Анализ крови на антитела к дизентерии

Метод определения
РПГА с эритроцитарным диагностикумом (содержит антигены Shigella sonnei)

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Серологическая диагностика дизентерии — исследование антител к Shigella sonnei методом РПГА (реакция пассивной гемагглютинации). Бактериальную дизентерию (шигеллёз) вызывают бактерии рода Shigella. Этот род включает около 50 серотипов, объединённых по антигенным и биохимическим свойствам в 4 группы: Shigella dysenteriae (A), Shigella flexneri (B) Shigella boydii (C), Shigella sonnei (D). Наиболее высокой патогенностью среди них обладают S. dysenteriae, вырабатывающие цитотоксин Шига (другие виды шигелл его не вырабатывают или почти не вырабатывают). Наибольшее эпидемическое значение для большинства стран имеют S.flexneri и S.sonnei. Дизентерия, вызванная S.sonnei, протекает в целом легче и реже даёт осложнения, чем S. dysenteriae и S.flexneri. Заражение происходит фекально-оральным путём. Инкубационный период от одних до 7 суток (в среднем 2 — 3 суток), но может сокращаться до 12 и даже до 2 часов. Заболевание начинается остро. Возникает общая интоксикация, повышается температура тела, появляются схваткообразные боли в животе (тенезмы), усиливающиеся перед дефекацией. Стул в типичном случае — сначала обильный водянистый, затем частый малыми порциями, обычно с примесью крови и слизи. Диагноз ставят на основании выделения возбудителя из кала (см. тест №457 — Посев на патогенную кишечную группу и определение чувствительности к антибиотикам). Серологические исследования используют в качестве вспомогательного метода в целях подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования; для ретроспективного подтверждения диагноза; при позднем обращения пациента, назначении терапии антибиотиками; затяжном течении заболевания. Антитела в крови в большей части случаев можно выявить через несколько дней от начала заболевания с максимумом через несколько недель, далее снижением и вероятным исчезновением через 2-3 года. Результат серологического исследования не может быть использован в качестве единственного основания для постановки диагноза. По данным производителя, при острой дизентерии антитела методом РПГА выявляют в 70-80% случаев в титрах от 1:400 до 1:6400 (титр — последнее разведение сыворотки, дающее положительный результат). При затяжном же течении дизентерии антитела в РПГА выявляются значительно реже (в 30-40% случаев) и в менее высоких титрах (от 1:100 до 1:400). Исследование рекомендуют проводить в динамике в парных сыворотках больным с клиническим диагнозом острой дизентерии в первые дни заболевания (при поступлении в стационар) и через 7-10 дней после первичного исследования. Диагностически достоверным считают восьмикратное увеличение (или падение) титров специфических антител в динамике наблюдения. Установление этиологического диагноза на основании меньшего изменения титров или высокого (1:200 и выше) результата однократной постановки РПГА в первые дни заболевания может привести к значительному проценту диагностических ошибок. Такие результаты надо оценивать с учётом эпидемиологической обстановки, формы заболевания, сроков взятия сыворотки и пр. Следует принимать во внимание, что результат определения антител может быть положительным после ранее перенесенной инфекции; в некоторых случаях возможны перекрёстные реакции, связанные с кросс-реагирующими антителами к другим патогенам.

Литература

Инструкция к набору реагентов (утверждена приказом Росздравнадзора 3.08.2007 № 1915 пр/07).
«Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» МЗ от 1984 г., №04-723/3.
Swapan Kumar Niyogi. Shigellosis. The Journal of Microbiology, April 2005, p.133-143.

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

В качестве вспомогательных тестов при диагностике острых кишечных инфекций.

Для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования.
В целях ретроспективного подтверждения диагноза.
При позднем обращении больного, назначении антибактериальной терапии.
Затяжное течение заболевания.
Профилактическое обследование декретированной группы лиц сферы обслуживания.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения и коэффициенты пересчёта: тест полуколичественный.

Ответ выдаётся в виде «отрицательно» или «положительно» (в последнем случае – с указанием титра).

