Анализ крови на антигранулоцитарные антитела

Метод определения
Метод агглютинации + гель-фильтрации (карточки).

Инкубация стандартных типированных эритроцитов с исследуемой сывороткой и фильтрация путём центрифугирования смеси через гель, импрегнированный полиспецифическим антиглобилиновым реагентом. Агглютинированные эритроциты выявляются на поверхности геля или в его толще.

В методе используются суспензии эритроцитов доноров группы 0(1), типированные по антигенам эритроцитов RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1(K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK(Jk a), JK2(Jk b), LU1(Lu a), LU2(LU b), LE1(LE a), LE2(LE b), MNS1(M), MNS2(N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).

Исследуемый материал
Цельная кровь (с ЭДТА)

Антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь резус-фактору, свидетельствующие о сенсибилизации организма к этим антигенам. Резус-антитела относятся к так называемым аллоиммунным антителам.

Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (к резус-фактору или другим эритроцитарным антигенам) появляются в крови при особых условиях — после переливания иммунологически несовместимой донорской крови или при беременности, когда эритроциты плода, несущие иммунологически чужеродные для матери отцовские антигены, проникают через плаценту в кровь женщины. У неиммунных резус-отрицательных людей антител к резус-фактору нет.

В системе резус различают 5 основных антигенов, основным (наиболее иммуногенным) является антиген D (Rh), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Помимо антигенов системы резус есть ещё ряд клинически важных эритроцитарных антигенов, к которым может возникать сенсибилизация, вызывающая осложнения при переливании крови.

Метод скринингового исследования крови на присутствие аллоиммунных антиэритроцитарных антител, использующийся в Независимой лаборатории ИНВИТРО, позволяет, помимо антител к резус-фактору RH1(D), выявить в исследуемой сыворотке аллоиммунные антитела и к другим эритроцитарным антигенам. Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d — рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные — только генотип dd).

Во время беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом возможно развитие иммунологического конфликта матери и плода по резус-фактору. Резус-конфликт может привести к выкидышу или развитию гемолитической болезни плода и новорожденных. Поэтому определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребёнка. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод — резус-положителен. В случае, если у матери резус-антиген положительный, а у плода отрицательный, конфликт по резус-фактору не развивается. Частота развития резус-несовместимости составляет 1 случай на 200 — 250 родов.

Гемолитическая болезнь плода и новорождённых — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО- (групповым) антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус- (С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в её организме специфических антител. Проникновению антигенов в материнский кровоток способствуют инфекционные факторы, повышающие проницаемость плаценты, мелкие травмы, кровоизлияния и другие повреждения плаценты. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.

Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учёта резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей. Во время первой беременности резус-положительным плодом у беременной с Rh «-» риск развития резус-конфликта составляет 10 — 15%. Происходит первая встреча организма матери с чужеродным антигеном, накопление антител происходит постепенно, начиная, приблизительно с 7 — 8 недели беременности. Риск несовместимости возрастает с каждой последующей беременностью резус-положительным плодом, независимо от того, чем она закончилась (искусственным абортом, выкидышем или родами, операцией при внематочной беременности), при кровотечениях во время первой беременности, при ручном отделении плаценты, а также если роды проводятся путём кесарева сечения или сопровождаются значительной кровопотерей при переливании резус-положительной крови (в том случае, если они проводились даже в детском возрасте).

Если последующая беременность развивается с резус-отрицательным плодом, несовместимость не развивается. Всех беременных женщин с Rh «-» ставят на специальный учёт в женской консультации и проводят динамический контроль над уровнем резус-антител. В первый раз анализ на антитела надо сдать с 8-й до 20-й недели беременности, затем периодически проверять титр антител: 1 раз в месяц до 30-й недели беременности, дважды в месяц до 36-й недели и 1 раз в неделю до 36-й недели. Прерывание беременности на сроке менее 6 — 7 недель может не привести к формированию у матери Rh-антител. В этом случае при последующей беременности, если у плода будет положительный резус-фактор, вероятность развития иммунологической несовместимости вновь будет равна 10 — 15 %. Проведение тестирования на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела важно также при общей предоперационной подготовке, особенно для людей, которым ранее уже проводилось переливание крови.

Источник

20 декабря 201723 780

Содержание

Показания
Подготовка к анализу
Нормальные значения
Повышение показателя
Снижение показателя
Лечение отклонений от нормы

Антитела к цитоплазме нейтрофилов (ANCA, АНЦА) – специфические иммуноглобулины A и G, действующие против белков цитоплазмы, содержимого азурофильных гранул нейтрофилов. Количество АТ в крови повышается на фоне первичных системных васкулитов, иногда – на фоне других аутоиммунных патологий. При поражениях сосудов среднего и мелкого калибра АНЦА представлены в основном протеиназой 3, миелопероксидазой. Исследование применяется с целью дифференциальной диагностики и мониторинга ангиитов. Биоматериалом для анализа является сыворотка венозной крови. Уровень IgA и IgG определяется методом непрямой реакции иммунофлуоресценции. При полуколичественном отображении результата в норме антитела не обнаруживаются. Исследование выполняется за 8-9 дней.

