Анализ крови на антитела к гриппу

Метод определения
Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (Real-time PCR).

Исследуемый материал
Соскоб эпителиальных клеток рото- и носоглотки

Определение РНК вируса гриппа в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.

Грипп – острая респираторная вирусная инфекция, передаваемая воздушно-капельным путем.

Возбудители гриппа – РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus.

Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют у большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовый барьер. Основной причиной возникновения эпидемий и пандемий гриппа является высокая вариабельность вируса вследствие изменений в его геноме. Это касается фрагментов, кодирующих поверхностные антигены вирусов типов А и В и определяющих их специфичность.

Вирусы Influenza А и B поражают преимущественно верхние отделы дыхательных путей: нос, горло, трахею и реже бронхи. Однако симптомы общей интоксикации при гриппе доминируют над умеренными катаральными проявлениями. Обычно заболевание сопровождается резким повышением температуры, мышечными и головной болями, сильным недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и слизистыми выделениями из носа. Для гриппа, обусловленного новым или значительно измененным вирусом (например, для гриппа птиц типа А(H5N1) и А(H7N9), реже А (H1N1) pdm 2009), характерно острейшее, молниеносное начало, развитие различных вариантов токсикоза (нейротоксикоза, инфекционно-токсического шока в сочетании с гемодинамическими расстройствами) и III степени ДВС-синдрома (гемокоагуляционного шока).

Диагностика инфекции осуществляется комплексно, на основании анамнестических данных о контакте с больными гриппом и характерной клинической картины. Подтверждение диагноза возможно с помощью лабораторных исследований, что целесообразно при наличии клинических проявлений гриппа, в эпидемический сезон роста заболеваемости острыми респираторными инфекциями, при тяжелом течении респираторных болезней.

В качестве базовых тестов могут быть использованы следующие лабораторные исследования: определение антигенов вируса гриппа в мазках слизистой носа и ротоглотки методом непрямой иммунофлуоресценции или иммунохроматографии; определение антител к антигенам вируса гриппа А/B в сыворотке крови методом ИФА. Результаты ИФА, как правило, оцениваются ретроспективно. Вследствие поздней диагностики они не влияют на коррекцию терапии, но применимы в научных целях и для эпидемиологического надзора и контроля за гриппом. Наиболее современным методом лабораторной диагностики гриппа является выявление РНК вируса методом ПЦР.

Максимального уровня специфичности и чувствительности достигают тесты на основе ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени, позволяющие обнаруживать в биологическом материале РНК возбудителя инфекции.

Аналитические показатели:

определяемый фрагмент – специфический участок нуклеиновой кислоты вирусов гриппа А (Influenza virus A) и гриппа В (Influenza virus B);

специфичность обнаружения – отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.

Аналитическая чувствительность:

вирус гриппа А (Influenza virus A) – 1х10^3 ГЭ/мл пробы;

вирус гриппа В (Influenza virus В) – 1х10^3 ГЭ/мл пробы.

Литература

Грипп у взрослых. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:57. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/909
Грипп у детей. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:43. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/172
Грипп у взрослых: методические рекомендации по диагностике, лечению, специфической и неспецифической профилактике. Под ред. академика, профессора А.Г. Чучалина, главного внештатного инфекциониста СЗФО проф. Т.В. Сологуб. — СПб.: Издательско-полиграфический комплекс «НП-Принт». 2014:192.
Яцышина С.Б., Творогова М.Г., Шипулин Г.А., Малеев В.В. Лабораторная диагностика гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции. Лабораторная служба. 2017;6(3):238-267. https://doi: 10.17116/labs201763238-267.

Источник

В разгар эпидемического сезона очень актуален вопрос диагностики гриппа. Это важно и необходимо для своевременного лечения заболевания, ведь болезнь может привести к различным серьезным осложнениям. Поэтому требуется проведение лабораторных исследований, включая анализ на грипп, во время сезонной вспышки заболевания.

