Анализ крови иммуноблот антинуклеарных антител

[13-063]
Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот

3720 руб.

Специфичные аутоантитела к различным компонентам клеточного ядра, которые образуются при некоторых тяжелых аутоиммунных патологиях и имеют большое значение в диагностике системных ревматических заболеваний.

Синонимы русские

Специфичные АНА, антитела к экстрагируемым ядерным (нуклеарным) антигенам, антитела при аутоиммунных заболеваниях соединительной ткани.

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA) Comprehensive Profile, ANA-specific Antibodies, Extractable Nuclear Antigen Antibodies (ENA Panel).

Метод исследования

Иммуноблотинг.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антинуклеарные антитела (АНА) к экстрагируемым ядерным антигенам представляют собой антитела к растворимым компонентам ядра клетки (рибонуклеопротеинам). В норме АНА отсутствуют в организме. При аутоиммунной патологии иммунная система начинает вырабатывать специфические иммуноглобулины к собственным клеткам и их компонентам.

Основной метод определения специфичности антител при положительном антинуклеарном факторе – это иммуноблотинг, позволяющий дифференцировать системные заболевания соединительной ткани.  Данный метод исследования дает возможность одновременно выявить антитела к нескольким различным внутриклеточным антигенам, которые могут встречаться как сочетанно, так и изолированно.

Анти-Sm (Smith) – антитела к U1-, U2-, U4-рибонуклеопротеинам – специфичны для системной красной волчанки (СКВ). Они редко встречаются при других системных заболеваниях соединительной ткани и являются одним из критериев диагностики СКВ. При этом, однако, концентрация анти-Sm не коррелирует с активностью системной красной волчанки.

Антитела к антигенам RNP (anti-ribonucleoprotein) – это антитела к белковым компонентам малого ядерного нуклеотида – U-1-РНК. Они обнаруживаются при смешанных заболеваниях соединительной ткани (синдроме Шарпа), реже при системной красной волчанке и других ревматических заболеваниях.

Антитела к SS-A (Ro) направлены на белки, связанные с РНК Y1-Y5 в составе сплайсосомы. Эти антитела наиболее часто обнаруживаются при синдроме Шегрена и системной красной волчанке. При СКВ их продукция ассоциируется с определенным набором клинических проявлений и лабораторных нарушений: светочувствительностью, синдромом Шегрена, гиперпродукцией ревматоидного фактора. Присутствие анти-SS-A-антител в крови беременной женщины связано с высоким риском развития неонатального волчаночного синдрома у ребенка.

Анти-SS-B(La)-антитела к белку, связанному с РНК-полимеразой-3,  выявляются при болезни Шегрена и в начальном периоде системной красной волчанки, развивающейся в пожилом возрасте и ассоциирующейся с низкой частотой развития нефрита.

Антитела к Scl-70 (антисклеродермальные антитела с молекулярной массой 70 кДа, антитела к топоизомеразе I) чаще появляются при диффузной (40  %),  реже при ограниченной (20  %) форме системной склеродермии, CREST-синдроме. Они высокоспецифичны для склеродермии и являются плохим прогностическим признаком относительно развития легочного фиброза.

Антитела anti-PM/Scl – специфический серологический маркер для подгруппы больных склеродермией (Scl), полимиозитом (PM) и особенно для тех, у кого наблюдается совокупность симптомов обоих заболеваний (PM/Scl).

Антитела к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA) – один из высокоспецифичных тестов для выявления системной красной волчанки.

Антицентромерные антитела (анти-CENT-B) обнаруживаются у больных склеродермией, системной красной волчанкой и ревматоидным артритом. У больных системной склеродермией выявление данных антител указывает на благоприятный прогноз и низкую вероятность поражения внутренних органов.

Анти-Jo-1-антитела (антитела к гистидин-тРНК-синтетазе) впервые были обнаружены в сыворотке крови больных миозитом. У большинства больных с повышенным уровнем антисинтетазных антител выявляется интерстициальная болезнь легких, феномен Рейно. Данное исследование может быть использовано как прогностический маркер прогрессирования болезни.

Антитела к гистонам представляют собой одну из разновидностей антинуклеарных антител и определяются в основном при системной красной волчанке, являясь ее ранними маркерами.

