Алгоритм анализ крови на стерильность
Анализ крови на стерильность, который также называется – посев, или бак посев, позволяет выявить наличие в ней патогенной микрофлоры.
В норме, кровь здорового взрослого человека стерильна. Если же после взятия анализа была обнаружена микрофлора, то это означает что человек серьезно болен и нуждается в адекватном, комплексном лечении с использованием антибиотиков.
Зачем и когда его сдают?
С помощью этого метода устанавливают действительно ли имеет место серьезный патологический процесс, и исходя из полученных данных подбирают адекватные методики терапии.
Показаниями к выполнению бактериологического анализа на определение стерильности крови являются:
- подозрения на инфекционный эндокардит, остеомиелит, менингит;
- предполагаемый сепсис, в том числе у новорожденных;
- фурункулез – не является прямым показанием к выполнению данного исследования, но если гнойные высыпания покрывают большую площадь тела, расположены на лице, в непосредственной близости к головному мозгу, возрастает риск развития сепсиса или менингита, а это уже основание сдать кровь на стерильность;
- специфические симптомы у пациента, не поддающиеся стандартным схемам лечения, при этом определить причины патологического процесса не удается;
- осложнения после неудачной хирургической операции;
- периодическое повышение температуры при отсутствии явных причин;
- в теле пациента есть имплантат, напрямую контактирующий с биологическими средами – например, искусственный клапан миокарда;
- неподтвержденные онкологические заболевания;
- ВИЧ и СПИД – поскольку иммунная система не функционирует полноценно, требуется регулярно проводить плановое исследование крови для раннего обнаружения возможной инфекции, в частности, туберкулезной.
Также его рекомендуют сделать, если требуется установить внутренний катетер на продолжительное время. В таком случае врачу также нужно наверняка убедиться в том, что инфекция отсутствует, а если она есть – выявить ее возбудителя и устранить.
Иногда анализ назначают и беременным, так как в период вынашивания ребенка иммунитет женщины снижается по естественным причинам, она становится более уязвимой для инфекций различного рода. Правила подготовки к мероприятию и алгоритм выполнения те же.
На заметку: не нужно путать микробиологическое исследование крови на стерильность и на гемокультуру. Это два разных теста, основное отличие которых – в масштабности. Первый анализ показывает, присутствуют ли бактерии вообще в организме пациента. А гемокультура выявляет особенности конкретного вида микробов и позволяет провести контроль их активности.
Как подготовиться?
Результаты микробиологического исследования изменяются под влиянием внутренних и внешних факторов, поэтому важно минимизировать их воздействие посредством корректной подготовки.
Обычно, то как правильно подготовиться к тому или иному анализу, всегда информирует врач или медсестра, а в частных клиниках можно даже получить специальную памятку.
Но основные моменты правильной подготовки всегда одинаковы:
- За три дня до назначенной даты забора крови следует прекратить употребление алкоголя в любом виде и прием любых лекарственных средств. Если пациент должен принимать медикаменты постоянно по причине хронической патологии (например, сахарный диабет), самостоятельно отменять их нельзя, необходима консультация врача. Обычно дозировка снижается на 3-5 дней до минимальной безопасной.
- А также, за трое суток до назначенной даты следует отказаться от жареного, жирного, соленого с большим количеством специй, калорийных сладостей.
- Брать анализ следует строго натощак. Потому за 8 часов до процедуры прием пищи прекращается.
- В день мероприятия запрещается пить, есть и курить. Если по каким-то причинам пациент нарушил эти правила, то сдача биоматериала откладывается.
В том случае, если пациент нарушил правила и умолчал об этом, то анализ не покажет достоверной картины и тестирование придется делать повторно.
Как происходит забор крови?
Существуют строгие правила забора крови для бакпосева, нарушение которых приведет к искажению результатов.
Алгоритм забора следующий:
- Медицинский сотрудник заранее подготавливает шприц с одноразовой иглой и емкость для хранения и транспортировки собранного биоматериала.
- На предплечье пациента накладывается жгут – не имеет значения, из какой руки взять кровь, правой или левой. Медик будет оценивать состояние вены.