Референсные значения: отрицательно. Условно-диагностический титр – 1:200 и более. При наблюдении в динамике, диагностически достоверный признак — более чем 4-кратное повышение (или падение) титров за 7-10 дней.

Интерпретация результатов

Положительно:

текущая или перенесённая в прошлом инфекция. В динамическом исследовании через 7-10 дней диагностически достоверным признаком свежей инфекции считают повышение (или падение) титра более чем 4-кратное. Результаты следует рассматривать в комплексе с клинической картиной, эпидемиологической обстановкой, временем взятия пробы от начала заболевания и пр.;
в некоторых случаях — ложноположительный результат, связанный с перекрёстными реакциями с антителами к другим патогенам.

Отрицательно:

отсутствие текущей или недавней инфекции;
низкая концентрация и отсутствие антител в первые дни от начала заболевания (следует повторить исследование в динамике через 7-10 дней);
поздний период инфекции;
недостаточная чувствительность теста (70-80% при острой дизентерии, 30-40% при затяжном течении).

Артикул:
282

Срок исполнения:

до 5 рабочих дней ?

Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Цена:
530 руб

Взятие крови из вены:

+ 200 руб

В этом разделе вы можете узнать, сколько стоит выполнение данного исследования в вашем городе, ознакомиться с описанием теста и таблицей интерпретации результатов. Выбирая, где сдать анализ «РПГА с Shigella sonnei (Shigella sonnei, IHA)» в Москве и других городах России, не забывайте, что цена анализа, стоимость процедуры взятия биоматериала, методы и сроки выполнения исследований в региональных медицинских офисах могут отличаться.

Источник

Метод определения
РПГА с эритроцитарным диагностикумом (содержит антигены Shigella flexneri подтипов 1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 4a, 4b и 5)

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Серологическая диагностика дизентерии — исследование антител к Shigella flexneri подтипов 1-5 методом РПГА (реакция пассивной гемагглютинации).

Бактериальную дизентерию (шигеллез) вызывают бактерии рода Shigella. Этот род включает около 50 серотипов, объединённых по антигенным и биохимическим свойствам в 4 группы: Shigella dysenteriae (A), Shigella flexneri (B) Shigella boydii (C), Shigella sonnei (D). Наиболее высокой патогенностью среди них обладают S. dysenteriae, вырабатывающие цитотоксин Шига (другие виды шигелл его не вырабатывают или почти не вырабатывают).

Наибольшее эпидемическое значение для большинства стран имеют S.flexneri и S.sonnei. Дизентерия, вызванная S.sonnei, протекает в целом легче и реже даёт осложнения, чем S. dysenteriae и S.flexneri. Заражение происходит фекально-оральным путём. Инкубационный период от одних до 7 суток (в среднем 2 — 3 суток), но может сокращаться до 12 и даже до 2 часов. Заболевание начинается остро. Возникает общая интоксикация, повышается температура тела, появляются схваткообразные боли в животе (тенезмы), усиливающиеся перед дефекацией. Стул в типичном случае — сначала обильный водянистый, затем частый малыми порциями, обычно с примесью крови и слизи.

Диагноз ставят на основании выделения возбудителя из кала (см. тест №457 — Посев на патогенную кишечную группу и определение чувствительности к антибиотикам).

Серологические исследования используют в качестве вспомогательного метода в целях подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования; для ретроспективного подтверждения диагноза; при позднем обращения пациента, назначении терапии антибиотиками; затяжном течении заболевания.

Антитела в крови в большей части случаев можно выявить через несколько дней от начала заболевания с максимумом через несколько недель, далее снижением и вероятным исчезновением через 2-3 года. Результат серологического исследования не может быть использован в качестве единственного основания для постановки диагноза. По данным производителя, при острой дизентерии антитела методом РПГА выявляют в 70-80% случаев в титрах от 1:400 до 1:6400 (титр — последнее разведение сыворотки, дающее положительный результат). При затяжном же течении дизентерии антитела в РПГА выявляются значительно реже (в 30-40% случаев) и в менее высоких титрах (от 1:100 до 1:400).