Антитела к нуклеосомам – чувствительный маркер системной красной волчанки. Они определяются исключительно при СКВ, нередко осложненной поражением почек (люпус-нефритом).

АТ к рибосомальному белку Р (Ribo P) встречаются у 10-20  % больных с СКВ. Они взаимодействуют с фосфоропротеинами рибосом и встречаются преимущественно у больных СКВ с поражением центральной нервной системы, почек и печени. Их обнаружение специфично для СКВ, протекающей с волчаночным психозом.

Анти-AMA-M2 – антитела к антигенам митохондрий М-2, расположенным на внутренней мембране органеллы в виде комплекса ферментов. Данные антитела синтезируются при первичном билиарном циррозе и указывают на его тяжелое течение.

Некоторые разновидности АНА встречаются при одном заболевании или при перекрестных синдромах. Например, антитела к SS-A и SS-B или к RNP и Sm-антигенам часто выявляются совместно, поскольку входят в один белковый комплекс, выступающий антигеном для данных типов аутоантител.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани;
• для мониторинга течения и оценки прогрессирования ревматических заболеваний;
• для дифференциальной диагностики некоторых аутоиммунных заболеваний.

Когда назначается исследование?

• При выявлении антинуклеарного фактора и антинуклеарных антител в крови;
• при симптомах аутоиммунных заболеваний (длительное повышение температуры тела, потеря массы тела, миалгии, артропатии, фоточувствительность, синдром Рейно (побледнение с последующим посинением и покраснением сосудов пальцев кистей и стоп), лейкопения и гемолитическая анемия);
• при мониторинге течения системных заболеваний соединительной ткани.

Что означают результаты?

Референсные значения

Причины повышения специфичных АНА

анти-Sm

• Системная красная волчанка (у 10-40  % пациентов)
• Смешанное заболевание соединительной ткани (редко)
• Синдром Шегрена (редко)

Анти-RNP

• Смешанное заболевание соединительной ткани (95-100  %)
• СКВ (25-50  %)
• Склеродермия (30  %)
• Синдром Шегрена (15 %)
• Ревматоидный артрит (10  %)

Анти-SS-A (Ro)

• СКВ (15-35  %)
• Неонатальный волчаночноподобный синдром (100  %)
• Склеродермия (60  %)
• Ревматоидный артрит (10  %)
• Синдром Шегрена (40-75  %)
• Смешанное заболевание соединительной ткани (менее 5  %)

Анти-SS-B (La)

• Синдром Шегрена (15-60  %)
• СКВ (10-15  %)
• Склеродермия (25  %)
• Ревматоидный артрит (5  %)

Анти-Scl-70

• Склеродермия, диффузная форма (20-60  %) в сочетании с легочным фиброзом
• CREST-синдром
• Изолированный синдром Рейно с последующим развитием склеродермии

Анти-PM-Scl

• Склеродермия
• Полимиозит

Анти-PCNA

• Волчаночный нефрит (люпус-нефрит)

Анти-CENT-B

• Склеродермия (70  %)
• CREST-синдром

Анти-Jo-1

• Полимиозит, дерматомиозит (антитела выявляются у половины больных) в сочетании с легочным фиброзом

Антитела к гистонам

• СКВ
• Склеродермия
• Лекарственная волчанка

Антитела к нуклеосомам

• СКВ
• Волчаночный нефрит

Анти-Ribo P

• СКВ, ассоциированная с люпоидным церебритом (волчаночным психозом)

Анти-AMA-M2

• Билиарный цирроз

Что может влиять на результат?

• Лекарственные препараты, способные повышать уровень Scl-70: аминосалициловая кислота, изониазид, метилдопа, пенициллин, пропилтиоурацил, стрептомицин, тетрациклин.
• Антитела к гистонам могут появляться при лекарственной волчанке, вызванной приемом гидралазина, прокаинамида, хинидина.



Важные замечания

• Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, в сочетании с клиническими данными. Системное аутоиммунное заболевание при отсутствии клинической картины не может быть диагностировано только на основании выявления специфичных антинуклеарных антител.
• Отрицательный  результат иммуноблота не исключает системного аутоиммунного заболевания соединительной ткани.