Фото: проведение лабораторных анализов на вирус гриппа

Общий анализ крови

Для того чтобы поставить окончательный диагноз, обычно делают анализ крови на грипп. Терапевт предлагает его в случае предположения этой инфекции. Клинические симптомы дают возможность лишь заподозрить грипп, но только лабораторный анализ даст окончательный ответ. Сегодня медицина предлагает несколько видов анализов, которые могут определить природу болезни с высокой точностью.

Терапевт может получить много информации из общего анализа, но определить наличие вируса гриппа не получится. Однако, известно, что при таком заболевании появляются определенные изменения общей картины крови. В первые 24 часа после заражения будет повышенный уровень лейкоцитов. На следующий день проявится резкое снижение лейкоцитов.

Меняется также и лейкоцитарная формула. На фоне того, что лимфоцитов становится больше, количество нейтрофилов уменьшается. Несмотря на то, что показатель гемоглобина и эритроцитов будет в пределах нормы, СОЭ значительно повысится.

Дополнительные анализы

Появление гриппозных или других вирусных заболеваний во время эпидемии вынуждает терапевта провести диагностику. Поэтому дополнительно к общему анализу крови рекомендуется провести еще несколько манипуляций:

Биохимический анализ крови. При гриппе особых изменений наблюдаться в результате не будет. Повышение количества С-реактивного белка укажет на наличие воспалительного процесса в организме. Но такой анализ крови при гриппе сам вирус не выявит.
Специфический анализ на вирус гриппа. Для его проведения необходимо взять кровь из вены. Такое исследование подтвердит наличие вируса. Благодаря серологическому методу можно определить антигены вируса. Нарастание титра антител в 4 раза и более является подтверждением заражения гриппом. Недостатком этого анализа является потребность значительного количества времени для получение результата.
Иммуноферментный анализ. При помощи этого экспресс-метода можно быстро выявить вирус гриппа. Для этого берут мазки слизи и клетки из носоглотки. Затем полученный материал обрабатывают особым реактивом с метками. Наличие свечения при просвечивании ультрафиолетовым светом говорит о присутствии вируса в мазках.
Метод ПЦР. Он дает возможность быстро получить подтверждение наличия вируса. Для анализа берут мазки из носа и горла. Недостатком такого метода считается невозможность определить, жив ли вирус и соответственно является ли пациент еще заразным для окружающих.

Такие анализы обычно берут у пациентов во время эпидемии или при госпитализации. Особенно важно это сделать, если есть угроза развития серьезных осложнений.

ОРВИ и грипп признаны самыми распространенными заболеваниями верхних дыхательных путей инфекционного происхождения у детей. Именно анализ крови у ребенка при гриппе помогает подтвердить наличие вируса в организме. Своевременная диагностика даст возможность избежать осложнений или летального исхода в случае тяжелой формы болезни.

Вирус гриппа считается одним из самых опасных вирусов. В холодное время года его очень легко подхватить. Учитывая, что прогноз гриппа может быть неблагоприятным, так как в 10% случаев он переходит в пневмонию, рекомендуется своевременно сдавать анализы.

Интересное видео

Источник

Грипп, начавшийся в этом сезоне, опасен серьезными осложнениями, поэтому очень важно как можно раньше поставить точный диагноз, чтобы назначить адекватное лечение. И тем более важно отличить грипп от других респираторных инфекций.

В этом сезоне основным эпидемическим штаммом является пандемический вирус гриппа А/H1N1pdm09 «свиного» происхождения.

Также возможно заражение вирусом гриппа B и А/H3N2, а также инфицирование одним из 13 возбудителей ОРВИ, вызывающих гриппоподобные симптомы.