Нейтрофилы – вид лейкоцитов зернистой структуры. Имеют гранулы трех типов, содержащие белки. Первичные гранулы содержат протеиназу 3, миелопероксидазу, бактерицидный белок, эластазу, катепсин G. Во вторичных гранулах присутствует лизоцим и лактоферрин, в третичных – желатиназа. При васкулитах вырабатываются первостепенные антитела: АТ к протеиназе 3 (PR-3), к миелопероксидазе (MPO); при других аутоиммунных патологиях, воспалительных болезнях кишечника – второстепенные: АТ к лактоферрину, анти-BPI. Реакция непрямой флуоресценции дает разные варианты свечения АНЦА в зависимости от преобладания PR-3 или MPO. Преимуществом исследования является высокая информативность при выявлении «первичных» антител, недостатком – трудоемкость процедуры анализа.

Показания

Основное назначение теста на антитела к цитоплазме нейтрофилов – выявление и мониторинг ангиитов. Показания к исследованию:

Дифференциация системных васкулитов : гранулематоза Вегенера, микроскопического полиангиита, эозинофильного ангиита, ревматической пурупуры. Определение АНЦА необходимо при характерной клинической картине: повышении температуры, снижении массы тела, слабости, кожных высыпаниях, расстройствах кровообращения в конечностях, кашле, нарушении мочеиспускания, гипертензии, головных болях.
Диагностика экстракапиллярного гломерулонефрита . Тест используется для уточнения причины нарушения работы почек. Назначается при наличии отеков, олигурии, повышении артериального давления в сочетании с признаками ангиита.
Мониторинг системных васкулитов. Исследование назначается с определенной периодичностью при ремиссии болезни, после каждого курса лечения иммуносупрессорами. Уровень ANCA коррелирует с активностью патологических процессов, снижение показателя свидетельствует об успешности терапии, низком риске рецидива.
Дифференциальная диагностика патологий: воспалительных болезней кишечника, легких, ревматоидного артрита, муковисцидоза, первичного склерозирующего холангита, полиневропатий, кокаиновой наркомании. Тест является дополнительным, назначается при наличии характерных симптомов. Присутствие «вторичных» АНЦА рассматривается в пользу одного из перечисленных заболеваний, позволяет с меньшей вероятностью предполагать васкулит.

Подготовка к анализу

Исследованию подвергается сыворотка венозной крови. Процедура сдачи биоматериала не требует специальной подготовки, рекомендуется соблюдать общие правила:

После приема пищи следует выдержать перерыв не менее 4 часов. Ограничений в потреблении чистой негазированной воды нет.
Накануне процедуры стоит избегать эмоционального напряжения, отказаться от тяжелых физических нагрузок, употребления алкогольных напитков.
Инструментальные диагностические процедуры, физиолечение разрешено проводить после сдачи биоматериала.
За неделю до сдачи крови необходимо сообщить врачу об используемых лекарствах.
За полчаса до процедуры нужно отказаться от курения. Это время стоит провести в спокойной обстановке, без физических нагрузок.

Забор биоматериала выполняется утром. Полой иглой прокалывается локтевая вена, кровь помещается в пустую пробирку или в пробирку с разделительным гелем. В лаборатории она устанавливается в центрифугу – происходит разделение жидкой части и сгустка. Затем из плазмы удаляется фибриноген, остается сыворотка. Для определения уровня ANCA используется непрямая реакция иммунофлуоресценции. Сроки проведения анализа составляют 8-9 дней.

Нормальные значения

Тест на определение антител к цитоплазме нейтрофилов может быть количественным или полуколичественным. В зависимости от этого результат выражается через титр или через показатель серопозитивности. В норме на итоговом бланке напротив каждого вида АТ отмечен один из вариантов: «титр >1:40», «отрицательно», «не обнаружено». При интерпретации итоговых показателей важно учитывать:

Физиологические факторы, пол, возраст не влияют на уровень антител.
Отрицательный результат не исключает наличия ангиита.
Для постановки диагноза требуется учет данных клинических, лабораторных и инструментальных исследований.

