Анализ крови bcr abl что такое

[18-093]
Хронический миелолейкоз. FISH анализ химерного гена BCR/ABL

10805 руб.

Метод молекулярно-генетической диагностики хронического миелолейкоза, позволяющий выявить в генетическом материале клеток крови или костного мозга мутантный ген, продукт деятельности которого играет ключевую роль в развитии этого заболевания.

Синонимы русские

Исследование клеток крови методом FISH (t (9; 22)/BCR/ABL), FISH анализ транслокации t(9;22) BCR-ABL.

Синонимы английские

BCR/ABL1 Translocation (9;22), FISH; Philadelphia Chromosome, BCR-ABL1 Fusion.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Хронический миелолейкоз является опухолевым заболеванием кроветворной системы, в результате которого в периферической крови наблюдается повышение уровня определенного вида лейкоцитов. Развитие заболевания связано с возникновением в стволовой клетке крови генетической аномалии, которая получила название филадельфийской хромосомы. У человека на девятой хромосоме локализуется ген ABL, который кодирует образование белка, стимулирующего рост и деление клеток. При хроническом миелолейкозе часть гена ABL перемещается на хромосому 22, такая мутация называется транслокацией. Место разрыва двадцать второй хромосомы, куда чаще всего встраивается перемещенная часть гена ABL, называется M-bcr (от английского major breakpoint claster region). В норме в этом участке хромосомы расположен ген BCR, кодирующий белок, функция которого в настоящее время достоверно не изучена, однако есть сведения, что он участвует в процессах деления и дифференцировки клеток. В результате транслокации на 22-й хромосоме образуется сливной, или химерный, ген BCR-ABL, при считывании информации с которого продуцируется белок р210. От части гена ABL этот белок получает способности тирозинкиназы – внутриклеточного фермента, участвующего в передаче сигналов пролиферации, а часть, кодируемая геном BCR, способствует его активации. Таким образом, в результате описанной мутации на 22-й хромосоме формируется ген, белковый продукт которого – тирозинкиназа с повышенной активностью — активирует деление клеток с полной независимостью от внешних регуляторных механизмов. Лейкозные клетки становятся нечувствительными к сигналам самоуничтожения, приобретают способность выходить из костного мозга в периферическую кровь, не дожидаясь созревания. Обнаружение филадельфийской хромосомы, гена BCR-ABL или его белкового продукта являются основными способами диагностики хронического миелолейкоза.

Наличие филадельфийской хромосомы исследуют в клетках периферической крови или костного мозга. При использовании крови её взятие производят обычным способом – посредством пункции вены и набора необходимого количества крови в вакутейнер. Взятие костного мозга проходит под местной анестезией, поэтому, если имеется аллергия на какой-либо местный анестетик, необходимо обязательно сообщить об этом доктору. После наступления анестезии врач специальной иглой производит пункцию кости (обычно из грудины или гребней подвздошных костей), шприцем аспирирует костный мозг и перемещает его в пробирку. Несмотря на анестезию, непосредственно в момент аспирации могут возникать болевые ощущения из-за перепада давления в полости кости. После манипуляции на место пункции накладывают асептическую повязку.

Стандартным методом для обнаружения описанной хромосомной аномалии является цитогенетическое исследование клеток костного мозга, однако оно не всегда позволяет выявить филадельфийскую хромосому, и в таких случаях рекомендуется более чувствительный анализ – FISH. Флюоресцентная in-situ гибридизация является молекулярно-генетическим исследованием, которое позволяет выявить в генетическом материале анализируемых клеток последовательность нуклеотидов, характерную для химерного гена BCR-ABL. Для этого применяются специальные последовательности ДНК, аналогичные участкам нормальных генов ABL и BCR, меченные флюоресцирующими веществами разных цветов – ДНК-зонды. В процессе анализа под воздействием высокой температуры и химических веществ двухцепочечные молекулы ДНК разделяются на отдельные цепи. Следующим этапом происходит гибридизация – соединение цепочек зондов с подходящими участками на клеточной ДНК. Результат гибридизации врач оценивает с помощью флюоресцентного микроскопа, который позволяет увидеть свечение, испускаемое присоединившимися к нативной ДНК зондами. При отсутствии транслокации каждый зонд присоединится к своей хромосоме и в микроскоп будут видны два разных и удаленных друг от друга свечения. Химерный ген BCR-ABL на 22-й хромосоме присоединит к себе оба зонда, и в микроскопе свечение будет исходить из одной точки, а его цвет поменяется на соответствующий комбинации двух исходных.