- Затем спиртовым раствором дезинфицируется внутренняя поверхность локтевого сгиба.
- После этого осуществляется непосредственно забор – всего потребуется не более 10 мл венозной крови.
- Из шприца ее тут же переливают в пробирку с питательной средой, которая не допустит изменений ее состава.
- Чтобы сохранить чистоту полученного сырья, манипуляции производятся над горелкой, затем емкость герметично закрывают прорезиненной пробкой и переносят в контейнер до момента проведения лабораторных исследований.
- В отдельных случаях, перед тем как взять кровь на анализ, внутривенно вводят адреналин. Это вещество вызывает спазм селезенки и выброс бактерий, что помогает определить их максимальное количество.
Внимание! Забор крови для подобного анализа у ребенка грудного возраста имеет свои особенности. Разница в том, что биоматериал берут из пальчика или пятки в объеме, не превышающем более 5 мл.
Как проводится сам анализ?
Посев крови на стерильность проводится в несколько этапов.
Сначала медик высеет полученный биоматериал в питательную среду, затем поместит пробы в термостат и будет выдерживать при 37-38 градусах несколько суток. На второй-третий день, колонии бактерий будут заметны на поверхности невооруженным глазом. Визуально лаборант сможет определить, к какому виду относятся бактерии.
После этого микроорганизмы повторно высеиваются в специальное приспособление – чашку Петри. По окружности размещаются бумажные диски, смоченные в различных антибактериальных препаратах. Чашка помещается повторно в термостат и выдерживается еще несколько суток.
Таким методом устанавливается чувствительность микробов к антибиотикам. Тот диск, на поверхности которого не будет обнаружено колоний микробов, содержит лекарство, способное уничтожить патогенную микрофлору. На основании полученных результатов составляется антибиотикограмма, которая будет использоваться в дальнейшем лечении.
Двухфазная система для выявления гемокультур предполагает использование двойной питательной среды. Обычно это жидкая среда, представленная бульоном, и твердая, представленная агаром. Дело в том, что некоторые микроорганизмы проявляют активный рост в условиях твердой среды, другие большую часть жизни проводят в жидкой субстанции. Поэтому, чтобы обеспечить быстрый рост бактерий, применяется двухфазная среда.
На видео можно более подробно узнать о анализе и порядке его проведения:
Что показывает анализ и как проводится расшифровка?
Как уже было сказано выше, этот анализ покажет наличие патогенной микрофлоры в биоматериале и ее тип.
А конкретно, он выявляет патогенные микроорганизмы следующих групп:
- стафилококки;
- стрептококки;
- синегнойная палочка;
- энтерококки;
- гонококки;
- споры плесени;
- дрожжевые грибки;
Даже в частной лаборатории, оснащенной всем необходимым современным оборудованием, анализ делается не менее 10 дней. Положительный или отрицательный результат будет известен уже через два-три дня, но, чтобы точно выявить виды патогенной микрофлоры, ее активность, потребуется поочередно вводить различные реагенты и компоненты и ждать реакции.
Такие сроки необходимы, чтобы бактерии успели дать рост. Скорость прорастания патогенных микроорганизмов зависит во многом от их вида. Если у пациента выраженная симптоматика острого воспалительного процесса, врач назначит ему после забора крови антибактериальные препараты широкого спектра действия. Но по-настоящему эффективное, адекватное лечение можно подобрать только после того, как будут получены полные результаты, указывающие на возбудителя инфекции.
Расшифровка и постановка окончательного диагноза проводится исключительно врачом.
Где сдать и сколько стоит?
Стоимость исследования формируется исходя из уровня клиники и лаборатории, в которых выполняется анализ. В районной поликлинике по направлению врача данная процедура выполняется совершенно бесплатно – при условии, что местная лаборатория располагает необходимым инструментарием и материалами.
Стоимость в частных клиниках будет зависеть от уровня медицинского учреждения и применяемых техник исследования (какие среды используются). Средняя цена данного анализа на территории РФ составляет 500 – 600 рублей. В столице и крупных городах стоимость может увеличиваться до 700 рублей.