Повышение показателя

При отклонении показателей исследования от нормы учитывается повышение концентрации ANCA определенного типа (MPO, PR-3 и других), класса (IgA, IgG), а иногда и характер свечения (цитоплазматический, перинуклеарный). Причинами повышения результатов являются:

Васкулиты. Повышение концентрации первостепенных ANCA (MPO, PR-3) характерно для гранулематоза Вегенера, микроскопического полиангиита, узловатого периартериита, синдрома Чарга-Стросса, геморрагического васкулита.
Кокаиновая наркомания. Повышается уровень антител к эластазе, определяется цитоплазматический тип свечения.
Синдром Шегрена. Перинуклеарный тип свечения дают АТ к катепсину G.
Ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилоартрит, язвенный колит, СКВ. Перинуклеарное свечение определяется на фоне увеличения концентрации АТ к лактоферрину.
Вирусные инфекции, злокачественные опухоли, IgA-нефропатия. АНЦА повышаются редко. Их выявление не имеет диагностической ценности.
Другие заболевания: воспалительные болезни кишечника (болезнь Крона, НЯК), воспалительные болезни легких, ревматоидный артрит, муковисцидоз, саркоидоз, ПСХ. Свечение возникает из-за повышенного уровня анти-BPI.

Снижение показателя

Снижение уровня антител к цитоплазме нейтрофилов имеет диагностическую и прогностическую ценность при мониторинге ангиитов, оценке эффективности их лечения. Уменьшение концентрации АТ свидетельствует о состоянии ремиссии, положительном ответе на применение иммуносупрессоров.

Лечение отклонений от нормы

Основное назначение исследования АНЦА – дифференциальная диагностика васкулитов, мониторинг их течения, оценка эффективности терапии. Учет типа и класса антител, характера свечения позволяет правильно поставить диагноз, составить прогноз заболевания, определить тактику лечения. Результат анализа необходимо обсудить с лечащим врачом – ревматологом, пульмонологом, нефрологом, дерматовенерологом.

Источник

Содержание

Показания
Подготовка к анализу и забор материала
Нормальные значения
Повышение значений
Снижение значений
Лечение отклонений от нормы

Анализ на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела – лабораторное исследование, направленное на выявление в резус-отрицательной крови антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Показатель имеет самостоятельное диагностическое значение, исследование проводится после получения результатов анализов на определение группы крови и резус-фактора. Данные используются для выявления резус-конфликта матери и плода, определения необходимости введения инъекций иммуноглобулина беременной с резус-отрицательной кровью. Материалом для исследования является венозная кровь. Титр антирезусных антител выявляется при помощи реакции агглютинации. В норме, при низкой вероятности резус-конфликта, результат отрицательный. Готовность результатов анализа составляет 1 рабочий день.

Антиэритроцитарные антитела – иммуноглобулины, которые вырабатываются к различным группам антигенов эритроцитов. Эти антигены относятся к структурным образованиям клеток крови, расположены на внешней поверхности мембран. По своей химической природе они разнообразны – часть представлена белками, другая гликопротеинами, третья – гликолипидами. Их наличие или отсутствие передается по наследству и в течение жизни не меняется. На состояние здоровья набор антигенов никак не влияет. Если в кровь к человеку, у которого отсутствуют антигены эритроцитов определенного типа, перелить кровь с такими антигенами, то организм выработает антитела – разовьется иммунный ответ. Такие ситуации возникают после гемотрансфузий, выполненных без предварительного анализа на антитела к резус-фактору, а также при попадании антигенов крови плода в кровоток беременной.

Своевременное выявление антиэритроцитарных антител в крови необходимо для предупреждения развития резус-конфликта, последствиями которого являются гемолитические реакции, то есть разрушение эритроцитов донора. При беременности возможно ее спонтанное прерывание на различных сроках. Наибольшее распространение исследования антител к резус-фактору приобрело в акушерско-гинекологической практике как инструмент для мониторинга беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью. Вовремя проведенная вакцинация анти-D гамма-глобулином позволяет избежать развития резус-конфликта и связанных с ним осложнений. Кроме этого, исследование антител к резус-фактору востребовано в хирургической и реаниматологической практике как часть подготовки пациентов к гемотрансфузиям. Для проведения анализа на антиэритроцитарные антитела забор крови выполняется из вены. Распространенным методом исследования является реакция агглютинации на буферном геле.