Для чего используется исследование?

Для выявления мутантного гена BCR-ABL при первичной диагностике хронического миелолейкоза, а также в процессе лабораторного мониторинга эффективности терапии и прогрессирования заболевания.

Когда назначается исследование?

При отсутствии филадельфийской хромосомы по данным стандартного цитогенетического исследования или его недоступности:

при первичной диагностике хронического миелолейкоза;
через 3 и 6 месяцев от начала терапии ингибитором тирозинкиназ – для оценки ответа предпочтительнее проводить молекулярное исследование (ПЦР), однако при его недоступности допускается выполнение FISH;
через 12 месяцев от начала терапии ИТК – если по результатам ПЦР не достигнут полный цитогенетический или большой молекулярный ответ;
всегда при неудаче лечения;
при появлении клинических или лабораторных признаков прогрессирования заболевания.

Дифференциально-диагностические критерии уровней ответа на терапию ингибиторами тирозинкиназ, а также их интерпретация в качестве оптимального результата или неудачи лечения рассматриваются по утвержденным единым международным рекомендациям.

Что означают результаты?

Помимо исследования наличия BCR-ABL в анализируемом материале, при обнаружении химерного гена указывается, в какой доле проанализированных клеток он выявлен, исходя из чего определяется уровень достигнутого ответа (однако необходим анализ не менее 200 ядер):

более 95% — отсутствие цитогенетического ответа;
65-95% — минимальный цитогенетический ответ;
36-65% — малый цитогенетический ответ;
≤ 35% — частичный цитогенетический ответ;
0% — полный цитогенетический ответ.

Частичный и полный цитогенетические ответы соответствуют выраженному снижению Ph-позитивных клеток и определяются как большой цитогенетический ответ.

Что может влиять на результат?

Нарушения в проведении отдельных этапов исследования, опыт и квалификация врача молекулярно-генетической диагностики.

Важные замечания

Последние рекомендации NCCN (National Comprehensive Cancer Network, США) допускают использование FISH в целях мониторинга ответа на терапию ингибиторами тирозинкиназ только при недоступности стандартного цитогенетического исследования или количественной полимеразной цепной реакции.
Целесообразность выполнения данного исследования, особенно в целях мониторинга ответа на проводимую терапию ингибиторами тирозинкиназ, необходимо согласовывать с лечащим врачом-гематологом. Равно как и интерпретация полученных результатов и принятие решения о продолжении или смене таргетного препарата должны проводиться исключительно доктором.
Если для взятия биоматериала для исследования предполагается проведение пункции костного мозга, необходимо предупредить врача о приеме каких-либо лекарств, влияющих на свертываемость крови.

Также рекомендуется

Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга
Мочевая кислота в сыворотке
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) общая

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог, терапевт, врач общей практики.

Литература

Wintrobe’s clinical hematology / editors, John P. Greer, Daniel A. Arber, Bertil Glader, Alan F. List, Robert T. Means Jr., Frixos Paraskevas, George M. Rodgers. – 13th edition. Lippincott Williams & Wilkins, 2014. Pages 1711-1712.

NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Chronic Myeloid Leukemia. Version 4.2018 – January 24, 2018. Available at www.nccn.org.
Гематология: национальное руководство / под ред. О. А. Рукавицына. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2015. С. 381-398.

Источник

Что такое BCR-ABL?

BCR-ABL — гибридный белок, продукт гибридного гена BCR-ABL1, формирующегося в результатереципрокной транслокации между хромосомами 9 и 22 (филадельфийская хромосома). BCR-ABL является конститутивно активной тирозинкиназой, ответственной за онкогенную трансформацию клеток (онкобелком). Постоянная активность этой тирозинкиназы делает клетку нечувствительной к воздействию факторов роста и вызывает её избыточную пролиферацию..

Белок BCR-ABL существует в трёх формах: p190, p210 и p230, в зависимости от места прерывания BCR-фрагмента.

BCR-ABL — мишень для нескольких специально разработанных ингибиторов, которые успешно применяются для лечения хронического миелолейкоза.

Ошибочное присоединение части хромосомы 9 (ген ABL) к хромосоме 22 (ген BCR) вызывает образование мутантной хромосомы ( её называют филадельфийской, в честь города, в котором она была обнаружена). Результат этого аномального процесса — новый ген, который называется BCR-ABL.