Подводя итог
Проводить развернутый анализ крови на стерильность рекомендуется при подозрении на инфекцию бактериального генеза, это не обязательное исследование.
С помощью анализа устанавливается сначала наличие или отсутствие патогенных микроорганизмов в крови человека, затем их вид и активность. Также кровь сдается, чтобы проверить чувствительность пациента к тем или иным антибактериальным препаратам и составить эффективную схему лечения.
Достоверность результатов при условии соблюдения всех правил подготовки, забора и лабораторного исследования составляет 95%.
Автор статьи: Дмитриева Юлия (Сыч) — В 2014 году с отличием окончила Саратовский государственный медицинский университет имени В. И. Разумовского. В настоящее время работает врачом-кардиологом 8 СГКБ в 1 к/о.
Источник
Департамент здравоохранения Воронежской области
БУЗ ВО «Воронежская областная клиническая больница №1»
Исследование крови на стерильность
на современном этапе
Информационно-методическое письмо для врачей-бактериологов
Составители: главный внештатный специалист по микробиологической диагностике
департамента здравоохранения Воронежской области, заведующий бактериологической лабораторией
БУЗ ВО ВОКБ №1 Е.В. Бондаренко
Врач-бактериолог БУЗ ВО ВОКБ№1 Т.М. Лапа
Воронеж
2015
Кровь — один из наиболее распространенных образцов биоматериала, исследуемых в бактериологической лаборатории. Исследование крови на стерильность является важнейшим методом лабораторного исследования у пациентов с определенными показаниями.
Основные показания для посева крови:
- Лихорадка (более 38°C)
- Гипотермия (менее 36°C)
- Лейкоцитоз
- Гранулоцитопения
Бактерии проникают в кровь экзогенным (например, при травме) и эндогенным (из очага инфекции) путями.
Бактериемия: Наличие бактерий в крови, подтвержденное результатами посева
- Транзиторная бактериемия, когда происходит кратковременный выброс в кровь микроорганизмов под действием таких факторов, как физическая нагрузка, перегревание, переохлаждение. Подобные явления протекают обычно бессимптомно.
- Интермиттирующая бактериемия, когда существует локальный очаг инфекции, например пневмония или внутрибрюшной абсцесс.
- Продолжающаяся бактериемия проявляется внутрисосудистой
инфекцией, например, инфекционным эндокардитом или септическим тромбофлебитом.
Сепсис – это патологический процесс, в основе которого лежит реакция организма в виде генерализованного (системного) воспаления на инфекцию различной природы (бактериальную, вирусную, грибковую).
В последнее десятилетие в мире отмечается учащение случаев бактериемии и фунгемии. Это связано с развитием инвазивных медицинских вмешательств, старением населения, увеличением количества трансплантаций органов и костного мозга, увеличением количества более вирулентных и трудно поддающихся лечению микроорганизмов, более агрессивной внутрибольничной инфекцией.
Факторы риска, способствующие проникновению бактерий в кровяное русло и развитию бактериемии:
- внутривенные катетеры
- катетер мочевого пузыря
- любые инвазивные процедуры
- операционные вмешательства
- нейтропения
- терапия антибиотиками (эмпирическая), кортикостероидами, цитотоксическая
Гемокультивирование является в настоящее время «золотым стандартом» в диагностике септицемии
Принципы микробиологической диагностики
Точный диагноз устанавливается только при обнаружении возбудителей в крови пациентов. Важное условие — своевременный забор пробы. Для проведения анализа используют кровь непосредственно из венозного сосуда. Сбор пробы из постоянного внутривенного или внутриартериального катетеров допускается только в случаях подозрения на наличие катетер-ассоциированной инфекции или отсутствия возможности ее получения венопункцией.
- Лихорадка и озноб начинается примерно через час после попадания микроорганизмов в кровоток
- Чаще всего кровь забирается как можно скорее после приступа лихорадки или озноба при подозрении на инфекцию
- Забор крови должен осуществляться по возможности до назначения антимикробной терапии.