Также рекомендуется

• Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках
• Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), IgG
• Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
• Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
• Иммуноблот при полимиозите (Мi2b, Ku, Pm-Scl100, PM-Scl75, Jo-1, SRP, PL-7, PL-12 EJ, OJ, Ro-52)
• Диагностика системной красной волчанки
• Скрининг болезней соединительной ткани
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Лейкоцитарная формула
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Ревматолог.

Литература

• Назаренко Г. И., Кишкун А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. – М.: Медицина, 2000. – 533 с.
• Fischbach F.T., Dunning M.B. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 8th Ed. Lippincott Williams & Wilkins, 2008: 1344 p.
• Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed.  Normal, Illinois, 2007: 666 p.
• Sabatine. M. Pocket Medicine. 3d ed. USA, Philadelphia: LWW; 2008.

Что такое антинуклеарные антитела

Антинуклеарные антитела — это патологические компоненты иммунной системы, ведущие к возникновению аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, таких как системная красная волчанка, синдром и болезнь Шегрена, системная склеродермия.

Антинуклеарные антитела представляют из себя белки-иммуноглобулины, вырабатываемые защитными клетками человеческого тела (лимфоцитами). Из-за сбоя в работе иммунной системы ядра собственных клеток распознаются ею как чужеродные и вредные, что приводит к ошибочной выработке антител к разным компонентам клеточных ядер.

Всего выявлено более 190 компонентов ядра, к которым может вырабатываться патологический иммунный ответ, однако диагностическое значение имеют около 20 из них. К наиболее важным относят антитела к одно- и двуспиральной ДНК, гистонам, нуклеосомам и рибосомальному P-протеину.

Ядро содержится практически в любой клетке человеческого тела, за исключением некоторых кровяных. Оно находится внутри клетки и защищено собственной оболочкой, цитозолем и внешней клеточной мембраной. Антитела находятся во внеклеточной среде и чаще всего не могут напрямую контактировать с ядром, повреждая его. Однако при любом нарушении целостности клеточных оболочек антинуклеарные антитела, если они имеются в организме, способны связываться с компонентами ядра, образуя нерастворимые комплексы. Именно они и являются причиной возникновения разнообразных аутоиммунных заболеваний соединительной ткани.

Механизм образования

В норме собственные клетки организма даже в разрушенном состоянии иммунного ответа не вызывают. Однако сбои в работе иммунной системы наблюдаются постоянно даже у здоровых лиц, и при неблагоприятном стечении обстоятельств иммунитет может сформироваться на любой из компонентов клетки. В организме предусмотрена своеобразная система «отбраковки» патологических антител, в большинстве случаев она срабатывает, антитела уничтожаются, не вызывая болезнь.

Однако в некоторых случаях антинуклеарные антитела возникают в больших количествах и оказываются вовремя не распознаны организмом как патологические. Чаще всего это бывает при обширных солнечных ожогах, когда миллионы клеток кожи оказываются повреждены ультрафиолетом. Ядра погибших клеток оказываются непосредственно во внутренней межклеточной среде организма, где их встречают иммунные клетки — лимфоциты и макрофаги.

ДНК из ядер, гистоновые белки и другие белковые и нуклеиновые компоненты могут быть настолько повреждены ультрафиолетовым излучением, что в некоторых случаях изменяются до неузнаваемости. Именно это и провоцирует иммунные клетки вырабатывать против них антитела, как против чужеродных веществ.

Нормальные значения АНА

Нормальным значением является полное отсутствие антинуклеарных антител. При скрининговом ИФА-исследовании отрицательный ответ чаще всего записывается с указанием титра (разведения), пример: «Отрицательно, < 1:160». При развернутом иммуноблот-исследовании на антитела к разным компонентам ядра клетки, ответ зачастую записывается для каждого вида антител по отдельности. Например: «АТ к двуспиральной ДНК — отрицательно; АТ к PCNA — отрицательно; АТ к Scl-70 – отрицательно».

