Анализ крови на анаплазмоз в инвитро

Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Метод основан на амплификации искомых фрагментов ДНК Anaplasma phagocytophilum, ДНК Ehrlichia muris и/или Ehrlichia chaffeensis с детекцией в режиме реального времени.

Исследуемый материал
Клещ

Тест предназначен для качественного дифференциального определения ДНК патогенных для человека видов Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia muris и Ehrlichia chaffeensis в гомогенизате клеща.

Кровососущие иксодовые клещи являются переносчиками возбудителей многих заболеваний. Любое заболевание, возникшее в результате укуса клеща, следует рассматривать как потенциальную микст-инфекцию. Ранняя диагностика микст-инфекций важна для выбора правильной стратегии лечения.

Anaplasma phagocytophilum

Anaplasma phagocytophilum – грамотрицательная бактерия из рода Anaplasma, семейства Ehrlichiaceae, ряда риккетсий. Как большинство риккетсий, Anaplasma phagocytophilum способна существовать и размножаться только в организме животного-хозяина. В дикой природе таковыми являются олени, а переносчиками бактерий служат иксодовые клещи. Попадая в кровь человека через кожу со слюной инфицированного клеща, бактерии распространяются по всему организму и проникают внутрь гранулоцитарных клеток (нейтрофилов), в которых размножаются, вызывая гранулоцитарный анаплазмоз человека (ГАЧ).

Первые симптомы анаплазмоза появляются через 7-10 дней после заражения. Внешние проявления заболевания неспецифичны: головная боль, озноб, повышенная температура, слабость, мышечная боль. Иногда отмечаются тошнота и диарея. Кожные высыпания для анаплазмоза нехарактерны и регистрируются при коинфицировании лайм-боррелиозом. В случаях тяжелого течения болезни могут наблюдаться менингит, менингоэнцефалит, помрачение сознания. Anaplasma phagocytophilum поражает нейтрофилы, в связи с этим угнетаются защитные механизмы организма, что способствует присоединению и развитию грибковых, бактериальных и вирусных инфекций. Отмечается изменение клеточного состава крови: снижается количество лейкоцитов и тромбоцитов. В крови можно обнаружить гранулоциты, внутри которых имеются специфические образования – морулы.

В остром периоде инфекции отмечаются лейкопения, сдвиг лейкоцитарной формулы влево, лимфопения, тромбоцитопения, анемия, увеличение СОЭ. На второй неделе заболевания возможны острый безжелтушный гепатит с повышением печеночных трансаминаз, нефропатия с изменениями в клиническом анализе мочи (гипоизостенурией, протеинурией, эритроцитурией), повышение уровня креатинина и мочевины в крови.

Выздоровление обычно наступает без лечения. Однако возможен летальный исход (в частности, из-за септического шока).

Внешние проявления гранулоцитарного анаплазмоза не позволяют однозначно поставить диагноз. Аналогичные симптомы характерны для моноцитарного эрлихиоза. Поэтому для диагностики ГАЧ используют лабораторные тесты (в частности, ПЦР и определение антител в сыворотке крови).

Своевременная интенсивная антибиотикотерапия позволяет быстро остановить развитие болезни и предотвратить осложнения. Именно поэтому так важна ранняя диагностика заболевания.

Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia muris

Возбудители Ehrlichia chaffeensis и Ehrlichia muris – грамотрицательные внутриклеточные паразиты, относящиеся к семейству Rickettsiaceae. Особенностью эрлихий является то, что они не растут на искусственных питательных средах. Цикл развития этих бактерий проходит в моноцитах и напоминает цикл развития хламидий. После проникновения в моноцит путем фагоцитоза начинается деление. Сначала образуется инициальное тельце, которое затем превращается в морулу (скопление элементарных телец внутри клетки). После разрушения моноцита микроорганизмы выходят в окружающее их внеклеточное пространство и могут инфицировать другие, еще не пораженные клетки.