Объем крови – один из наиболее значимых факторов в повышении чувствительности гемокультивирования. Считается, что риск случайной контаминации 1 отдельно взятой пробы крови составляет 3% (0,03).
Тогда вероятность случайной контаминации одновременно 2 проб составляет: 0,03*0,03=0,0009= 0,09%. Поэтому более информативно исследование 2 и более проб каждая объемом не менее 10мл.
Рекомендуемое число отбираемых проб крови в зависимости от предполагаемого заболевания по МУ 4.2.2039-05Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории:
1) Острый сепсис, менингит, менингококоцемия, остеомиелит, артрит, острая пневмония, пиелонефрит 2 пробы из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда перед началом антибактериальной терапии
2) Лихорадка неясного генеза 4 сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов (двух участков сосуда), затем через 24-36 ч. еще 2 пробы
3) При подозрениях на наличие эндокардита и вялотекущего сепсиса: при обострении 2 пробы из двух сосудов в течение первых 1 — 2 ч подъема температуры тела (не на пике температуры!) до начала терапии; при подостром и вялотекущем течении сначала 3 пробы с интервалом 15 мин. и более. Если все пробы отрицательны, на вторые сутки после посева собирают еще 3
4) у пациентов с эндокардитами, получающими антибиотики, собирают по 2 отдельные пробы в течение трех дней
5) У больных, в комплекс терапии которых включены антибиотики, собирают 6 проб в течение 48 ч; пробы необходимо собирать непосредственно перед введением следующей дозы препарата
6) при лихорадке неясного генеза сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов, затем через 24-36 часов еще 2 пробы
Минимальный набор сред для посева крови согласно положениям Приказа 535:
“Двойная среда” — скошенный во флаконе 1,7-2% питательный агар (150 мл) и 150 мл полужидкой среды, приготовленной на питательном бульоне с добавлением 15 г глюкозы и 0,15 г агара.
“Среда для контроля стерильности” — стандартная тиогликолевая среда к которой добавляют 15-20 г дрожжевого экстракта и агар 4,25-5 г на 1 литр к среде добавляют 0,001 г резазурина в качестве индикатора анаэробиоза.
Необходимое оснащение для взятия крови:
- Флаконы с питательными средами.
- 70о этиловый спирт;
- 2% или 5% настойка йода
- венозный жгут
- резиновые (латексные, виниловые) перчатки
- спиртовка (только при использовании флаконов со средами, изготовленными в лаборатории)
Техника получения пробы крови. Сбор проб крови для посева производят 2 человека у постели больного или в процедурной.
— участок кожи над выбранным для пункции сосудом продезинфицировать: обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1 — 2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с; подождать, пока высохнет обработанный участок. Не допускается пальпировать сосуд после обработки кожи перед введением иглы;
— при работе с флаконами с двойной средой: стерильным шприцем собрать у взрослых 10 мл крови, у детей — 5 мл; над пламенем спиртовки открыть флакон; внести кровь во флакон из шприца, предварительно сняв иглу; обжечь горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки, закрыть флакон пробкой; осторожно, чтобы не замочить пробку флакона, перемешать его содержимое круговыми движениями.
Отобранный материал быстро доставляется в лабораторию. Образцы крови замораживать нельзя! Микроскопию мазков крови проводят при подозрении на паразитарные инфекции (малярия, трипаносомоз), при бактериальных инфекциях это нецелесообразно, так как единственная бактерия, обнаруживаемая в мазках,- Borreliarecurrentis. Посевы инкубируют при 37°С с ежедневным просмотром в течении 8 дней. При отсутствии видимого роста со всех сред кроме «двойной среды» среды для контроля стерильности делают высевы на кровяной агар и мазки на 3,5,8 дни. При отсутствия роста дают отрицательный ответ на 9-10 день. При наличии помутнения, образования хлопьев, крошек, необходимо произвести высев из флакона независимо от дня исследования.