Каждый из вирусов имеет свои особенности, и заболевание требует индивидуального подхода к лечению. Грипп, вызванный вирусом A/H3N2 тяжело переносят дети до 5 лет, пожилые люди, лица с хроническими заболеваниями бронхо-легочной и сердечно-сосудистой системы. «Свиной грипп» тяжело переносят люди среднего возраста, чаще с хроническими заболеваниями сердечно-сосудистой системы, ожирением, сахарным диабетом, бронхиальной астмой и беременные женщины. При эпидемии гриппа 2009 года, вызванной «свиным» штаммом А/H1N1pdm09 летальный исход чаще наблюдался у лиц в возрасте от 30 до 67 лет, причем в 21% случаев в начале заболевания температура не поднималась выше 38оС и около 10% не имели каких-либо хронических заболеваний.

Инфицирование детей до 2х лет респираторно-синцитиальным вирусом, вирусами парагриппа и бокавирусом может привести к тяжелым состояниям, требующим госпитализации — крупу и бронхо-обструктивному синдрому. Респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус, вирусы гриппа и аденовирусы могут вызвать бронхиты и пневмонию преимущественно у детей до 5 лет.

Каким возбудителем инфицирован человек, может сказать только лабораторная диагностика, по клинической картине, к сожалению, это сделать невозможно.

Лабораторный анализ на определение гриппа и других возбудителей респираторной инфекции даёт возможность назначить адекватное лечение, точно определить прогноз, не допустить характерных для каждого возбудителя осложнений и в ряде случаев избежать необоснованной антибиотикотерапии.

Где можно сдать анализ на грипп?

Сдать анализ на вирус гриппа и другие возбудители респираторных инфекций можно в Центре Молекулярной диагностики (CMD) ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Диагностические тесты позволяют выявить возбудителей гриппа, ОРВИ, микоплазменной и хламидийной инфекций, коклюша и других острых респираторных заболеваний в течение одного дня. Целесообразно сдавать анализ на выявление гриппа и возбудителей ОРВИ при подозрении на вирусную инфекцию в первые — вторые сутки заболевания, когда возбудитель содержится в максимальном количестве. Помните, что точный диагноз — правильное лечение!

Диагностика гриппа и острых респираторных вирусных инфекций в CMD:

Вирус гриппа (Myxovirus influenzae) А и В, качественное определение РНК, ПЦР
Вирус гриппа (Myxovirus influenzae) А и В/ Вирус парагриппа (Parainfluenzae virus) 1,2,3,4 типов, качественное определение РНК
Вирус гриппа (Myxovirus influenzae) А, А/Н1N1/СА/2009, В, качественное определение РНК, ПЦР
Диагностика ОРВИ. Возбудители респираторных вирусных инфекций (РНК Respiratory Syncytial virus, РНК Metapneumovirus, РНК Coronavirus, РНК Rhinovirus, ДНК Adenovirus B, C, E, ДНК Bocavirus, РНК Parainfluenza virus 1, 2, 3, 4),качественное определение,ПЦР
Возбудители респираторных инфекций

Как работают диагностические тесты

Молекулярно-генетические методы, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР), способны обнаружить геном возбудителя в мазке из носоглотки заболевшего.

ПЦР — быстрый прямой метод диагностики, обнаруживающий специфичные участки генома микробов, то есть отличающие их друг от друга. Именно поэтому метод ПЦР по сути является экспресс-анализом на грипп и другие респираторные инфекции.

ПЦР увеличивает в миллиард раз количество этих участков за счет работы фермента ДНК-полимеразы, достраивающего цепи ДНК после присоединения к специфическим участкам коротких молекул олигонуклеотидов — праймеров. В процессе достраивания цепей ДНК происходит разрушение ДНК-полимеразой меченой флуоресцентными красителями молекулы – олигонуклеотидного зонда, также специфично отжигающегося на участке ДНК искомого возбудителя, и преграждающего путь движущегося фермента.