Эрлихиоз – острое инфекционное заболевание, характеризующееся лихорадкой, общей интоксикацией, головной болью, миалгией и артралгией, появлением сыпи у части больных. Относится к зоонозам. Воротами инфекции служит кожа в месте укуса клеща, где возникает первичный аффект. По лимфатическим путям эрлихии проникают в кровь; размножение бактерий происходит внутриклеточно в эндотелии сосудов, возможно, в моноцитах. При этом поражаются различные органы и системы (кожа, печень, костный мозг, центральная нервная система), в которых развиваются инфекционные гранулемы.

Заболевание начинается остро. У больных появляется сильная головная боль, боли в мышцах, общая слабость, у части пациентов выражены тошнота и рвота, часто беспокоят боли в суставах. С ознобом повышается температура тела (до 38-40°С). При осмотре отмечается гиперемия лица, сосуды склер инъецированы, у части больных можно обнаружить первичный аффект (вначале в виде везикулы, затем образуется небольшая язвочка, покрытая темной коркой). Сыпь наблюдается лишь у 20% инфицированных, носит макулопапулезный характер, отдельные элементы сыпи могут сливаться в эритематозные поля. Печень и селезенка увеличены, у отдельных больных обнаруживается субиктеричность склер. При исследовании крови отмечаются лейкопения (у 64% заболевших), анемия (у 57% пациентов), почти у всех (92%) больных выявляется значительная тромбоцитопения, повышается активность АлАТ, АсАТ, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы.

После перенесенного заболевания в крови появляются и сохраняются в течение длительного времени специфические антитела, обеспечивающие стойкий иммунитет. Не исключается возможность длительного персистирования эрлихий в организме человека и хроническое течение заболевания (подобные процессы наблюдаются у животных).

Аналитические показатели: чувствительность – 100 ГЭ/пробу; специфичность определения – 100%.

Источник

Метод определения
ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Метод основан на амплификации искомых фрагментов ДНК Anaplasma phagocytophilum, ДНК Ehrlichia muris и/или Ehrlichia chaffeensis с детекцией в режиме реального времени.

Исследуемый материал
Клещ

Тест предназначен для качественного дифференциального определения ДНК патогенных для человека видов Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia muris и Ehrlichia chaffeensis в гомогенизате клеща.

Кровососущие иксодовые клещи являются переносчиками возбудителей многих заболеваний. Любое заболевание, возникшее в результате укуса клеща, следует рассматривать как потенциальную микст-инфекцию. Ранняя диагностика микст-инфекций важна для выбора правильной стратегии лечения.

Anaplasma phagocytophilum

Anaplasma phagocytophilum – грамотрицательная бактерия из рода Anaplasma, семейства Ehrlichiaceae, ряда риккетсий. Как большинство риккетсий, Anaplasma phagocytophilum способна существовать и размножаться только в организме животного-хозяина. В дикой природе таковыми являются олени, а переносчиками бактерий служат иксодовые клещи. Попадая в кровь человека через кожу со слюной инфицированного клеща, бактерии распространяются по всему организму и проникают внутрь гранулоцитарных клеток (нейтрофилов), в которых размножаются, вызывая гранулоцитарный анаплазмоз человека (ГАЧ).

Первые симптомы анаплазмоза появляются через 7-10 дней после заражения. Внешние проявления заболевания неспецифичны: головная боль, озноб, повышенная температура, слабость, мышечная боль. Иногда отмечаются тошнота и диарея. Кожные высыпания для анаплазмоза нехарактерны и регистрируются при коинфицировании лайм-боррелиозом. В случаях тяжелого течения болезни могут наблюдаться менингит, менингоэнцефалит, помрачение сознания. Anaplasma phagocytophilum поражает нейтрофилы, в связи с этим угнетаются защитные механизмы организма, что способствует присоединению и развитию грибковых, бактериальных и вирусных инфекций. Отмечается изменение клеточного состава крови: снижается количество лейкоцитов и тромбоцитов. В крови можно обнаружить гранулоциты, внутри которых имеются специфические образования – морулы.