Визуальные признаки роста гемокультур при посевах крови
Макроскопические | Возможные микроорганизмы |
Гемолиз | Стрептококки, стафилококки, Listeria spp., клостридии, Bacillus spp. |
Помутнение | Аэробные грам(-) палочки, стафилококки, Bacteroides spp. |
Газообразование | Аэробные грам(-) палочки, анаэробы |
Образование пленки | Pseudomonas spp., Bacillus spp., дрожжевые клетки |
Образование хлопьев | S.aureus |
Видимые колонии («дымчатые») | Стафилококки, стрептококки |
Причины отрицательных результатов:
— Локальная инфекция (защитные силы организма удерживают инфекцию в одном месте)
— Неактуальное время взятия материала (вероятность упустить интермиттирующую бактериемию )
— Слишком маленький объем полученного материала
— Прием антибиотиков пациентом
Идентификация выделенных бактерий при бактериемиях:
- Значимы и часто встречаются — S.aureus, S.pneumoniae, E.coli и др. энтеробактерии, P.aeruginosa, C.albicans
- Значимы — S.pyogenes, S.agalactiae, L.monocytogenes, N.meningitidis, N.gonorrhoeae, H.influenzae, B.fragilis группа, Candida spp, Cryptococcus neoformans
- Контаминанты или нет? (зависит от конкретных случаев)– КОС, зеленящие стрептококки, Propionibacterium acnes, Acinetobacter calcoaceticus, Clostridium spp., Corynebacterium spp., Bacillus spp
Дополнительные критерии в пользу клинической значимости изолята:
— Быстрое выделение культуры – в течение первых 48 часов
— Выделение монокультуры
— Выделение одного и того же вида микроорганизма в разных пробах
— Выделение одного и того же вида микроорганизма из крови и других локусов
Помимо ручных методов существуют методы автоматизированного культивирования крови, которые являются более современными, более чувствительными. Самая известная серия бактериологических анализаторов для посева крови на стерильность,- BDBACTEC.
Прибор Bactec предназначен для ускоренного обнаружения бактерий и грибов в клинических образцах крови. Образцы крови отбираются у пациентов и вносятся напрямую в оригинальные флаконы с питательной средой, после чего – по возможности незамедлительно – помещаются в рабочие станции приборов серии BD Bactec™ 9000. Наличие микроорганизмов в крови устанавливается с помощью высокочувствительной флуоресцентной технологии, основанной на индикации СО2, выделяемого в питательную среду растущими и интенсивно делящимися микроорганизмами. С помощью системы BD BACTEC 90% положительных результатов выявляются в первые 24 часа инкубации, что позволяет своевременно начать эмпирическую антибактериальную терапию либо внести изменения в действующую схему лекарственной терапии. Своевременная бактериологическая диагностика бактериемии значительно сокращает частоту возникновения септического шока и увеличивает выживаемость больных.
Флаконы для гемокультивирования выпускаются нескольких видов. Наиболее часто используются следующие:
- Флаконы со средой для культивирования аэробов
- Флаконы со средой для культивирования анаэробов
— содержат частицы латекса, адсорбирующие антибиотики из крови, а также способствующие лизису клеток крови и освобеждению внутриклеточных бактерий.
- Флаконы со средой для культивирования детской крови
— предназначены для исследования малого объема крови до 3 мл, также содержат частицы латекса
- Флаконы с селективной средой для выявления дрожжей и грибов
— содержат хлорамфеникол и тобрамицин для подавления роста сопутствующих бактерий, лизирующие вещества, способствующие освобождать из лейкоцитов фагоцитированные грибы.
Используется вакуумное взятие крови с использованием системы для забора крови игла-бабочка. Под действием вакуума кровь втягивается через иглу BD VacutainerTM напрямую из вены в пробирки BD VacutainerTM и флаконы BD BactecTM и сразу же смешивается с питательной средой.
Традиционно отбор проб крови осуществляется одномоментно в аэробный (BD BACTEC™ PLUS+ Aerobic/F) и в анаэробный (BD BACTEC™ PLUS+ Anaerobic/F) флаконы. Альтернативный набор складывается из: а) аэробного флакона и дополнительного аэробного; б) анаэробного и/или Mycosis IC/F, и/или Myco F/Lytic флаконов (оба типа флаконов – для культивирования гемокультур грибов).