Чем больше возбудителя было в образце клинического материала пациента, тем раньше приборы будут фиксировать увеличение над пороговым значением уровня флуоресценции в процессе реакции. Анализ проводится с детекцией в режиме реального времени. Если в образце нет возбудителя, повышение уровня флуоресценции не происходит. В процессе разработки тестов они обязательно проверяются на специфичность, то есть отсутствие перекреста с другими вирусами и бактериями.

Источник

[09-120]
Influenza virus A/B (вирусы гриппа А/В), РНК [реал-тайм ПЦР]

1230 руб.

Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы русские

Грипп А/В.

Синонимы английские

Influenza serotypes A/B, RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Рекомендуется употребить большой объем жидкости (воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
Не принимать пищу, не пить и не полоскать горло в течение 2-3 часов до исследования.
За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) и носа не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не закапывать капли/спреи в нос, не жевать жевательную резинку, не курить. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Influenza virus – это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.

Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих «быстрых» диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.

Многие прямые лабораторные тесты, разработанные для идентификации Influenza, основаны на выявлении белковых компонентов наружной оболочки вируса: гемагглютинина (H) и нейраминидазы (N). Эти белки являются основными факторами, определяющими степень болезнетворности вируса, а также используются для диагностики и классификации выявляемого вируса гриппа. Они обладают выраженной изменчивостью (известно 16 разновидностей N и 9 разновидностей H серотипа Influenza A) (чем вызваны ежегодные сезонные вспышки гриппа), а также создает определенные трудности при идентификации вируса гриппа с помощью этих методов. Структурное разнообразие антигенов H и N приводит к тому, что чувствительность большинства прямых лабораторных тестов (таких как прямая иммунофлюоресценция и ELISA) составляет около 65-75 %. Исследование РТ-ПЦР основано на выявлении консервативной последовательности ДНК, общей для разных штаммов вируса гриппа серотипов А и В, что обуславливает максимальную чувствительность этого теста (98-100 %).

В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.

В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.

Идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов. Тем не менее взятие отделяемого носо/ротоглотки для исследования с помощью РТ-ПЦР должно быть произведено не позднее чем через 72-96 часов (оптимально в первые 48-72 часа). Это связано с тем, что интенсивная репликация Influenza при поражении верхних дыхательных путей происходит в течение первых 4 суток заболевания. У пациентов с вовлечением нижних отделов дыхательных путей вирусная нагрузка сохраняется высокой более длительный период. Исследование отделяемого носоглотки и мокроты дает лучшие результаты по сравнению с исследованием отделяемого ротоглотки.

При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.

Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.

Для чего используется исследование?

Для диагностики гриппа.

Когда назначается исследование?

При симптомах:

острой респираторной вирусной инфекции (внезапное острое начало болезни, лихорадка, боль в горле, боль в мышцах, головная боль, светобоязнь, сухой кашель, боль в грудной клетке, одышка);
острой энцефалопатии в период эпидемии гриппа (судороги, атаксия, нарушение сознания).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Influenza-ассоциированная инфекция.

Причины отрицательного результата:

отсутствие Influenza-ассоциированной инфекции.

Важные замечания

Положительный результат исследования не означает, что пациент остается заразным для окружающих.
Анализ не позволяет выявлять Influenza серотипа С.

Также рекомендуется

Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
Mycoplasma pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Литература

Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. – Flying Publisher, 2006.
Wang R, Taubenberger JK. Methods for molecular surveillance of influenza. Expert Rev Anti Infect Ther. 2010 May;8(5):517-27.
Schuchat A, Bell BP, Redd SC. The science behind preparing and responding to pandemic influenza: the lessons and limits of science. Clin Infect Dis. 2011 Jan 1;52 Suppl 1:S8-12.
Pregliasco F, Mensi C, Camorali L, Anselmi G. Comparison of RT-PCR with other diagnostic assays for rapid detection of influenza viruses. J Med Virol. 1998 Oct;56(2):168-73.
WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. – World Health Organization, 2011.

Источник