В остром периоде инфекции отмечаются лейкопения, сдвиг лейкоцитарной формулы влево, лимфопения, тромбоцитопения, анемия, увеличение СОЭ. На второй неделе заболевания возможны острый безжелтушный гепатит с повышением печеночных трансаминаз, нефропатия с изменениями в клиническом анализе мочи (гипоизостенурией, протеинурией, эритроцитурией), повышение уровня креатинина и мочевины в крови.

Выздоровление обычно наступает без лечения. Однако возможен летальный исход (в частности, из-за септического шока).

Внешние проявления гранулоцитарного анаплазмоза не позволяют однозначно поставить диагноз. Аналогичные симптомы характерны для моноцитарного эрлихиоза. Поэтому для диагностики ГАЧ используют лабораторные тесты (в частности, ПЦР и определение антител в сыворотке крови).

Своевременная интенсивная антибиотикотерапия позволяет быстро остановить развитие болезни и предотвратить осложнения. Именно поэтому так важна ранняя диагностика заболевания.

Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia muris

Возбудители Ehrlichia chaffeensis и Ehrlichia muris – грамотрицательные внутриклеточные паразиты, относящиеся к семейству Rickettsiaceae. Особенностью эрлихий является то, что они не растут на искусственных питательных средах. Цикл развития этих бактерий проходит в моноцитах и напоминает цикл развития хламидий. После проникновения в моноцит путем фагоцитоза начинается деление. Сначала образуется инициальное тельце, которое затем превращается в морулу (скопление элементарных телец внутри клетки). После разрушения моноцита микроорганизмы выходят в окружающее их внеклеточное пространство и могут инфицировать другие, еще не пораженные клетки.

Эрлихиоз – острое инфекционное заболевание, характеризующееся лихорадкой, общей интоксикацией, головной болью, миалгией и артралгией, появлением сыпи у части больных. Относится к зоонозам. Воротами инфекции служит кожа в месте укуса клеща, где возникает первичный аффект. По лимфатическим путям эрлихии проникают в кровь; размножение бактерий происходит внутриклеточно в эндотелии сосудов, возможно, в моноцитах. При этом поражаются различные органы и системы (кожа, печень, костный мозг, центральная нервная система), в которых развиваются инфекционные гранулемы.

Заболевание начинается остро. У больных появляется сильная головная боль, боли в мышцах, общая слабость, у части пациентов выражены тошнота и рвота, часто беспокоят боли в суставах. С ознобом повышается температура тела (до 38-40°С). При осмотре отмечается гиперемия лица, сосуды склер инъецированы, у части больных можно обнаружить первичный аффект (вначале в виде везикулы, затем образуется небольшая язвочка, покрытая темной коркой). Сыпь наблюдается лишь у 20% инфицированных, носит макулопапулезный характер, отдельные элементы сыпи могут сливаться в эритематозные поля. Печень и селезенка увеличены, у отдельных больных обнаруживается субиктеричность склер. При исследовании крови отмечаются лейкопения (у 64% заболевших), анемия (у 57% пациентов), почти у всех (92%) больных выявляется значительная тромбоцитопения, повышается активность АлАТ, АсАТ, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы.

После перенесенного заболевания в крови появляются и сохраняются в течение длительного времени специфические антитела, обеспечивающие стойкий иммунитет. Не исключается возможность длительного персистирования эрлихий в организме человека и хроническое течение заболевания (подобные процессы наблюдаются у животных).

Аналитические показатели: чувствительность – 100 ГЭ/пробу; специфичность определения – 100%.

Источник

Метод определения
Иммуноанализ (с использованием очищенных рекомбинантных антигенов Ureaplasma urealyticum).

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Маркёр текущей или перенесённой в прошлом инфекции Ureaplasma urealyticum.