Оптимальный объем крови для гемокультивирования
- Дети:
- Новорожденные 1-2 мл крови/флакон (допустимый для посева объём крови – 0,5-5 мл)
- Дети 2-5 мл/флакон
- Подростки 10-20 мл/флакон
- Взрослые:
Одномоментно 20 -30 мл (по 10 мл во флакон) крови 2 или 3 раза в течение 24 ч
ШАГ 1 |
|
ШАГ 2 |
|
ШАГ 3 |
|
| |
ШАГ 4 |
|
При правильном заборе крови контаминация составляет не более 2-3 % всех гемокультур. Использование наборов для забора крови BD VacutainerTM существенно снижает степень контаминированности культур.
При наличии роста микроорганизма во флаконе анализатор оповещает персонал лаборатории с помощью световой индикации на передней панели прибора, а также с помощью звуковой индикации. Таким образом, нет необходимости делать высевы из всех флаконов, высев делается целенаправленно из положительного флакона.
Объем исследований и микропейзаж при гемокультивировании в бактериологических лабораториях ЛПУ Воронежской области.
Общее количество проб крови для исследования на стерильность по Воронежской области составило 12515. В 2013г это число было гораздо меньше: 8406. Доля этих анализов по лечебно-профилактическим учреждениям показана в таблице:
Районные ЛПУ | 15,8% |
Областные ЛПУ | 59,8% |
Городские ЛПУ | 24,4% |
Общее количество положительных высевов из образцов крови по области 1245, что составило 9,95% , в 2013г 808, что составило 9,6%.
ЛПУ | Общее количество | Кол-во положительных анализов | Процент высеваемости |
Районные ЛПУ | 1987 | 160 | 8 |
Областные ЛПУ | 7436 | 769 | 10,3 |
Городские ЛПУ | 3092 | 316 | 10,2 |
Микропейзаж выделенных культур:
Наиболее часто из крови выделялись следующие культуры: S. аureus- 165, коагулазоотрицательные стафилококки- 639 (основная масса- S. epidermidis- 478), Enterococcus faecalis- 74, Pseudomonas sp- 59, Klebsiella- 54, E. coli-31, Enterococcus faecium 36. Среди грибов рода Candida чаще всего выделялись C. albicans и C. glabrata.
В небольшом количестве выделялись: Enterobacter-18, Ps. aeruginosa 20, Acinetobacter 17, Streptococcus spp 20.
В количестве от 2 до 5 выделялись такие культуры, как Str.viridans, Str. β-haemolyticus, Str pyogenes, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Candida tropicalis, Candida krusei.
Все бактериологические лаборатории в Воронежской области, за исключением двух, исследуют кровь на стерильность ручными методами. Бактериологические анализаторы «Бактек» имеются в бактериологических лабораториях Воронежской областной клинической больницы №1 и в лаборатории Перинатального центра 1к. В результате анализа микробиологического мониторинга за 2011-2014гг в этих лабораториях отмечается увеличение количества высеваемости культур микроорганизмов. До использования аппаратной технологии высеваемость микроорганизмов из крови в составляла в 2010-2012гг от 6 до 10%, при исследовании с помощью «BD Bactec 9050» в 2013г- 24,7%, в 2014г-26,9% у взрослых пациентов и у новорожденных в 2013гг 17,5%, в 2014г-20,3%.
Литература
1. «Руководство по медицинской микробиологии» под редакцией А.С. Лабинской, Н.Н. Костюковой, Москва, 2013г
2. «Методы клинических лабораторных исследований». Справочное пособие под редакцией В.В. Меньшикова. Том 3 Клиническая микробиология. М, 2009.
3. «Лаборатория» журнал для врачей №5 2014г
4. «Клиническая микробиология» П.Р. Мари, И.Р. Шей, краткое руководство, пер с англ., Москва, 2006г
5. Клиническая Микробиология и Антимикробная Химиотерапия
2013, том 15 (4).
Источник