Исследование больным с клиническим диагнозом острой дизентерии рекомендуют проводить в динамике в парных сыворотках в первые дни заболевания (при поступлении в стационар) и через 7-10 дней после первичного исследования. Диагностически достоверным считают более чем 4-кратное увеличение (или падение) титров специфических антител в динамике наблюдения. Установление этиологического диагноза на основании меньшего изменения титров или высокого (1:200 и выше) результата однократной постановки РПГА в первые дни заболевания может привести к значительному проценту диагностических ошибок. Такие результаты надо оценивать с учётом эпидемиологической обстановки, формы заболевания, сроков взятия сыворотки и пр.

Следует принимать во внимание, что результат определения антител может быть положительным после ранее перенесённой инфекции; возможны перекрёстные реакции, связанные с кросс-реагирующими антителами к другим патогенам, прежде всего S.flexneri 6.

Литература

Инструкция к набору реагентов (утверждена приказом Росздравнадзора 3.08.2007 № 1915 пр/07).
«Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» МЗ от 1984 г., №04-723/3.
Swapan Kumar Niyogi. Shigellosis. The Journal of Microbiology, April 2005, p.133-143.

Источник

Анализ крови на антитела к шигеллам Флекснера (с I-V, VI серотипы) и антитела к шигеллам Зонне с помощью серологической реакции РПГА позволяет выявить иммунный ответ на основные возбудители кишечной инфекции – дизентерия.

В каких случаях обычно назначают антитела к шигеллам?

Дизентерия (шигеллез) – инфекционное заболевание с преимущественным поражением толстого кишечника и ярко выраженными симптомами интоксикации: лихорадка, озноб, спутанность сознания, головная боль. Передается от больного человека через грязные руки, механизм передачи инфекции фекально-оральный. Инкубационный период в среднем 2 дня. Вызывают дизентерию несколько возбудителей рода Шигелла ( Shigella dysenteriae (A), Shigella flexneri (B) Shigella boydii (C), Shigella sonnei (D)), поэтому болеть данной инфекцией можно несколько раз. Но наибольшее эпидемиологическое значение в нашем регионе имеют 2 группы возбудителей: шигелла Зонне и шигелла Флекснера. Со стороны кишечника у больного наблюдается частый жидкий стул с примесью крови, слизи и схваткообразными болями в животе в первые дни болезни, далее частый необильный стул до 20-40 раз с болезненными тенезмами (ложными позывами). Заболевание может затягиваться при острой форме до 3-4 недель, при хронической форме более 3 месяцев. Может сформироваться бактерионосительство дизентерии. Иммунитет к дизентерии, т.е. выработка антител начинается с 3-5 дня заболевания с нарастанием титра антител через 10-14 дней, не зависит от приема антибактериальных препаратов и при излечении от инфекции организм освобождается от антител через 2-4 месяца. Поэтому иммунитет не стойкий, но специфический к разным серотипам и серогруппам возбудителей. Серологический метод обнаружения антител используют как дополнительный метод диагностики дизентерии при:

1. Длительном течении острой кишечной инфекции (более 1 недели)

2. Длительной хронической форме кишечной инфекции более 1 месяца

3. Выявлении бактерионосителей в эпидемиологических целях и при профилактических осмотрах дикретированных групп населения.

4. Для контроля излеченности через 2 месяца после перенесенной инфекции

Что именно определяется в процессе анализа?

Анализ крови на антитела к шигеллам позволяет выявить ответ иммунной системы в виде выработки специфических антител к основным серотипам из 2 групп возбудителей дизентерии.

Что означают результаты теста?

У здорового человека или при другой причине кишечной инфекции результат РПГА отрицательный. Получение титра антител к возбудителям дизентерии является основанием для постановки диагноза дизентерии. Анализ поможет инфекционисту в подтверждении различных форм инфекции. Для подтверждения острого заболевания необходимо два анализа крови на антитела к шигеллам (парные сыворотки) с интервалом в 10-14 дней. При этом количество антител в повторном анализе при остром заболевании повышается в 2-4 раза по сравнению с первым результатом.