Ureaplasma urealyticum (от лат. urea – мочевина) – мелкие, не имеющие клеточной стенки, размножающиеся простым делением бактерии, относящиеся к роду Ureaplasma семейства Mycoplasmataceae (Микоплазмы). Как и другие микоплазмы, Ureaplasma urealyticum обычно обитают на слизистых оболочках. Основным питательным субстратом для них является мочевина, в связи с чем, очевидно, они склонны к заселению мочеполовой системы.

После первого описания Ureaplasma urealyticum, было выделено 14 серотипов этого вида микроорганизмов. В дальнейшем, основываясь на характеристиках генома, их разделили на 2 биовара — биовар 1 (parvo biovar) объединяющий серотипы 1, 3, 6, и 14; биовар 2 (T960-biovar), объединяющий серотипы 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, и 13. Поскольку гомология ДНК в этих биоварах составляет менее 60%, в настоящее время их классифицируют как отдельные виды — Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum (T960).

В клинической практике Ureaplasma parvum выявляется чаще, но даже у одного человека могут быть выявлены оба вида уреаплазм одновременно. Уреаплазмы обладают способностью прилипать к клеткам, в том числе к эритроцитам, нейтрофилам, сперматозоидам, клеткам эпителия уретры. Помимо уреазной активности, уреаплазмы проявляют также IgA-протеазную активность, что вероятно, облегчает колонизацию слизистых оболочек, где иммуноглобулины А обеспечивают специфическую гуморальную защиту против микроорганизмов.

У взрослых людей заражение U. urealyticum происходит при половых контактах. По данным исследований U. Urealyticum можно обнаружить у 40 — 80% здоровых сексуально активных женщин, в том числе и у здоровых беременных. Передача U. Urealyticum возможна также вертикальным путем (от матери к ребёнку) – 1) внутриутробно: восходящим путём из инфицированных половых органов или трансплацентарно; 2) во время родов при прохождении плода по родовым путям. Риск переноса зависит от многих индивидуальных факторов (по данным исследований, в 62% случаев у девочек и в 25% у мальчиков).

У новорожденных уреаплазмы выявляются чаще всего в ротоглотке, носоглотке и половых органах, к 15 месяцам частота выявления инфекции снижается втрое, по мере взросления таких случаев становится еще меньше. С началом половой жизни доля инфицированных опять начинает увеличиваться.

Уреаплазмы могут вызывать воспалительные заболевания матки и придатков, сальпингиты и негонококковые уретриты у ведущих половую жизнь людей. Продемонстрирована их связь с бесплодием, послеродовыми эндометритами, хориоамнионитами, спонтанными абортами, преждевременными родами, рождением детей с низким весом, перинатальной заболеваемостью и смертностью, пневмониями, бактериемиями, менингитами и бронхолёгочной дисплазией у недоношенных детей. В то же время, этиологическая и клиническая роль U. Urealyticum в патогенезе этих состояний большей частью изучена еще недостаточно. Высокая частота выявления этих микроорганизмов у здоровых лиц не позволяет считать эти бактерии безусловным патогеном и диктует необходимость осторожного подхода в вопросах интерпретации результатов лабораторной диагностики.

Лабораторная диагностика. Для выявления уреаплазменной инфекции используют микробиологические методы (тест № 444), ПЦР исследования (см. тесты №№ 303УРО, 303СП, 303МОЧ, 343УРО, 343СП, 343МОЧ, 3026 ИНБИОФЛОР), серологические тесты (тесты №№ 264, 265). Информативность этих исследований зачастую относительна, поскольку эти бактерии широко распространены среди здоровых людей и доказать их патогенетическую роль трудно. Результаты следует анализировать в комплексе с клиническими данными и результатами исследований, направленных на выявление других бактерий, которые могут вызывать сходную клиническую картину.

