Исследование применяют для выявления 6 микроделеций AZF-региона Y-хромосомы- маркёра генетически обусловленного бесплодия у мужчин.

Мужское бесплодие – нарушение функции мужской репродуктивной системы. Наиболее распространенным и эффективным методом оценки мужской фертильности в настоящее время признана спермограмма. Однако этот метод не позволяет выявить причину нарушений. 30–50% случаев серьезных изменений показателей спермограммы обусловлены генетически. 

Наиболее часто встречающиеся генетические факторы, которые могут приводить к мужскому бесплодию — это делеции Y-хромосомы в регионе, названном «фактор азооспермии» (AZF). 

Локус AZF находится в эухроматиновой области длинного плеча Y-хромосомы, картирован в сегменте Yq11.22-23 и содержит большое количество генов, ответственных за формирование и развитие сперматозоидов. В этом регионе были обнаружены как крупные делеции, выявляемые с помощью цитогенетических методов, так и большое количество микроделеций. 

Следует учитывать, что микроделеции – это делеции, не выявляемые с помощью цитогенетического анализа, но они могут приводить к широкому спектру нарушений фертильности у мужчин: от незначительного снижения количества сперматозоидов до полного отсутствия половых клеток в семенных канальцах. Делеции AZF-локуса стоят на втором месте по частоте встречаемости среди всех генетических причин мужского бесплодия (после нарушений кариотипа). Микроделеции локуса Y-хромосомы обнаруживаются в среднем в 10-15 % случаев азооспермии и в 5–10 % случаев олигозооспермии тяжелой степени. 

Европейская ассоциация андрологов (ЕАА) рекомендует тестировать на наличие AZF-делеций всех мужчин с азооспермией и тяжелой олигозооспермией (<5 млн сперматозоидов/мл эякулята). 

Локус AZF условно разделен на три субрегиона: AZFa, AZFb и AZFс. В каждом субрегионе локализованы гены, вовлеченные в контроль сперматогенеза. Делеции, имеющие клинические проявления в виде тяжелой олигозооспермии и азооспермии, могут затрагивать один локус AZF или более. 

Для проведения данного вида исследований рекомендуется использовать определенные STS-маркеры (sequence-tagged sites – высококонсервативные уникальные последовательности ДНК), локализованные на длинном плече Y-хромосомы в различных областях AZF-локуса. Отсутствие у пациента какого-либо маркера или группы маркеров свидетельствует о делеции соответствующей области AZF-локуса 

Субрегион AZFa содержит гены – USP9Y (DFFRY) и DDX3Y (DBY). Маркеры, позволяющие выявлять делеции этого субрегиона, имеют обозначения sY84, sY86 и sY615. Считается, что даже одного неполиморфного STS-маркера достаточно для идентификации делеции в субрегионе AZFa, но увеличение количества маркеров повышает точность диагностики и поэтому рекомендуется использование хотя бы двух маркеров – sY84 и sY86. Делеции этого субрегиона встречаются с низкой частотой – примерно 5% от всех микроделеций Y-хромосомы. 

В субрегионе AZFb картирован ген RBMY, который является высококопийным геном (от 30 до 40 копий). Делеции локуса AZFb встречаются примерно в 16% среди всех микроделеций Y-хромосомы.

Делеции субрегиона AZFc встречаются чаще всего – до 60% всех микроделеций Y-хромосомы. В этом участке находится семейство генов DAZ (Deleted in Azoospermia – гены, делетированные при азооспермии). Для делеции b2/b4 субрегиона AZFc высокоспецифичны два маркера: sY254 и sY255, в случае этой делеции теряются все копии гена DAZ. 

Среди микроделеций Y-хромосомы в 15% случаев встречаются микроделеции сразу нескольких субрегионов. 

По литературным данным большинство микроделеций AZF-локуса представляют собой мутации de novo. Это может быть связано с индивидуальной склонностью к возникновению Y-микроделеций вследствие особенностей структуры Y-хромосомы, носительством каких-либо полиморфизмов, предрасполагающих к таким потерям. 

Однако, при одних и тех же типах делеций Y-хромосомы и даже идентичных микроделециях может наблюдаться вариабельность фенотипического проявления, что обусловлено влиянием большого числа генетических (хромосомные, геномные, эпигенетические изменения), а также негенетических факторов (инфекции, гипогонадизм, варикоцеле и т.п.), оказывающих влияние на сперматогенез. Кроме того, у пациентов с микроделециями AZF-локуса, имеется вероятность ухудшения состояния сперматогенеза с возрастом, в связи с чем, раннее выявление наличия генетических изменений в структуре генов этого региона Y-хромосомы, позволяет своевременно провести криоконсервацию сперматозоидов в молодом возрасте для их дальнейшего использования в циклах ВРТ.

Литература

1. Материалы фирмы-производителя тест-системы.  
2. Черных В.Б., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Ширшова Л.С., Чухрова А.Л., Ковалевская Т.С., Поляков А.В., Гоголевский П.А., Калугина А.С., Морина Г.В., Тогобецкий А.С., Здановский В.М., Гоголевская И.К., Крамеров Д.Н. Анализ микроделеций в локусе AZF у мужчин с бесплодием: совместный опыт исследований. Медицинская генетика. – М. 2003; Т.2, №8: 367-378..  
3. C. Krausz, L. Hoefsloot, M. Simoni and F. Tüttelmann EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Y-chromosomal microdeletions: state-of-the-art 2013. Andrology, 2014, 2, 5-19.  
4. Беляева Н.А., Глинкина Ж.И., Калинина Е.А. Современные аспекты проблемы мужского беспложия, ассоциированного с мутацией AZF локуса хромосомы Y. Акушерство и Гинекология. – М. 2012; №8-2. Электронная версия статьи.