Для постановки диагноза также используется анализ на дизентерию с помощью микробиологического посева: Посев на возбудителей кишечной инфекции (сальмонеллы, шигеллы) с определением чувствительности к антибиотикам.

Обычный срок выполнения теста:

до 7 дней

Нужна ли специальная подготовка к анализу?

Специальная подготовка не требуется.

Оптимальные сроки взятия сыворотки — через 7–10 дней от первых проявлений болезни и в парной сыворотке через 10-14 дней после первого анализа.

Подробнее про условия сдачи можно прочитать в разделе «Подготовка».

Источник

Острые заболевания лечатся незамедлительно. Анализ на дизентерию должен удовлетворять критерию скорости. У взрослых и детей фиксируется и хроническая форма. Тогда проводится анализ кала на дизентерию. Можно это сделать в рамках анализа состава микрофлоры, как при дисбактериозе. Принцип выращивания аналогичный. Быстрый результат даёт наблюдение в микроскоп.

Проблема сдачи бактериологического анализа в уровне достоверности – не превышает 30-50%. Потому врач руководствуется клиническими симптомами. На дизентерию и сальмонеллёз определение заражения заключается в пристальном осмотре окрашенной пробы. Но кал не всегда даёт всходы. Тогда на дизентерию берут кровь с целью обнаружения антител. Проблема в формировании иммуноглобулинов с опозданием (3 дня)…

Что делать?

Недостаточная точность лабораторных исследований обусловлена характерной клинической картиной дизентерии в острых случаях. Исключение – синдром интоксикации, проявляемый отравлением. Бактериологическое исследование проводится из:

Кала.
Рвотных масс (при наличии).

Метод высевания занимает время, а дизентерия не длится долго. Проходит за неделю. Этого хватает, чтобы палочки дали всходы на питательной среде. Типичный протокол предусматривает отведение пятидневного срока на мероприятие (invitro.ru/analizes/for-doctors/571/17420/).

В школе учат: от кишечных инфекций ежедневно умирает 2100 детей. При беременности маме рассказывают, как опасно не мыть руки перед едой. Точность результата невысока. Но посев остаётся одним из вариантов.

Некоторые методики лабораторного анализа

Для заражения достаточно попадания внутрь организма человека менее 100 бактерий. Диагностика осуществляется 2 методами:

бактериологическим;
серологическим.

3-кратный бакпосев шигеллы на питательную среду при последующем исследовании даёт точность диагноза 40-60%. Экспресс-анализ кишечных инфекций проводится без выведения культур. Материал исследуется на наличие специфичных антигенов, токсинов. Пробы берутся из мочи, слюны, выделений ануса, крови. Применяются иммунологические методики, наделённые повышенной чувствительностью и избирательностью:

иммуно-ферментный анализ (ИФА);
иммунофлуоресценции (РИФ);
реакция агглютинации латекса (РАЛ);
полимеразной цепной реакции (ПЦР);
реакции коагглютинации (РКА).

Проблема заключается в выпуске реактивов, индикаторов. Российскими предприятиями изготавливается спектр продукции для идентификации биопродуктов шигеллы Зонне.

Антитела крови распознаются в реакции пассивной (непрямой) гемагглютинации. Методы легли в основу исследовательских наборов, выявляющих шигеллы Флекснера, Флекснера-6, Зонне. В ходе процесса исследуются парные сыворотки, взятые в начале заболевания и через 1 неделю. Прочее выполняется согласно инструкции, идущей в комплекте. Положительный результат засчитывается при изменении плотности антител между пробами от 8 раз.

При попытках поставить этиологический диагноз по острой дизентерии на основании 4-кратного изменения титра возникают систематические ошибки. Результат РИГА сопоставляется с эпидемической обстановкой. Одновременно учитывается предполагаемый срок заболевания, особенности течения. Титр не должен быть ниже 1:400. Недостаточная чувствительность обусловливает нецелесообразность использования метода для выявления дизентерии.

При нетипичном развитии заболевания врач прописывает визуальный осмотр толстой кишки. Согласно стадиям развития заболевания выделяются внешние признаки – катаральные, геморрагические, язвенные, некротические, фиброзные. При хроническом течении часто фиксируется атрофия эпителиального слоя.