Новый ген вызывает синтез нового белка, приводящего к формированию злокачественных клеток крови в костном мозге.

BCR — ABL провоцирует:

95 % случаев хронического миелолейкоза
20 — 50% случаев острого В-лимфобластного лейкоза взрослых

Хронический миелолейкоз (ХМЛ)

Данная форма лейкоза характеризуется ускоренной и нерегулируемой пролиферацией преимущественно миелоидных клеток в костном мозге с их накоплением в крови.

У абсолютного большинства людей с этим диагнозом наблюдается «филадельфийская хромосома» (BCR-ABL). К факторам риска, способствующим появлению болезни, относятся воздействие бензола и высоких доз радиации.

Большинство пациентов узнают о своей болезни случайно, после получения результатов обычного анализа крови. При данном диагнозе отмечается резкое увеличение количества молодых лейкоцитов. В случае, когда результаты анализа крови вызывают подозрение на лейкоз, пациента направляют на биопсию костного мозга.

Ежегодно регистрируется 1-2 заболевших на 100 тысяч населения
Пик заболеваемости: 30 — 50 лет
Госпитализация не требуется
Стабильное состояние на протяжении 4-5 лет
Не более 5% бластных клеток в костном мозге и переферической крови
«Легкие» симптомы: утомляемость, потливость, потеря веса, аритмия
85 % пациентов к моменту постановки диагноза находятся в хронической фазе

Продолжительность хронической фазы зависит от того, насколько рано было диагностировано заболевание, а также от успешности проведённого лечения. Несвоевременное выявление болезни ведет к возникновению ускоренной стадии и острой форме лейкоза.

Лечение ХМЛ: таргетная (целевая) терапия ингибиторами тирозинкиназ: иматиниб, нилотиниб, дазатиниб и др. Данная терапия значительно улучшила показатели выживаемости.

Острый B-лимфобластный лейкоз (ОЛЛ)

Считается самым распространенным видом лейкоза у детей, но нередко встречается и у взрослых. В противоположность хроническому лейкозу развивается очень быстро. Термин «лимфобластный» означает, что незрелые клетки, составляющие основу болезни, являются лимфобластами, то есть предшественниками лимфоцитов.

Вероятность возникновения ОЛЛ несколько повышена у людей, проходивших лечение с использованием облучения или определенных видов химиотерапии.

Самые неблагоприятные прогнозы и сложное лечение болезни отмечается именно при наличии у больного мутантной филадельфийской хромосомы (BCR-ABL). Без лечения ОЛЛ приводит к гибели в течение нескольких месяцев или даже недель.

Вероятность достижения ремиссии:

80% дети
20% взрослые

Точечная мутация T315I в BCR-ABL области может вызвать резистентность пациента к назначаемым препаратам.

Следовательно, перед началом лечения следует подтвердить или опровергнуть наличие данной мутации.

Анализ крови bcr abl что такое

Анализ мутации T315l BCR_ABL

Остались вопросы?

Звоните нам по телефону федеральной горячей линии
8-800-333-45-38
или обращайтесь к нашим партнерам.

Источник

Метод определения
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Исследуемый материал
Цельная кровь

Ген BCR-ABL – химерный ген, образованный частями двух генов: BCR (22q11) и ABL (9q34.1) в результате обмена генетическим материалом между 22-й и 9-й хромосомами – реципрокной транслокации t(9;22)(q34;q11). Экспрессируется как единое целое с образованием патологического белка, обладающего многократно большей тирозинкиназной активностью, чем нормальный предшественник – тирозинкиназа ABL. Следствием такой трансформации является конститутивное (не зависящее от действия цитокинов) усиление роста и размножения клеток с блокированием их апоптоза.

Обнаружение транскрипта гена BCR-ABL является высокоспецифичным диагностическим маркером хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ). Кроме того, транслокацию t(9;22)(q34;q11) с образованием гена BCR-ABL обнаруживают при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ) (15-30% случаев ОЛЛ у взрослых и 2-10% – у детей), а также при остром миелобластном лейкозе (редко).