Антитела класса IgG к U. urealyticum являются свидетельством иммунного ответа, возникшего в ходе текущей или имевшей место в прошлом экспозиции к Ureaplasma urealyticum. Это важный фактор иммунитета против данного микроорганизма, поскольку лица с гипогаммаглобулинемией проявляют очень высокую восприимчивость к инвазивной инфекции Ureaplasma. Антитела класса IgG к U. urealyticum можно обнаружить у людей без клинических проявлений инфекции. Но для инвазивных и экстрагенитальных форм инфекции характерно повышение титров специфических антител. В пользу текущей инфекции может свидетельствовать также выраженный рост титров специфических антител в парных сыворотках, взятых с интервалом в 2 недели (3 — 4-кратный).

Отрицательный результат не исключает инфекцию U. urealyticum — пациент может быть инфицирован, но еще не продуцировать достаточное для обнаружения количество антител. Повторное тестирование не ранее чем через 1 неделю с выраженным ростом титров антител говорит в пользу текущей инфекции.

IgG (в отличие от IgM и IgA) способны проникать через плаценту из крови матери в кровь плода, поэтому в крови новорожденных первые месяцы после рождения могут циркулировать материнские IgG, присутствие которых в однократно взятой пробе крови само по себе не свидетельствует об инфицировании.

Уреаплазма: вопросы и ответы

Как можно заразиться уреаплазмозом?

Уреаплазмоз — это инфекционное заболевание. Вызывается уреаплазмой и передается половым путём. Уреаплазма — это микроорганизм, который иногда рассматривают как своеобразную переходную ступень от вирусов к бактериям, поскольку он не имеет ни ДНК, ни клеточной оболочки.

Уреаплазмы относятся к условно — патогенным микроорганизмам. Это значит, что они могут присутствовать в определенном количестве в микрофлоре мочеполового тракта. У здоровых людей никак не проявляются. Однако при определенных условиях:

при снижении иммунной системы;
возникновении стрессовых ситуаций;
переохлаждении;
акклиматизации;
обострении хронических соматических заболеваний;
хирургических вмешательствах;
изменении гормонального фона,

— уреаплазмы начинают активно размножаться, увеличиваются в своём количестве и могут вызвать воспалительные процессы в мочеполовых органах. В такой форме они являются «заразными» и могут передаваться половым путём как инфекция.

Существует лишь один не половой путь передачи инфекции — от матери к ребёнку во время родов при прохождении по родовым путям. В крайне редких случаях ребёнок заражается внутриутробно, то есть во время беременности, но всё же чаще плацента надёжно защищает его от этих опасных возбудителей.

Оказавшись в половых путях или в мочеиспускательном канале, уреаплазма может никак себя не проявлять, а может развить бурную болезнетворную деятельность. Все зависит от исходного состояния здоровья заразившегося человека. У мужчин уреаплазма в первую очередь поражает мочеиспускательный канал и предстательную железу, у женщин – влагалище.

Как проявляется заболевание?

Инкубационный период заболевания составляет 2 — 5 недель. В преобладающем большинстве случаев клинические признаки заболевания могут отсутствовать, и тогда болезнь протекает бессимптомно. Однако человек является носителем инфекции и способен заразить других людей.

После инкубационного периода у больного развиваются симптомы уретрита: возникают жжение и боль в мочеиспускательном канале при мочеиспускании и появляются слизистые выделения, чаще всего по утрам. В подавляющем большинстве случаев, особенно у женщин, заболевание протекает малосимптомно, и все проявления выражены столь незначительно, что нередко больной человек вообще не придаёт им значения.

Если заразившийся человек не начинает лечиться, через несколько дней симптомы уретрита проходят сами собой, что служит ещё большим поводом успокоиться. Но, к сожалению, на этом заболевание не проходит. К этому моменту инфекция, как правило, надёжно оседает в стенке мочеиспускательного канала, в предстательной железе у мужчин и во влагалище, на поверхности шейки матки у женщин. Начиная с этого момента, болезнь будет ждать благоприятных условий, то есть снижения местного иммунитета, чтобы проявить себя в полную силу.