Иногда диагноз выставляется при вспомогательном изучении внешнего вида испражнений. Распознают выраженное поражение дистального отдела толстого кишечника по обилию слизи (лейкоцитов). Обнаружение эритроцитов говорит о наличии кровоизлияний.

Бактериологический посев

Преимущество бактериологического посева в определении подходящего антибиотика. Выращиваются шигеллы – неподвижные (в отличие от эшерихий и сальмонелл) грамотрицательные палочки длиной 23 микрон, шириной 0,6. Бактерии анаэробные, способны существовать в кислородных средах.

Делается от 3 проб. Такой анализ в большей части случаев даёт правильный результат. Для высевания подходит любая среда. Шигелла – универсальный микроб. Штамм образует S-колонию, за исключением Зонне, разрастающемся в R-колонию.

В процессе роста не образуются ферменты, среда кислая. Шигеллу Зонне отличают по способности медленно расщеплять сахарозу и лактозу. Прочие штаммы различить по биохимическим признакам не представляется возможным. Для дифференциации рассматриваются экспрессированные на оболочке антигены. По структуре они напоминают представленные на кишечных палочках. Шигеллы могут образовывать с патогенными эшерихиями ассоциации.

Бакпосев взращивается несколько дней. Лабораториям требуется 5 суток. Назначается лечение – врач руководствуется клиническими проявлениями заболевания. Стоит удовольствие от 700 рублей.

При сборе фекалий старайтесь не захватывать кровь. При невозможности немедленного высевания проба кала консервируется в глицериновой смеси, либо растворе фосфорнокислых солей.

Биохимический анализ кала

В зарубежной практике осознали: ждать 5 дней опасно, учитывая процент смертей (до 40%). Учёные ищут токсины Шига. Яды выделяет даже атипичный штамм кишечной палочки. При дизентерии исследуется кал на признаки токсина.

Штамм кишечной палочки STEC – в научной среде О157 – ответственен за большую часть эпидемических вспышек. В 2011 году привёл к смерти 32 немцев. На долю STEC приходится до трети случаев кишечных инфекций. Пути заражения, клинические признаки напоминают дизентерию. Атипичные штаммы кишечной палочки имеют значение.

Сдавать кал нужно в начале болезни. В последующем становится сложно обнаружить токсин. Метод исследования дополняет бакпосев, серологический анализ на антитела. Для дифференциации с кишечной палочкой применяются электрофорез. С целью идентификации токсинов Шига 1 и 2 используется метод генного ПЦР копирования.

Цитотоксин Шига вырабатывается преимущественно Shigella Dysenteriae. Указанное исследование не всегда подходит для выявления дизентерии.

Серологический анализ

Через 3 дня организм начинает избавляться от дизентерии. Иммунная система формирует антитела (находятся в крови). В ходе исследования используется реакция пассивной гемагглютинации. Метод дополнителен при дизентерии – лабораторная проверка отрицательного результата, выданного диагностикой при помощи бакпосева. Серологический анализ хорош при запоздалом обращении пациента к врачу.

Антитела в крови исчезают через 2-3 года. Вспышка заболевания зарегистрирована через значительный промежуток времени. Минус методики – сложность выявления дизентерии при затяжном характере. Плотность антител падает. В результате процент тестов снижается до 40-30%. В начальной стадии даётся правильный ответ в исследовании до 80% случаев.

Обходят проблему повторным сбором анализа:

При обращении пациента.
Через неделю.

Достоверность результата оценивается по скорости изменения плотности антител в сыворотке. Положительный диагноз ставится при восьмикратном изменении. Антигены появляются в моче – могут фиксироваться соответствующим анализом.

Кожная проба

Токсический шок вызывает специфического рода высыпания на коже. В ослабленном болезнью организме достаточно появления дополнительно вводимого вещества для наблюдения реакции (гидролизат дизентерийных бактерий). Он в обилии содержит нужный токсин. Проба в количестве 0,1 мл вводится под кожу, в течение суток наблюдается реакция (как с Манту).