В зависимости от положения точки разрыва хромосом при транслокации t(9;22)(q34;q11) могут образовываться различные варианты транскрипта, продуцируемого с гена BCR-ABL. Белок BCR-ABL при этом может иметь молекулярную массу 190, 210 и 230 килодальтон и обозначается р190, р210, соответственно. У подавляющего большинства пациентов с ХМЛ (свыше 95%) обнаруживается белок р210. При этом наиболее частыми являются варианты транскрипта b3a2 (50% случаев) и b2a2 (45% случаев). У малого числа больных определяют варианты b3a3 и b2a3. Белок р190 (варианты е1а2 (более 95% случаев) и е1а3 (редко)) характерен для ОЛЛ, но может присутствовать у больных ХМЛ с BCR-ABL р210 как продукт альтернативного сплайсинга. В крайне небольшом количестве случаев ХМЛ образуется белок р230 (варианты е19а2 и е19а3).

Методы генетической диагностики онкогематологических заболеваний

Литература

Абдулкадыров К.М. Клиническая гематология: справочник. — СПб.: Изд. «Питер Принт». 2006:447.
Абдулкадыров К.М. Миелопролиферативные новообразования. — М.: Изд. «Литтерра». 2016:304.
Chasseriau J., Rivet J., Bilan F. et al. Characterization of the different BCR-ABL transcripts with a single multiplex RT-PCR. Journal of molecular diagnostics. 2004;6(4):343-347.
Arber D.A., Orazi A., Hasserjian R. et al. The 2016 revision of the World Health Organization classification of myeloid neoplasms and acute leukemia. Blood. 2016;127(20):2391-2405.

специальной подготовки не требуется.

диагностика хронического миелоидного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза.
мониторинг терапии и минимальной остаточной болезни.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Форма выдачи результата: качественный анализ.

Примеры результатов:

Ген BCR-ABL (р190) (t(9;22)) — не обнаружен;
Ген BCR-ABL (р210) (t(9;22))– обнаружен (вариант b3a2).

Артикул:
777732

Срок исполнения:

до 9 рабочих дней ?

Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Цена:
1 790 руб

В этом разделе вы можете узнать, сколько стоит выполнение данного исследования в вашем городе, ознакомиться с описанием теста и таблицей интерпретации результатов. Выбирая, где сдать анализ «Анализ химерного гена BCR/ABL — t(9;22), определение типа транскрипта BCR/ABL гена — ПЦР, качеств. » в Москве и других городах России, не забывайте, что цена анализа, стоимость процедуры взятия биоматериала, методы и сроки выполнения исследований в региональных медицинских офисах могут отличаться.

Источник

[18-091]
Хронический миелолейкоз. ПЦР анализ относительной экспрессии гена BCR/ABL — количественная RQ ПЦР

6510 руб.

Молекулярно-биологическое исследование, позволяющее количественно оценить содержание в клетках белкового продукта мутантного гена BCR-ABL, который играет основную роль в развитии хронического миелолейкоза.

Синонимы русские

Количественная ПЦР в реальном времени, транскрипт химерного гена BCR-ABL.

Синонимы английские

BCR/ABL1, mRNA Detection, Reverse Transcription-PCR (RT-PCR), Quantitative, Monitoring Chronic Myeloid Leukemia (CML); Tyrosine kinase inhibitor (TKI) therapy monitoring, PCR.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Хронический миелолейкоз является опухолевым заболеванием кроветворной системы, в результате которого в периферической крови наблюдается повышение уровня определенного вида лейкоцитов. Развитие заболевания связано с возникновением в стволовой клетке крови генетической аномалии, которая получила название филадельфийской хромосомы. У человека на девятой хромосоме локализуется ген ABL, который кодирует образование белка, стимулирующего рост и деление клеток. При хроническом миелолейкозе часть гена ABL перемещается на хромосому 22, такая мутация называется транслокацией. Место разрыва двадцать второй хромосомы, куда чаще всего встраивается перемещенная часть гена ABL, называется M-bcr (от английского major breakpoint claster region). В норме в этом участке хромосомы расположен ген BCR, кодирующий белок, функция которого в настоящее время достоверно не изучена, однако есть сведения, что он участвует в процессах деления и дифференцировки клеток. В результате транслокации на 22-й хромосоме образуется сливной, или химерный, ген BCR-ABL, при считывании информации с которого продуцируется белок молекулярной массой 210000 Да, обозначаемый р210. Иногда точка разрыва 22 хромосомы находится не в наиболее типичном месте (M-bcr), а ближе к центру хромосомы — в участке, который называется minor breakpoint claster region. Продуктом такого химерного гена является белок с уменьшенной молекулярной массой – р190. Реже точка разрыва находится на участке, расположенном дальше от центра хромосомы, при этом с мутантного гена синтезируется белок с большей молекулярной массой – р230.