Как правило, симптомы заболевания следующие:

у мужчин —

скудные прозрачные выделения из мочеиспускательного канала;
умеренная боль и жжение при мочеиспускании;
при поражении предстательной железы — симптомы простатита;

у женщин —

обильные слизистые выделения из влагалища;
умеренная боль и жжение при мочеиспускании;
боль внизу живота (при воспалении матки и придатков).

К каким последствиям приводит уреаплазменная инфекция?

Уреаплазмоз часто является причиной появления других заболеваний мочеполовой системы.

У мужчин — это уретрит, эпидидимит и простатит, переходящий часто в хроническую форму и ведущий к бесплодию.

У женщин — цистит, кольпит, эндометрит. При хронической форме инфекции возрастает риск развития воспалительных процессов матки и придатков. Образуется спаечный процесс в органах малого таза, что может служить также причиной бесплодия. Данная уреаплазменная инфекция может также стать причиной самопроизвольного выкидыша в первом триместре беременности. Во втором и третьем триместре беременности впервые возникшее заболевание и имевшийся ещё до беременности уреаплазмоз могут стать причиной возникновения фетоплацентарной недостаточности у будущего ребенка (нехватка кислорода и необходимых питательных веществ).

Каждой женщине необходимо знать, что выявление инфекции во время беременности – не относится к медицинским показаниям для её прерывания. Своевременная диагностика и правильное лечение поможет женщине выносить и родить здорового малыша.

Как узнать, заразился ты или нет?

Даже при малейшем подозрении на наличие заболевания, учитывая её бессимптомное течение, необходимо пройти лабораторное обследование.

Независимая лаборатория ИНВИТРО предлагает диагностику уреаплазмоза методами ПЦР — диагностики, серологическим и культуральным методами.

ПЦР – диагностика позволяет выявить ДНК возбудителя и дает возможность за короткий период времени узнать, имеется ли в материале уреаплазма, а также определить количество возбудителя. Чувствительность этого метода составляет 98-99%. Материалом для исследования является отделяемое из влагалища, шейки матки, мочеиспускательного канала.

Чтобы выяснить причины выкидыша, бесплодия, воспалительных заболеваний в послеродовом периоде, применяют серологический метод диагностики. Этот метод выявляет наличие антител к структурам инфекции.

Самый точный из всех известных методов диагностики инфекции — бактериологический посев (культуральный метод). Чтобы провести исследование и определить наличие инфекции, берут материал со сводов влагалища, из канала шейки матки или со слизистой уретры. Подходят для исследования также утренняя моча и секрет простаты. Из материала выращиваются уреаплазмы в специальной питательной среде. Не только наличие, но и их количество в организме — главный показатель наличия инфекции. Помимо этого, бактериологический посев применяют для определения чувствительности микроорганизма к определенным антибиотикам, прежде чем их назначать. Это нужно для того, чтобы назначить правильную схему лечения: чувствительность к различным антибиотикам у разных людей отличается, кому-то помогают одни препараты, а кому-то — другие.

Для достоверности заключительного результата о наличии инфекции в организме, целесообразно применение комбинации из нескольких лабораторных методов.

Литература

Мавров И. Половые болезни. АСТ ПРЕСС КНИГА. 2002. 752 с.
Инфекционные болезни у детей. Ред. Д. Марри. М. Практика, 2006. 928 с.
Waites K. B., Katz B., and Schelonka R.L. Mycoplasmas and Ureaplasmas as Neonatal Pathogens. Clin. Microbiol. Rev., 2005, Vol.18, No.4, p. 757-789.
Cunningham C.K., Bonville C.A., Hagen J.H. et al. Immunoblot Analysis of Anti-Ureaplasma urealyticum Antibody in Pregnant Women and Newborn Infants. Clin.Diagn.Lab. Immunol. 1996, Vol.3, No 5, P. 487-492.
Brown M.B., Cassell G.H., Taylor-Robinson D. and Shepard M.C. Measurement of Antibody to Ureaplasma urealyticum by an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Detection of Antibody Responses in Patients with Nongonococcal Urethritis. J Clin . Microbiol. 1983, 17(2): 288-295

Источник