Общая картина исследований

На карантине врачи занимаются причиной возникновения ситуации. За прошедшие 3 столетия больше умирало от дизентерии бойцов, нежели в период сражений. В период Первой мировой войны сильно страдала немецкая армия в Восточной Африке. На 1000 солдат приходилось 277 больных дизентерией. Кишечные инфекции – гроза будущих гитлеровцев.

Помимо крови, мочи и кала исследуется визуально задний проход. Это копрологический метод. Бактериологическое исследование производится на основе:

Продуктов, местной воды – чтобы установить источник заразы.
Трупов пациентов.
Промывных вод желудка.

Материалы хранятся в холодильнике до суток. Для сбора фекалий применяется деревянная, стеклянная палочка. Под бактериологический посев берутся среды Плоскирева и Эндо (реже Левина). Повышение всходов обеспечивается добавками Левомицетина, Синтомицина. Селенитовая среда используется для повышения продуктивности шигелл Зонне. Онаслужит для высевания рвотных масс, промывных вод.

Штамм выращивается при температуре 37 градусов Цельсия в течение 20 часов. На второй день колонии высевают на среду Ресселя. Для дифференциации используется внешний вид штамма:

Всходы шигелл бесцветные, мягкие, правильной круглой формы, диаметром от 1 мм.
Штамм Зонне грубый на вид, с изрезанным периметром.

Среда Ресселя содержит углеводы, по изменению собственного цвета позволяет судить о засеянной микрофлоре. Проводится дифференциация между штаммами шигелл Флекснера, атипичной кишечной палочкой, сальмонеллами. На третий день берётся кровь, начинается оценка результатов по питательным средам (внешний вид, цвет). Кал содержит много бактерий. Выбираются штаммы по внешнему виду похожие на шигеллы, по активности в отношении углеводов. Штамм Зонне расщепляет лактозу и сахарозу с образованием кислой среды, но процесс медленный.

Пристальное внимание уделяется неподвижным палочкам, не расщепляющим мочевину. Что касается шигелл Зонне, они ферментируют лактозу медленно. Для окончательной дифференциации штаммов используют прочие питательные среды: Гисса, Клиглера, мясопептонный агар, Симмонса, Кристенса. Аминокислоты некоторыми штаммами расщепляются до индола.

Антитела ищут по иммунологическим реакциям, подкрашивают для наблюдения в микроскоп. Визуальное исследование кишечника проводится в виде дополнительной меры, позволяющей оценить степень патогенных изменений. Полезно визуальное наблюдение кала.

Дифференциация прочих заболеваний

Чтобы назначать дизентерийный бактериофаг, врач должен убедиться в диагнозе. Целая группа кишечных инфекций даёт аналогичные симптомы. Это сальмонеллёз, холера, отравление, диарея. Лечение и симптомы мало связаны между собой. Главенствующая роль отводится анамнезу – что предшествовало заболеванию. Так удаётся выявить факторы, позволяющие думать на отравление. Носительство бактерий проверяется лабораторными исследованиями.

Вакцинация

Россияне уверены: прививка от дизентерии – лучшее средство… Сведений об этом в мировом интернете нет. Дезинфекция может предотвратить заражение. Дизентерийные вакцины в стадии разработки. Есть шансы испытания препаратов на россиянах.

Создание вакцины – решаемая задача лабораторий мира. Учёные уверены: опасность дизентерии сильно преуменьшена, новые виды тестов выявляют солидные цифры. Исследования показывают, что повторные заболевания дизентерией встречаются реже, нежели первичные. Это рычаг, которым ВОЗ хотят перевернуть Земной шар.

Специфика штаммов едва ли позволит создать единственное лекарство на все случаи жизни. Медики надеются прививать виды отдельно: Флекснера 2а, 3а, 6 и Зонне. Механизм прививки изучается на примере кератоконъюктивита у морских свинок, воспалении лёгких у мышей. Планируются исследования на людях. Направления движения лабораторий:

Ослабленные формалином мёртвые клетки.
Антигены.
Гликоконъюгат.

Источник