Показания

Скрининговый анализ на антиэритроцитарные антитела в крови применяется для профилактики внесосудистого гемолиза после гемотрансфузий, для предупреждения развития фетального эритробластоза плода. По результатам теста выявляются аллосенсибилизированные пациенты, назначается необходимое лечение. В рамках подготовки к беременности и ее мониторинга тест на антитела к резус-фактору выполняется с определенной периодичностью. Исследование показано матерям с резус-отрицательной кровью при условии, что существует вероятность передачи положительного резус-фактора от отца к ребенку. Особенно тщательный контроль антиэритроцитарных антител требуется женщинам, которые уже были иммунизированы ранее – имели беременности с резус-конфликтом, в том числе окончившиеся абортом или выкидышем, перенесли гемотрансфузии. Также риск развития резус-конфликта выше у пациенток с осложнениями беременности, приводящими к нарушению целостности или повышению проницаемости плаценты. Вероятность проникновения эритроцитов плода увеличивается при отслойке плаценты, травмах живота, инфекциях, инвазивных вмешательствах на матке. На основании результатов анализа делается вывод о риске развития резус-конфликта и необходимости введения иммуноглобулиновых инъекций.

К другим показаниям для выполнения анализа на антитела к резус-фактору относятся привычное невынашивание беременности и гемолитическая болезнь новорожденных. Результаты исследования позволяют подтвердить или опровергнуть роль резус-конфликта в развитии патологии. В хирургии, реаниматологии и смежных областях анализ на антитела к резус-фактору показан при подготовке к гемотрансфузиям, а также через 15-30 суток после процедур. По данным исследования определяется сенсибилизация к антигенам и возможность переливания крови конкретного донора.

Анализ на антиэритроцитарные антитела не показан, если женщина с отрицательным резус-фактором крови вынашивает ребенка, отец которого также имеет резус-отрицательную кровь. В этих случаях у плода резус-фактор всегда отрицательный, иммунологический конфликт не развивается. Результаты исследования могут оказаться положительными при отсутствии резус-конфликта, если инъекция антирезусного иммуноглобулина была введена женщине менее чем 6 месяцев назад. Еще одним ограничением анализа является его чувствительность – в небольших концентрациях антирезусные антитела не поддаются определению. Несмотря на это, прогностическая ценность исследования очень высока – его результаты позволяют выявить риск возникновения резус-конфликта и предупредить его развитие.

Подготовка к анализу и забор материала

При выполнении анализа на антиэритроцитарные антитела биоматериалом является венозная кровь. Процедура забора, как правило, выполняется с утра, но строгих требований ко времени ее проведения нет. Подготавливаться к сдаче крови не нужно. Рекомендуется выдержать перерыв после еды не менее 4 часов, а последние 30 минут перед процедурой провести в спокойной обстановке, без эмоциональных и физических нагрузок. Кровь берут из локтевой вены методом пункции, помещают в герметичную пробирку и в течение нескольких часов направляют в лабораторию.

Антитела к резус-фактору определяются в крови методом агглютинации с использованием геля фильтрации. В ходе процедуры сыворотка с эритроцитами вводится в верхнюю часть микропробирок с гелем. Затем их инкубируют и центрифугируют. В результате агглютинированные эритроциты (те, что соединены с антиэритроцитарными антителами) из-за увеличенного размера не проходят сквозь гель и остаются на его поверхности. Если антител нет, то эритроциты легко опускаются через гель на дно пробирки. Таким образом, по характеру распределения эритроцитов определяется наличие антител к резус-фактору. Сроки исполнения анализа составляют 1 рабочий день.

Нормальные значения

В норме результат анализа на антиэритроцитарные антитела отрицательный (-). Это значит, что в исследуемом образце крови антител нет, вероятность развития резус-конфликта низкая. На итоговый показатель не оказывают влияния физиологические факторы, такие как режим физической активности или особенности питания. К получению ложных результатов может привести неправильное хранение и транспортировка образца крови.

Повышение значений

При наличии в крови беременной антиэритроцитарных антител результат анализа положительный. В этом случае проводится их полуколичественное исследование. В зависимости от силы реакции агглютинации в геле результат может быть сильноположительным (++++), положительным (+++), слабоположительным (++), очень слабоположительным (+). Причина увеличения значений анализа на антиэритроцитарные антитела – сенсибилизация организма к резус-фактору. Она свидетельствует о повышенном риске прерывания беременности, о риске развития эритробластоза новорожденного и осложнений после гемотрансфузий.

Снижение значений

Отсутствие антител к резус-фактору в крови является нормой и указывает на отсутствие риска развития резус-конфликта. Если антитела были определены ранее, то причиной снижения значений анализа является введение анти-D гамма-глобулина.

Лечение отклонений от нормы

Анализ на антиэритроцитарные антитела имеет диагностическое и прогностическое значение в акушерско-гинекологической практике. Его результаты дают возможность выявить риск развития иммунологического конфликта у беременной женщины с резус-отрицательной кровью и своевременно ввести иммуноглобулин. Такая мера позволяет избежать дальнейших осложнений: гемолитической болезни плода или новорожденного, выкидыша, преждевременных родов. С результатами анализа необходимо обратиться к акушеру-гинекологу, ведущему беременность.

Источник