От части гена ABL белок получает способности тирозинкиназы – внутриклеточного фермента, участвующего в передаче сигналов пролиферации, а часть, кодируемая геном BCR, способствует его активации. Таким образом, в результате описанной мутации на 22-й хромосоме формируется ген, белковый продукт которого – тирозинкиназа с повышенной активностью — активирует деление клеток с полной независимостью от внешних регуляторных механизмов. Лейкозные клетки становятся нечувствительными к сигналам самоуничтожения, приобретают способность выходить из костного мозга в периферическую кровь, не дожидаясь созревания. Обнаружение и количественное измерение белкового продукта химерного гена BCR-ABL используется для диагностики и оценки ответа на лечение при хроническом миелолейкозе.

Исследование проводится методом полимеразной цепной реакции. Принцип метода основан на обнаружении в исследуемом материале фрагментов ДНК химерного гена BCR-ABL, их избирательном синтезе с образованием большого числа копий. Копирование ДНК мутантного гена происходит после добавления в реакцию праймеров – последовательностей ДНК, аналогичных BCR-ABL. При этом праймеры должны быть идентичны той разновидности гена, содержание которой исследуется в образце, – для генов, кодирующих белки с разной молекулярной массой (р190, р210 и р230), нужны разные праймеры, так как их ДНК, хоть и совсем незначительно, но отличаются друг от друга. При проведении исследования в рамках первичной диагностики могут быть сделаны ПЦР на разные транскрипты гена, но в последующих измерениях целесообразно определять транскрипт, выявленный изначально, чтобы оценивать динамику его снижения. Одновременно с копированием мутантного гена производится копирование контрольного гена, исходное количество которого заведомо известно. Уровень мутантного гена рассчитывают относительно контрольного в процентах, в соответствии с международной шкалой экспрессии гена BCR-ABL (IS), или по уровню снижения в логарифмах (в 10 раз – 1 log, в 100 раз – 2 log) по сравнению с выявленным до начала лечения. При этом оценка по IS более предпочтительна.

Для чего используется исследование?

Для первичной диагностики хронического миелолейкоза, а также в процессе лечения ингибиторами тирозинкиназ для оценки эффективности терапии.

Когда назначается исследование?

При первичной диагностики хронического миелолейкоза, а после начала терапии ингибиторами тирозинкиназ — в установленные временные контрольные точки: каждые 3 месяца до того момента, как уровень относительной экспрессии BCR-ABL станет менее 1% (достижение полного цитогенетического ответа), далее в течение двух лет каждые три месяца, затем – каждые полгода.
При росте уровня транскрипта гена BCR-ABL на 1 логарифм (в 10 раз) после достигнутого уровня относительной экспрессии менее 0,1% (достижение большого молекулярного ответа) ПЦР должна быть повторно проведена через 1-3 месяца.

Что означают результаты?

Результат выражается в процентах – уровень экспрессии мутантного гена BCR-ABL относительно контрольного гена. Уровни достигнутого ответа дифференцируются следующим образом:

0,1% и менее – большой молекулярный ответ – снижение транскрипта в 1000 раз (или на 3 логарифма) от исходного;
0,001% и менее или не определяется – полный молекулярный ответ.

Важные замечания

Данное исследование имеет исключительную важность в мониторинге ответа заболевания на таргетную терапию, для максимально корректного сравнения его результатов между собой желательно проводить повторные исследования в одной и той же лаборатории.
При проведении повторных исследований желательно предоставлять результаты предыдущих измерений.

Также рекомендуется

Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
Стандартное кариотипирование клеток костного мозга
ПЦР анализ химерного гена BCR/ABL t(9;22)

Кто назначает исследование?

Гематолог, онколог, терапевт, врач общей практики.

Литература

Wintrobe’s clinical hematology / editors, John P. Greer, Daniel A. Arber, Bertil Glader, Alan F. List, Robert T. Means Jr., Frixos Paraskevas, George M. Rodgers. – 13th edition. Lippincott Williams & Wilkins, 2014. Pages 1711-1712.
NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Chronic Myeloid Leukemia. Version 4.2018 – January 24, 2018. Available at www.nccn.org.
Гематология: национальное руководство / под ред. О. А. Рукавицына. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2015. С. 381-398.

Источник