Иногда у здоровых лиц обнаруживаются AHA в небольших количествах (слабоположительный результат), что может свидетельствовать о генетической предрасположенности к аутоиммунным заболеваниям. Результат анализа «Сомнительно» может быть вызван наличием антител в очень низкой концентрации, которая находится около пороговых значений чувствительности медицинской тест-системы для анализа. Чаще всего после получения результата «Сомнительно» анализ рекомендуется повторить через 4-5 недель.

Причины повышения ANA

Положительный результат анализа может свидетельствовать о наличии одного или нескольких следующих заболеваний:

• системная красная волчанка,
• лекарственная волчанка,
• синдром или болезнь Шегрена,
• системная склеродермия,
• синдром Шарпа.

Слабоположительный результат может быть вызван как наличием вышеперечисленных заболеваний, так и заболеваниями, не связанными с системой иммунитета. Перечислим основные болезни, которые могут его вызвать:

• ревматоидный артрит, в том числе ювенильный (детский),
• первичная легочная гипертензия,
• идиопатический легочной фиброз,
• синдром Рейно (дигитальный васкулит),
• болезнь Крона,
• узелковый периартериит,
• гепатиты различной природы,
• злокачественные новообразования (опухоли),
• некоторые инфекционные болезни (туберкулез, шистосомоз, малярия).

Слабоположительный результат анализа иногда выявляется у здоровых лиц, чаще у женщин в возрасте старше 60 лет.

Показания к исследованию

Исследование показано при симптомах, не исключающих аутоиммунную патологию соединительной ткани:

• длительно сохраняющаяся повышенная температура тела;
• беспричинное снижение массы тела;
• уменьшение регионарных лимфатических узлов;
• болезненность и скованность в суставах, когда не установлена иная причина патологии;
• боли в мышцах;
• кожная сыпь, особенно на лице в виде «красной бабочки» (нос и щеки рядом с крыльями носа);
• перикардит и плеврит неясной причины;
• изменения в общем и биохимическом анализе крови, когда исключены другие виды патологии.

Также анализ назначается при имеющемся аутоиммунном заболевании для контроля за эффективностью лекарственной терапии.

Подготовка к анализу и методика проведения исследования

Анализ сдается утром натощак либо в другое время, однако не ранее 5-6 часов после последнего приема пищи. Также желательно не принимать никакие лекарственные средства до взятия крови на исследование.

Существует несколько вариантов проведения анализа, отличающихся по своей точности и возможности количественной оценки концентрации антител.

Скрининговое ИФА-исследование (иммуноферментный анализ) позволяет выявить наличие суммарных антинуклеарных антител и их титра. К плюсам метода относится его относительная дешевизна и возможность выяснить, необходимы ли расширенные исследования. При отрицательном результате анализа дальнейшие исследования чаще не показаны.

Непрямая флуоресцентная микроскопия — это метод, основанный на окрашивании антител специальными веществами, дающими под ультрафиолетовым светом зеленое свечение. Тип и характер свечения позволяет врачу лабораторной диагностики определить, с какими компонентами клетки связались антитела, а также примерно узнать их количество.

Иммуноблот-исследование позволяет определить наличие каждого типа антинуклеарных антител по отдельности. Чаще всего этот анализ назначается после положительного результата другого исследования для уточнения диагноза.

Факторы, влияющие на результат

Ложноположительный результат анализа может быть вызван приемом некоторых групп лекарственных препаратов:

• антидепрессанты;
• антиаритмики (бисопролол, биосотал);
• противосудорожные препараты (карбамазепин, фенитоин);
• препараты для лечения атеросклероза (ловастатин, аторвастатин);
• средства для понижения артериального давления.

Лечение отклонений от нормы

Для лечения аутоиммунных заболеваний соединительной ткани применяются следующие группы препаратов:

• кортикостероиды (позволяют уменьшить иммунный ответ организма и снизить концентрацию патологических антител);
• антифиброзные препараты (уменьшаю явления склерозирования соединительной ткани);
• иммуносупрессивные средства;
• ангиопротекторы (препараты, защищающие сосуды);
• нестероидные противовоспалительные средства.

Стоит заметить, что диагностика данной группы заболеваний сложна и требует ряда дополнительных исследований, кроме выявления антинуклеарных антител и их вида. Диагноз чаще всего не может быть установлен после однократного исследования крови.